伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用

通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(Con A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RNase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RNase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RNase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。     

亲和层析研究进展

亲和层析具有高选择性,高活性回收率和高纯度等特点,已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一,本文综述了亲和层析的类型,配基的种类,选择方法以及亲和层技术的最新研究进展,重点介绍了多肽作为亲和配基的制备及筛选方法及其在生物大分了职的应用,并比较了不同亲和层析方法的优缺点及其发展趋势。     

壳聚糖为载体金属亲和吸附剂的制备及性质

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备分别固载有Cu2+、Zn2+和Mn2+的三种金属螯合亲和吸附剂,其稳定性与机械强度均较好。实验表明,交联反应中戊二醛w=2.5×10-3时制得的上述三种吸附剂对牛血清白蛋白均具有最大吸附量,所得吸附剂膨胀度为8.46mL·g-1,对Cu2+的螯合量为70.61mg·g-1。对螯合配基亚氨基二乙酸与壳聚糖连接反应条件的选择表明:65℃、16h和CIDA=0.32moL·L-1时可获得对Cu2+最大螯合量。     

从组合化学肽库中筛选亲和配基

在亲和色谱研究中 ,建立适合于某种分离对象的亲和色谱体系的关键是寻找适合的亲和配基 .小肽亲和配基具有性质稳定、合成简单、价格低及生物相容性好等特点[1] ,但这类配基也存在着亲和力弱或选择性低的缺点 .因此 ,如何寻找小肽配基以及如何提高小肽配基的亲和力和选择性的问题引起了人们的关注与重视 [1～ 3 ] .组合化学法是一种快速制备大量相关或同类化合物的革新性的方法 [4 ] ,组合肽库包括噬菌体展示肽库和合成肽库 ,这两类肽库均可用于小肽配基的筛选与优化 [1,5] .组合化学法尽管有效 ,但以小肽为目的物进行筛选时 ,往往因肽 -肽…     

聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜分离γ-球蛋白的研究(Ⅰ)——聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜的制备及其吸附性能

对聚偏氟乙烯(PVDF)中空纤维膜进行表面亲水化处理,再经活化、偶联制得了带有苯丙氨酸(Phe)的PVDF中空纤维亲和膜.制备过程中以光电子能谱(XPS)及红外光谱分析膜表面基团的变化,经亲水化处理及活化偶联后,膜表面的O和N含量分别从5.6％和0.6％增加到16.5％和3.0％,而F含量由38.3％降低为23.0％,将该亲和膜用于室温下血浆中γ-球蛋白的分离实验,在pH=7.4,离子强度I=0.18的缓冲液体系及进料质量浓度为1.0mg/mL条件下,该亲和膜对γ-球蛋白的吸附量可达到5.85mg/g膜;与市售γ-球蛋白相比,血浆中提取纯度可达83.9％。     

生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚A

建立了可用于快速、灵敏地检测双酚A的生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法,测得最佳实验条件为包被抗原浓度为13.8mg/L、抗体稀释为2.4×105倍,生物素化二抗和酶标亲和素的最佳稀释倍数分别为2000倍和500倍。在优化条件下,方法的线性范围0.2~1000μg/L;最低检出限0.05μg/L。所建立的方法用于食品和唾液中双酚A含量的测定,样品处理简单,结果满意。     

活性蓝F3GA固载的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯亲和色谱填料的制备与应用

以3.0 μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质,与三嗪染料活性蓝F3GA(Cibacron Blue F3GA)反应,制备出 一种固定化染料聚合物高效亲和色谱填料。考察了应用该填料时流动相中的盐离子浓度、有机溶剂及流速等对牛血清白蛋白(BSA)和 溶菌酶(Lys)保留行为的影响。实验结果表明,该染料亲和填料具有良好的色谱性能。利用前沿色谱法测定了染料与溶菌酶之间的表观 解离常数为5.26×10-5 mol/L。使用该填料成功地从鸡蛋清和小牛血清中分别分离纯化了Lys和BSA,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS-PAGE)分析显示Lys和BSA的纯度分别为95%和92%。     

