现代中药分析新进展

近年来中药分析领域取得了非常大的进展,主要特点有:中药分析的对象更集中于针对中医药现代化研究中的关键科学问题,提出切合实际的系统的解决方案;中药分析不再局限于提供化学分析的工具,而是将各种新方法、新技术整合使之成为解决关键科学问题的新体系;中药分析已经不再局限于分析中药的物质组成,更注重解决的是物质的组成及其功能的相关性.本文从中药信息表达模式的改变、成分研究策略的改变、分析对象的改变和药物效应分析模式的改变等四个方面对中药现代分析的进展和发展趋势进行了综述和讨论.     

场依赖的同手性蛋白质表达:与生命起源相关的不对称性讨论

自然万物总是表现出对某种手性的偏爱.科学家研究发现除少数低等动物、昆虫的特定器官或人体病态组织内含有少量的右旋氨基酸之外,组成地球生命体的氨基酸几乎都是左旋的;相反,自然界的核酸则几乎都是由右旋的核糖组成.因而生命的同手性(左手或右手)问题一直是困扰着广大科研工作者的难题之一.但迄今为止,科学界还没有很好的证据来解释生命形式中的不对称现象,因而有必要做进一步的探讨.本文用磁力搅拌器控制细菌培养基的搅拌方向(顺时针或逆时针),表达出了具有不同二级结构特征的蛋白质.进一步研究表明,逆时针旋转获得的蛋白质中可能存在D-氨基酸.这些结果证明蛋白质的表达与微生物生长的动力场方向有关.因此,我们推测,自然界中氨基酸同手性的产生可能是由于物种在进化过程中受地球自西向东自转的影响.这一结果对进一步探讨生命起源具有重要意义,同时对评估宇航员受外太空的损害和研发手性新药具有参考价值.     

重组人OCIF结构域D1～D6基因在毕赤酵母中的表达

利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称O CIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.     

一道“弦图”结构的中考题的分析与挖掘——以2023年杭州市中考数学第10题为例

本文对一道内涵丰富、蕴含数学文化的中考题进行多视角分析,理清几何结构^[1]与代数表达之间的关联,得到多种解法;通过母题开发,得到系列好题.在解题教学中,不仅提高学生的解题能力^[2],还促进几何直观、推理能力、运算能力等核心素养的发展,向学生渗透中华民族优秀传统数学文化.     

Construction of High Expression Plasmid of Human Augmenter of Liver Regeneration （ hALR）, Expression and Purification of hALR

Introduction Theliverisoneoftheorgansthathaspotentialre generativecapabilityinmammaliananimals[1].Studies oncaninemodelshaveindicatedthatthelivercanre generate,inonlytwoweeks,toitsoriginalsize,after70%hepatectomy[2].Therefore,theresearchoncellu larandmole…     

一个新锌指蛋白的表达和纯化--ZNF191蛋白及其锌指区ZNF191(243-368)

通过PCR方法 ,将ZNF1 91基因的cDNA的第一开链阅读框 (ORF)及其锌指区ZNF1 91 ( 2 43 36 8)装入PTSA 1 8表达载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,成功地表达了目标蛋白 ,并通过DEAE5 2 ,CM2 3,Heparin Sephrose 4B等层析柱对目标蛋白进行了纯化 .ZNF1 91锌指蛋白及其锌指区ZNF1 91 ( 2 43 36 8)蛋白经考马斯亮蓝染色的聚丙烯酰胺凝胶电泳检查 ,纯度达单一带水平 .其中对ZNF1 91蛋白经N端氨基酸微序列分析证明为目的蛋白 .     

人卵透明带3基因片断hZ3.3的克隆及其在毕赤酵母中的表达

为了探讨透明带与精子的作用机制,人卵透明带3(human Zona Pellucida 3,hZP3)第19l位氨基酸到319位氨基酸之间的cDNA序列通过PCR方法扩增后,克隆到表达载体pPICZαA上,构建成重组质粒pPICZαA-hZ3．3。该质粒经SacⅠ线性化后电打孔转入Pichia pastoris酵母X-33中,用YPDS Zeocin^ 筛选高拷贝转化子,并用PCR分析鉴定目的基因片断与酵母基因组的整合,阳性转化子用0．5％甲醇诱导,表达目的蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blot鉴定分析,结果表明目的基因成功表达,表达产物大小约为37kD。     

限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光法测定原核/真核质粒

采用线性聚丙烯酰胺修饰石英毛细管的高效毛细管电泳无胶筛分技术,对原核/真核质粒用不同限制性内切酶酶切,运用限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光(REF-HPCE-LIF)检测法同时对内切酶酶切后多个和较长DNA片段进行了检测,电泳缓冲液为1×TBE(pH8.3),阴极电压进样(10kV,5s),分离电压13kV,25℃,激光诱导荧光检测器检测(λex=520nm)。结果表明,所建立的REF-HPCE-LIF方法可对原核/真核酶切后多个和较长DNA片段进行检测,获得了满意的限制性内切酶指纹图谱,能够检测片段大小相差不超过10bp。所建立的方法较琼脂糖电泳分辨率高,可应用在检测多个和较长DNA片段的突变,在诊断肿瘤方面有一定应用前景。     

cDNA Cloning, Prokaryotic and Eukaryotic Expression and Characterization of Porcine Leukemia Inhibitory Factor

Introduction Theleukemiainhibitoryfactor(LIF)isamulti functionalcytokinebelongingtotheinterleukin6(IL6)family[1].Itwasfirstfoundasamyeloidleukemic cellproliferationsuppressoranddifferentiationinducer cytokine[2].ThenaturalformofLIFisa38to67kDa glycosylate…     

抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析

结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)特异性单链抗体(Single chain Fv fragment, scFv)核苷酸序列, 经分子设计和密码子优化后, 通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments, scdsFv)基因片段. 将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游, 并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a, 转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导, 表达融合蛋白CAtin. SDS-PAGE和Western-Blot分析表明, 目的蛋白得到良好表达, 经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L. 融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后, 利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析. 结果显示, 所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合, 并对其具有明显的杀伤活性, 表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.