靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术快速筛选黄藤总生物碱中乙酰胆碱酯酶抑制剂

采用靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术(Target molecule affinity-LC-ESI-MSn)快速筛选黄藤总生物碱中能够抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,共筛选出12种具有潜在抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分,并鉴定了6种成分,分别为黄藤素(Palmatine)、小檗碱(Berberine)、药根碱(Jatrorrhizine)、巴马汀红碱(Palmatrubine)、7,8-二氢-8-羟基小檗碱(7,8-Dihydro-8-hydroxyberberine)、Groenlandicine,结合体外酶学实验对这6种化合物进行了活性验证实验.结果表明,黄藤素抑制活性最强,其抑制作用强于阳性对照药盐酸多奈哌齐,说明黄藤素具有开发成抗阿尔茨海默症药物的潜力.本方法简单、快速、准确地从复杂的中药提取物中筛选出具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,适用于复杂体系中的高通量筛选.     

一种新颖海洋微生物酯酶的功能鉴定及其在 D-乳酸甲酯制备中的应用

手性药物不同对映体往往表现出截然不同的生理活性和毒性,为了减少有毒副作用的对映体,并降低其生物活性,光学纯手性药物的合成一直是制药行业的研究热点.由于手性药物中间体是合成手性药物的重要构建模块,因此手性药物中间体的合成至关重要.手性乳酸及其酯是合成各类药物、农药和聚合物的重要中间体,在制药工业和材料工业中手性乳酸及其酯的制备非常重要.手性乳酸及其酯可以通过传统的有机化学合成和生物酶催化合成,通过有机化学合成法往往很难得到光学纯度较高的手性乳酸及其酯,而生物酶催化法可以得到光学纯的手性乳酸及其酯,同时避免了有机化学合成所导致的金属残留和环境污染等问题.生物酶法合成光学纯的乳酸及其酯可以通过脱氢酶不对称还原酮的前体得到,然而生物催化使用脱氢酶法需要价格昂贵的辅助因子,如 NADH和 NADPH.而另外一种生物催化方法是通过利用酯酶或者脂肪酶不对称水解外消旋的酯,从而得到光学纯度较高的手性中间体.目前市场上的 L-乳酸甲酯价格不太昂贵,因为 L-乳酸甲酯可以直接通过大发酵的方法取代有机化学法和酶法直接得到.然而 D-乳酸甲酯不能使用廉价的发酵法直接得到,因而其价格昂贵.生物酶催化法可能会成为制备 D-乳酸甲酯的主要方法,因为利用生物酶法可以得到光学纯度较高的 D-乳酸甲酯.本文从西太平洋深海来源的微生物Pseudomonas oryzihabitans HUP022中克隆并异源表达了一种新颖酯酶 PHE14.通过对酯酶 PHE14的酶学性质鉴定表明,酯酶 PHE14的最适反应底物为对硝基苯酚乙酸酯(C2),最适 pH为9.0,最适温度为60°C. PHE14催化最适反应底物 C2的活性达到293.07 U/mg,Vmax和Km分别为200μM/(mg·min)和0.24 mmol/L.酯酶 PHE14对多种有机溶剂、表面活性剂和金属离子都具有非常好的耐受性.深海微生物酯酶 PHE14对高浓度 NaCl具有很好的耐受性,在4 mol/L NaCl存在下,相对酶活力为71.4%.同时,酯酶 PHE14能够催化消旋乳酸甲酯的不对称水解反应制备重要的手性化工产品— D-乳酸甲酯.与先前的一些酯酶拆分的报道不同,有机溶剂和表面活性剂对酯酶 PHE14催化的动力学水解反应没有促进作用.而且,本研究是首次通过酶动力学水解拆分反应制备光学纯的 D-乳酸甲酯.经过实验优化,在 pH 9.0和30°C的条件下,反应产物 D-乳酸甲酯的对映体过量值和产率分别为99%和88.7%.深海微生物酯酶 PHE14作为一种绿色生物催化剂,在多种工业的不对称合成中都具有非常好的应用潜力.     

具酯酶活性的温敏型分子印迹微凝胶

以双醛葡聚糖-组氨酸偶连物(PAD-His)为功能大单体、过渡态类似物p-硝基苯磷酸酯(NPP)为模板分子、Co2+为中心离子,采用油包水反相乳液法首次制得具有酯酶活性的温敏型分子印迹微凝胶(MIGs).催化水解实验表明,MIGs催化活性受模板分子用量的影响,并可通过温度进行有效调控.MIGs催化p-硝基乙酸苯酯(NPA)水解反应行为可用Michaelis-Menten方程进行描述,其最大催化水解反应速率和Michaelis-Menten常数分别为2.04×10-8mol/h和2.2×10-5mol/L,且具有较好的催化选择性.     

