叶酸受体靶向肿瘤细胞纳米探针的制备及其光谱分析

叶酸受体在正常组织上表达很少,而在上皮源性的恶性肿瘤细胞膜表面高度表达。文中以叶酸为稳定剂和包裹剂,以硼氢化钠为还原剂,简单快捷地制备出叶酸包裹的纳米金粒子(folic acid protected gold nanoparticles,FA-GNPs)作为靶向肿瘤探针。紫外-可见吸收光谱测量,透射电镜成像、X射线光电子能谱分析以及细胞结合试验都表明,这种纳米探针粒径分布在3～5nm之间,体系均一、稳定,而且在高盐环境(3.5%NaCl溶液)和高速离心(25 000r.min-1)下均不会发生聚沉,在肿瘤细胞检测等领域具有应用潜力。     

柯萨奇-腺病毒受体在扩张型心肌病患者外周血白细胞表面的表达及意义

目的观察柯萨奇-腺病毒受体（CAR）在扩张型心肌病（DCM）患者外周血白细胞表面的表达及意义。方法选择DCM患者50例作为观察组,同期选择30例正常体检者作为对照组。入选后分别采用流式细胞术（FCM）检测外周血白细胞表面CAR表达水平;RT- PCR技术测定柯萨奇B组病毒-核糖核酸（CVB- RNA）表达;ELISA法检测CVB抗体效价。在客观比较病毒检测方法的同时,分析CAR在DCM患者中的表达及意义并探讨FCM在临床病原学检测中的价值。结果（1）经FCM技术检测,观察组外周血白细胞表面CAR表达水平较对照组升高（P＜0.01）,观察组CVB- RNA阳性22例（44.0%）,对照组阳性6例（20.0%）,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组CVB抗体阳性32例（64.0%）,对照组阳性10例（33.3%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）CVB- RNA阳性者中外周血白细胞表面CAR表达水平较阴性者明显升高（P＜0.01）;22例CVB- RNA阳性者中CVB抗体全部阳性,而28例CVB- RNA阴性患者中CVB抗体阳性者亦有16例。结论外周血白细胞表面CAR高表达的DCM患者可能存在病毒持续感染;FCM技术检测白细胞表面CAR表达水平可以作为DCM患者病毒感染的定量指标。     

高血压患者运动血压与高敏C-反应蛋白和脉搏波传导速度的相关性分析

目的观察原发性高血压患者运动时血压水平与高敏C反应蛋白（hs- CRP）和踝臂脉搏波传导速度（BaPWV）的相关性。方法选择高血压病1、2级患者共80例,均行血脂、血糖、hs- CRP和BaPWV检测,然后所有受试者均接受运动平板试验,分别测量运动前、运动亚极量、运动后的血压情况,按照运动高血压的标准,将受试者分为运动高血压组（H组）和运动血压正常组（N组）,比较两组间收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、脉压（PP）、hs- CRP和BaPWV等指标,以及运动血压水平与hs- CRP、BaPWV的相关性。结果 H组hs- CRP浓度和BaPWV值[（8.42±3.82）mg/L、（19.84±8.13）m/s]均高于N组[（6.64±4.12）mg/L、（15.71±9.24） m/s]（均P＜0.05）,并与运动亚极量时SBP、PP水平具有相关性（hs- CRP与SBP、PP,r=0.26、0.25,均P＜0.05;BaPWV与SBP、PP,r=0.29、0.36,P＜0.05或0.01）。结论运功高血压患者较运动血压正常者炎症反应和动脉硬化程度更明显,对运动高血压的早期发现和积极干预,可能在一定程度上能改善高血压患者的预后。     

咳嗽变异性哮喘患儿白三烯水平与白三烯受体拮抗剂疗效的相关研究

目的探讨不同白三烯（LT）水平的咳嗽变异性哮喘（CVA）患儿接受白三烯受体拮抗剂（LTRA）治疗后体内LT水平变化与临床疗效的关系。方法以本地300例同年龄儿童所测定的尿LTE4值（25.17±14.26）ng/L作为基础对照,将使用LTRA孟鲁司特治疗的67例CVA患儿按LTE4水平是否高于基础对照水平的2SD,分成LTRA-高（H）组25例和LTRA-低（L）组42例,治疗1个月后观察尿LTE4水平变化和临床疗效;采用相同方法将使用吸入糖皮质激素（ICS）氟替卡松治疗的60例患儿分成ICS-H组20例和ICS-L组40例进行对照。结果所有CVA患儿尿LTE4水平与基础对照相比均有统计学差异（均P＜0.05）;在接受2种不同方法治疗1个月后,LTRA-H组、LTRA-L组和ICS-H组患儿尿LTE4水平均有明显下降（均P＜0.05）,但ICS-L组无明显变化（P＞0.05）。LTRA组与ICS组总体疗效相当（P＞0.05）;LTRA-H组疗效优于LTRA-L组（P＜0.05）,LTRA-L组与ICS-H组、ICS-L组疗效均无统计学差异（均P＞0.05）。结论 CVA患儿采用LTRA和ICS治疗总体疗效相当;体内LT水平与LTRA临床疗效密切相关,LT水平高者疗效优于低者;尿LTE4检测可以作为临床选用LTRA的指标。     

