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The complex model of Thermus thermophilus xylose isomerase (TtXI) with D-xylose was constructed, and molecular dynamics (MD) simulations were carried out at 300 and 360 K for 10 ns by NAMD2.5. The radius of gyration (Rg), subunit interactions, and residue flexibility were analyzed. The results show that residues 60-69, 142-148, 169-172, and 332-340 have high flexibility at 300 and 360 K. Residues with higher flexibility at 360 K than that at 300 K can mainly be divided into two groups: one locates in the helix-loophelix region consisting of residues 55-80 in catalytic domain; the other at subunit interfaces. The Rg of catalytic domain at 360 K shows 0.16 A higher than that at 300 K, but Rg of small C-terminal domain has no obvious difference. The results indicate that enhanced Rg of catalytic domain may lead to the intense motion of the active site of TtXI and promote the D-xylose isomization reaction. Eight hydrogen bonds and five ion pairs are reduced at subunit interfaces at 360 K compared with 300 K, that may be the main reason for the decrease in rigidity and increase in activity at high temperature of TtXI. This result also help to explain the cold-adaption phenomenon of TtXI E372G mutant reported previously. Our results reveal the relationship between temperature and structure flexibility of TtXI, and play an important role in understanding the thermostability of thermophile protein with multiple subunits. 相似文献
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高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法定量测定低聚木糖样品中的低聚木糖 总被引:2,自引:0,他引:2
建立了低聚木糖样品中的木二糖至木六糖等低聚木糖的高效阴离子交换色谱定量测定方法,并根据低聚木糖的聚合度与色谱保留时间的线性关系,对木七糖和木八糖的保留时间进行预测。采用CarboPacTM PA200阴离子交换柱(3 mm×250 mm),以醋酸钠和氢氧化钠为淋洗液进行二元梯度洗脱,脉冲安培法进行检测。结果表明,木二糖至木六糖在0.804~8.607 mg/L质量浓度范围内的线性关系良好,检出限为0.064~0.111 mg/L,定量限为0.214~0.371 mg/L。将该方法用于低聚木糖产品的检测,3个添加水平的加标回收率为84.29%~118.19%,相对标准偏差(n=3)为0.44%~14.87%。结果表明该方法适用于低聚木糖产品中有效成分的快速、高效分离和定量测定。 相似文献
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从Aspergillus niger NG1306菌株中扩增得到β-木糖苷酶基因anxyl, 与pPICZαA连接构建了表达载体pPICZαA-anxyl, 进一步在毕赤酵母KM71H中诱导表达获得了目的酶蛋白重组β-木糖苷酶(Anxyl); 并将其用于人参皂苷Rb3及C-Mx的生物转化及催化动力学参数表征. 研究结果表明, Anxyl可将人参皂苷Rb3和C-Mx分别转化为人参皂苷Rd和C-K. 酶学性质研究表明, 该酶最适反应pH=2.5, 最适反应温度为35 ℃; 在pH=2.0~5.0, 20和30 ℃条件下其具有较好的稳定性, Mg2+对酶活具有促进作用. Anxyl对葡萄糖和乙醇有较好的耐受性, 其催化对硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷(pNPX)、 人参皂苷Rb3和C-Mx水解的米氏常数(Km)值分别为3.1, 1.55和1.04 mmol/L, 酶的最大反应速率(Vmax)分别为1.9×102, 0.8×103和8×103 mmol/min, 酶的转换数(Kcat)值分别为5.55, 0.17和1.85 s-1, 表明该酶对天然底物Rb3和C-Mx具有更高的亲和力. 相似文献
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提出了一种高效的均相催化木糖制备糠醛的方法,探讨了水/二甲基亚砜(DMSO)均相体系中不同类型的无机盐对催化木糖制备糠醛的影响.结果表明,氯盐较硫酸盐和硝酸盐表现出较高的催化活性,其中以SnCl4的催化效果最高.且它与LiCl复配时催化性能更高.当SnCl4的摩尔分数为0.8时,催化效果最好,糠醛收率达56.9%.反应条件优化实验发现,当催化剂与木糖的摩尔比为0.5:1,固液比为1:20,水与DMSO体积比为5:5时,于130℃下反应6h,糠醛收率达63%. 相似文献
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从中药升麻的地道药材之一兴安升麻[Cimicifuga dahurica(Turcz.) Maxim.]的根茎中分得两个新的环菠萝蜜烷型三萜双糖苷, 分别命名为升麻苷C(cimiside C,1)和升麻苷D(cimiside D,2)。它们的结构经IR, MS, 1^H和13^C NMR, 1^H-1^H COSY,1^H-1^H TOCSY, 13^C-1^H COSY, 13^C-1^H COLOC及DEPT测定, 确定为(23R, 24R)-24-异乙酰氧基-shengmanol-3-O-β-D-吡喃木糖-15-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和(23R,24R)-24-异乙酰氧基-shengmanol-3-O-β-D-吡喃来苏糖-15-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。 相似文献
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蔗渣水解液及发酵液中糖及糖醇的高效液相色谱分析 总被引:8,自引:0,他引:8
采用HPLC测蔗渣水解液及发酵液中木糖、木糖醇等。在SpherisorbNH2柱上用乙腈+水(80+20)分离,示差折光检测器检测, 15min内同时分离测定木糖、木糖醇及其它五种糖。线性范围在 0~7.5 g/L,相对偏差小于4.1%。 相似文献