固定化嗜热酯酶催化合成己酸乙酯

利用帆布固定化的嗜热酯酶APE1547在有机介质中催化已酸与乙醇完成酯化反应合成己酸乙酯.最佳反应条件为:c(己酸)=200 mmol·L-1,n(乙醇):n(已酸)=1.2:1.0,正己烷20 mL,加料速度0.4 mL.min-1,反应温度65℃,转化率85.2%.     

离子液体固定化材料在固相萃取中的应用研究进展

离子液体是由阴、阳离子组成的低温熔融盐,几乎没有蒸汽压,具有稳定性好、溶解能力强、结构可设计、导电性好等优良性能.离子液体作为一种广受关注的新型“绿色溶剂”,具有代替传统有机溶剂的潜力,其制备方法和应用范围研究日趋完善和多样,已广泛应用于催化化学、光电化学、材料化学和分析化学等领域.离子液体通过功能化导向设计后,可以将...     

脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯的反应动力学

对脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯反应的动力学进行了研究,根据乒乓机制和双底物抑制的特性建立了反应速率方程.反应时间常数(tR)和扩散时间常数(tD)的计算结果表明,酯化反应速率未受到明显的限制.反应速率方程可以很好地预测实验结果,由非线性拟合得到的动力学参数中,乳酸(A)和乙醇(B)的抑制常数分别为KiA=10.7mmol/L和KiB=275.0mmol/L.这说明乳酸作为短链极性脂肪酸,对酶的失活作用远大于乙醇.乳酸在微液层中聚集并产生了使酶失活的低pH值环境,同时在酯化反应中存在竞争性抑制作用.     

羰基咪唑法固定化pH梯度毛细管等电聚焦电泳用于蛋白质分离

本文以N,N'-羰基二咪唑作为连接臂,将两性电解质(CAs)与毛细管内壁进行偶联.在电场作用下,CAs在毛细管内按照等电点次序依次分开,再通过与羰基二咪唑的化学键合,形成固定化pH梯度.该方法操作简单,适用于两步法毛细管等电聚焦分离蛋白质等两性生物大分子.考察了对血红蛋白、牛血清白蛋白及胃蛋白酶三种蛋白质混合样品的分离,证明该方法可行.     

动态固定化方法制备微酶反应器研究初探

以固定化人工膜为固定相,胰蛋白酶为固定靶蛋白,利用生物功能化色谱的方法,制备固定化微酶反应器,并与HPLC-MS/MS技术联用,检测目标蛋白牛血清白蛋白、肌红蛋白和细胞色素C的酶解效率.实验初步证明,所制备的新型微柱酶解器具有活性高、稳定性高、催化效率高、酶活性持久、快速再生及操作简单等优点.     

微波辐射高效共价固定青霉素酰化酶

为提高青霉素酰化酶的共价固定化效率, 在微波辐射条件下将酶蛋白共价固定于介孔泡沫硅(MCFs)的孔道中. 通过正硅酸四乙酯水解缩合制备介孔泡沫硅, 再于微波辅助下将青霉素酰化酶共价固定在其孔道中. 以固定化酶相对活力和活力回收为指标, 考察了加酶量、固定化温度、微波辐射时间等条件对酶固定化效率的影响. 实验结果表明: 当加酶量为60 mg/g, 固定化温度为20 ℃, 微波辐射140 s, 固定化酶相对活力达到178.1%, 表观活力为1191.3 U/g(以湿重计). 与常规方法相比, 微波辅助固定化酶时, 固定化酶相对活力提高34.5%, 固定化时间亦大幅缩短至数分钟, 这为青霉素酰化酶的高效共价固定化提供了一条新的途径.     