受体型酪氨酸激酶变异体对结肠癌细胞侵袭能力影响的研究

目的研究受体型酪氨酸激酶变异体RON△160表达对结肠癌细胞迁移、浸润能力的影响.方法将携有受体型酪氨酸激酶RON变异体RON△160 cDNA的质粒转染入结肠癌细胞株RKO细胞,挑选稳定转染克隆,以过河实验和Transwel 趋化运动实验检测细胞迁移能力;Matrigel基质浸润实验检测细胞浸润能力,Western blot检测E-钙粘连蛋白(E-cadherin)表达的变化.结果转染RON△160后RKO细胞的过河时间为(38.00±1.63)h,明显短于未转染组与载体对照组的(69.50±2.52)h与(72.00±1.63)h,差异均有统计学意义(均P<0.05).转染后RKO细胞的穿膜能力显著增强,穿膜细胞数为(59.22±6.67)个/HP、未转染组为(25.90±4.56)个/HP、载体对照组为(28.33±6.75)个/HP,差异均有统计学意义(均P<0.05).转染RON△160后,RKO细胞中E-cadherin表达降低(P<0.05).结论 RON△160转染可以降低E-cadherin表达,降低肿瘤细胞间的黏附性,增加结肠癌细胞RKO的移动、浸润能力.RON△160的表达可能是结肠癌浸润、转移的机制之一.     

1,3-双(1-苯基-1H-四唑-5-巯基)-乙酰苯腙钳形受体对卤素阴离子的识别机理

采用密度泛函B3LYP(Becke, three-parameter, Lee-Yang-Parr)和HF(Hatree-Fock)方法, 从理论上探讨了1,3-双(1-苯基-1H-四唑-5-巯基)-乙酰苯腙(DAPHZ)钳形受体对卤素阴离子的识别机理,结果发现DAPHZ受体以其钳形结构中的-N-H基团与卤素阴离子间形成双侧红移氢键进行识别. 经BSSE校正后DAPHZ•••F-, DAPHZ•••Cl-和DAPHZ•••Br-体系的分子识别相互作用能ΔECP分别为-327.5,-163.5和-148.3 kJmol-1, 说明钳形DAPHZ受体对F-具有最好的识别能力. 此外, 采用自然键轨道(NBO)计算, 相关H原子化学位移计算及分子中原子(AIM)等理论分析了识别体系中红移氢键的电子结构和性质, 结果表明APHZ受体对卤素阴离子的识别能力的相对顺序为DAPHZ•••F- >> DAPHZ•••Cl- ≈ DAPHZ•••Br-.     

三种蛋白和黄酮结合物中氢键与黄酮稳定性相关性分析研究

运用三维荧光光谱、紫外可见分光光谱以及傅里叶红外光谱等手段研究了蛋白与黄酮分子的相互作用,并结合相关性分析的统计学手段分析了蛋白与黄酮分子相互作用方式对黄酮稳定性的影响。实验结果表明,疏水相互作用是三种蛋白与黄酮分子之间主要的作用力,在牛血清白蛋白与黄酮的结合中有氢键的参与,同时发现在牛血清白蛋白体系中黄酮的稳定性明显增强。通过相关性分析证明蛋白对黄酮稳定性的提高与两者之间的分子间氢键有关,氢键结合作用越强蛋白对黄酮保护越明显。     

高效液相色谱法研究沙丁胺醇与红细胞膜表面β2肾上腺素受体结合

建立了同时检测红细胞混悬液中沙丁胺醇（Salbutamol,SA）与特布他林（Terbutaline,TE）的高效液相色谱法并用于沙丁胺醇与红细胞膜β₂受体-配体结合实验研究。通过1500r/min离心5min的方法将试样中游离SA和TE与含大分子的受体-药物复合物的红细胞分离,以10mmol/L磷酸二氢钾溶液（其中含0.2%三乙胺,用0.5mol/L磷酸调pH 5.1）-甲醇（90:10,V/V）为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为276nm;柱温30℃;进样量20μL。SA在2.0—20.0ng/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9965;TE在0.20—20μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9971。样品测定SA和TE的重复性RSD分别为1.26%和0.94%;检出限分别为0.5ng/mL和1.0ng/mL。测定结果显示,SA的非特异结合量和特异结合量均随SA加入量的增加而增大。TE和SA与β₂肾上腺素受体的结合位点不同。     

池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析

筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。