高效液相色谱法测定小麦籽粒中杀雄嗪酸残留

建立了高效液相色谱法(HPLC)切换波长检测小麦籽粒中化学杂交剂SQ-1主成分杀雄嗪酸残留的方法。采用改进的QuEChERS方法进行样品前处理,以80%乙醇作为提取溶剂,以PSA(primary secondary amine,N-丙基乙二胺)作为分散净化剂进行分散固相萃取净化。采用Wondasil C18不锈钢柱,以甲醇-0.1%乙酸水溶液(70∶30,V/V)为流动相,流速:1.0 mL/min,切换检测波长程序:0.01～5.00 min,283 nm;5.01～6.30 min,220 nm;6.31～10.00 min,283 nm。结果表明:杀雄嗪酸在0.40～80.00 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,在3个添加水平(1.00,8.00和60.00 mg/kg)范围内,平均加标回收率在82.12%～93.20%之间,相对标准偏差为1.1%～1.9%,检出限为0.020 mg/L。     

Cobb-Douglass生产函数在小麦产量因素分析中的应用

本文用Ｃｏｂｂ－Ｄｏｕｇｌａｓ（库伯—道格拉斯）生产函数对烟农１５号小麦的产量因素进行了弹性分析。分析结果表明，函数模型ｙ＝１．００６１ｘ０．０４０２１·ｘ－０．１１９６２·ｘ０．６９８４３·ｘ０．５６１９４·ｘ０．５４１６５可以提供较多的内涵专业信息。分析结果对烟农１５号小麦的丰产栽培有一定的指导意义。     

小麦根细胞中Ca~(2+)跨液泡膜转运的研究

用~(45)Ca~(2+)放射性标记实验证明,在小麦根细胞中,Ca~(2+)进入液泡的转运依赖于膜内外的Na~(2+)梯度。Na~(2+)/Ca~(2+)逆向转运系统对温度敏感,可被高浓度Ca~(2+)饱和,Ca~(2+)转运速度受二价和三价阳离子,如Cu~(2+)、Cd~(2+)和La~(3+),抑制。TritonX-100破坏Na~(2+)梯度,导致Ca~(2+)转运速度减慢或完全停止。     

G-蛋白与光敏胞质雄性不育小麦育性转换关系

用孔雀绿定磷法测定在不同光照条件下 ,光敏胞质雄性不育小麦育性转换期叶片和幼穗中 G-蛋白的GTPase活性变化 .结果表明 :在 16 h/d光照 (L D)下 ,(牡山羊草 )白皮 2 2 4[(Aegilopsjuvenalis) baipi2 2 4]和 (牡山羊草 ) NPFP[(Aegilops juvenalis) NPFP]在光敏感期 ( )内 G-蛋白的 GTPase活性分别高出 10 h/d(SD)处理下的30 %和 6 0 % .光敏期后 ,幼穗的 GTPase活性也表现出 L D处理高于 SD处理 .这种差异表明 :G-蛋白的 GTPase活性变化与光敏胞质雄性不育小麦的育性转换有关系 .     

小功率高频超声辐射对科路加小麦后代的主要性状变异

应用超声辐射育种的实验研究,是近几年来超声农业应用研究的较新课题.本文是采用小功率高频超声照射科路加小麦当年收获的种子和收获后存放一年的种子,进行了四年田间实验.从小麦的早熟性和主要数量性伏变异效应差异方面,进行了对比观测和统计分析,初步获得高频(750千赫)超声对科路加小麦M_2—M_3代具有早熟现象(提早抽穗4—6天),M_4代的单株结实力和穗部性状,具有较明显的超亲变异效应.并在迭加超声照射的后代中,出现有全面超亲的优异株系.这为超声辐射育种研究的进一步开展,可提供参考.     

固氮根瘤菌(Azorhizoboium)在人工诱发小麦类根瘤中的固氮作用

用低浓度类似于植物生长激素吲哚乙酸的合成物2,4-二氯苯氧乙酸(2,4,-D)处理小麦根部能诱发瘤状结构(类根瘤),结瘤小麦植株生长不受2,4-D处理影响。这些类根瘤可被从热带豆科植物毛萼田菁(Sesbania rostrata)茎瘤中分离的耐氧茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)侵染,使类根瘤内的细胞间隙和细胞内有大量菌体增殖,有茎瘤固氮根瘤菌拓殖的类根瘤不仅能还原乙炔,而且还能将固定的氮素转移给植株,向结瘤小麦提供16—23％的氮素。     

高效液相色谱法测定小麦中残留除虫脲

建立一种以高效液相色谱技术为基础的测定小麦中残留除虫脲分析方法.目标农药经乙腈提取,C18柱色谱分离,以乙腈-水(体积比为60∶40)作流动相,流速为1 mL·min-1,用紫外检测器检测,波长为254 nm,外标法定量.在0.2～20 mg·L-1范围内,除虫脲标准工作溶液的色谱峰高与质量浓度呈线性关系,相关系数为0.999 9.小麦中除虫脲的加标回收率为89.4%～90.9%,相对标准偏差为2.37%～4.15%,检出限(S/N=3)为0.02 mg·kg-1.