少量离子液体对有机相R.miehei脂肪酶催化合成辛酸戊酯的影响

研究了疏水性离子液体[BMIM][PF6]对脂肪酶R. miehei有机相催化合成辛酸戊酯反应的影响,并结合荧光发射光谱分析R. miehei构象变化与酶活性表达的关联。结果表明,该酯化反应在饱和烷烃中的初速度比在芳烃中的大,且当溶剂logP为1.5～3.5时,反应初速度随logP的增加而降低。在不同有机溶剂中,加入占辛酸质量1%的[BMIM][PF6]均导致反应初速度降低15%左右,降低幅度几乎不与溶剂种类有关。表明[BMIM][PF6]对该反应的影响与所在溶剂系统无关,而只与离子液体的加入有关。[BMIM][PF6]加入量为辛酸质量1%～3%时,以壬烷为溶剂时的反应初速度随[BMIM][PF6]加入量的增加而降低,进一步表明离子液体的加入量是影响反应初速度的重要因素。荧光光谱分析表明,酶活性的表现与酶分子的构象变化有一定的相关性。     

胰蛋白酶交联聚体的制备及性质研究

交联酶聚体(CLEA)是一种新型的无载体固定化技术. 以胰蛋白酶为模型体系, 系统地研究了CLEA技术的制备工艺、应用条件、稳定性及结构形貌. (1)在制备工艺中考察了各步骤对CLEA酶活保留的影响, 重点分析了沉淀剂浓度、类型的影响, 结果表明100%乙醇是较为理想的沉淀剂; (2)在应用条件确定中测定CLEA的最适催化温度为70 ℃, 最适催化pH为9.0, 并解释了温度-活性、pH-活性曲线的漂移现象; (3)稳定性研究结果表明CLEA技术大幅提高了胰蛋白酶的热稳定性、溶剂稳定性, 且无酶泄漏; (4)在形貌表征中分别利用扫描电子显微镜、光学显微镜和激光粒度分析对CLEA的微观结构进行了多尺度研究, 着重讨论了其独特结构与优良特性间的关系. 本文所得结论为胰蛋白酶CLEA的应用提供基础数据, 并为CLEA技术应用于其它酶种提供参考.     

双重包埋激活脂肪酶内花凝胶微球的制备与表征

首先利用聚乙二醇8000(PEG8000)将脂肪酶激活为开放构象(PEG-Lip),再将PEG-Lip与Ca₃(PO₄)₂共结晶制得Ca₃(PO₄)₂@PEG-Lip晶体花,然后将晶体花包覆于海藻酸钙(CA)凝胶(Gel)微球中,制得一种双重包埋激活脂肪酶的内花凝胶微球CA-Gel@Ca₃(PO₄)₂@PEG-Lip.该微球呈白色椭圆状,直径约2 mm.利用扫描电子显微镜(SEM)、X射线光电子能谱(EDS)、共聚焦显微镜(CLSM)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)表征了其微观形貌和组成,发现脂肪酶被包埋在Ca₃(PO₄)₂晶体中,形成的Ca₃(PO₄)₂@PEG-Lip晶体花被包覆于海藻酸钙凝胶微球内的网络中.CA-Gel@Ca₃(PO<...     

羧基功能化Fe3O4固定化酶反应器的构筑及性能研究

对固定化酶的载体进行功能化修饰,通过改善载体和酶的界面连接可使酶分子在载体表面形成高度有序的二维排列,从而提高酶的催化活性和操作稳定性.用柠檬酸修饰的Fe₃O₄磁性纳米粒子(CA-Fe₃O₄)易于磁性分离且表面富含羧基,可作为一种优良载体通过吸附法固定化氯过氧化物酶(CPO)构筑CPO@CA-Fe₃O₄酶反应器、共固定化CPO和葡萄糖氧化酶(GOx)构筑GOx&CPO@CA-Fe₃O₄级联酶反应器.将酶反应器应用于催化氧化结晶紫染料的脱色时,两种酶反应器均显示出良好的催化活性、对底物的亲和性与专一性、热稳定性,在实际水样中也有良好的应用效果.与CPO@CA-Fe₃O₄相比, GOx&CPO@CA-Fe₃O₄酶反应器因级联反应中H₂O₂的原位产生而表现出更优异的催化性能...