标签谷胱甘肽S-转移酶的二价亲和标记试剂的制备与应用

设计合成融合表达标签谷胱甘肽S-转移酶(GST)的二价亲和标记试剂,用于功能化磁珠后位点选择性固定化标签GST,为磁分离筛选配体混合物库提供固定化融合靶蛋白的候选方案。 为减少疏水配体在标签GST活性位点的结合,需同时占据标签GST双活性中心内疏水结合位点并发生共价修饰的二价亲和标记试剂。以双苯环为疏水定位基、溴乙酰基为巯基修饰基团、羧基为连接官能团得单价标记试剂,以二乙基三胺为连接臂将单价标记试剂与连接臂两端伯胺连接得标签GST的对称二价亲和标记试剂,再以线性三胺连接臂中间的氨基与羧基磁珠偶联得功能化磁珠。 表征目标化合物对标签GST的标记动力学、结合比;功能化磁珠对标签GST的不可逆固定化动力学和固载容量,及将磁珠表面二价亲和标记试剂转变成还原型谷胱甘肽(GSH)加合物后对标签GST可逆固定化的效果;以碱性磷酸酶及疏水荧光配体为模型考察磁珠固定化标签GST后的非特异结合。 目标化合物对标签GST半抑制浓度为(22±0.2) μmol/L,其与GSH的饱和加合物半抑制浓度为(0.41±0.06) μmol/L,二者与标签GST二聚体结合比接近1：1。 功能化磁珠对标签GST不可逆及可逆固定化的容量均接近25 mg/g磁珠。 偶联GST的磁珠对蛋白非特异吸附很弱,再进一步用单价亲和标记试剂和GSH加合物封闭固定化标签GST剩余的活性位点后对疏水小分子也无显著结合。 结果表明,所设计二价亲和标记试剂功能化磁珠适合用于标签GST及其融合表达蛋白的位点选择性固定化。     

基于硼酸盐亲和辅助电化学调控ATRP的癌胚抗原超灵敏电化学适体传感研究（英文）

癌胚抗原(CEA)是一种酸性糖蛋白,其作为一种广谱肿瘤标志物在恶性肿瘤的鉴别诊断与监测等方面具有重要价值。在此,借助于硼酸盐亲和辅助电化学调控原子转移自由基聚合(BA-eATRP)的双重信号放大作用,我们报道了一种电化学适体传感器,用于CEA的超灵敏、高选择性检测。基于BA-eATRP的电化学CEA适体传感的基本原理为:待核酸适体捕获CEA抗原后,借助于苯硼酸(PBA)基团与单糖残基上的顺式二醇基团间的选择性亲和相互作用将ATRP引发剂位点靶向性地共价偶联到CEA抗原上;随后,以二茂铁甲基丙烯酸甲酯(FcMMA)作为单体,借助于eATRP将二茂铁(Fc)探针引入电极表面。由于CEA上含有数百个顺式二醇基团,基于硼酸盐亲和的交联反应可使得在每个CEA抗原上标记数百个ATRP引发剂分子。此外,通过eATRP反应,可以在电极表面接枝长的二茂铁基聚合物链,使得每个标记有ATRP引发剂的位点均能连接上成百上千个Fc探针。因此,BA-eATRP可使得每个CEA抗原上标记上大量的Fc探针。在最佳条件下,基于BAeATRP的电化学适体传感器能够实现浓度低为0.34 pg·mL^-1...     

β-环糊精修饰CdTe荧光探针制备及用于菊酯类农药代谢产物检测

建立了基于β-环糊精修饰的CdTe量子点（β-CD-CdTe）探针的菊酯类农药代谢产物的荧光检测方法。通过β-CD-CdTe的杯烃结构和菊酯类农药代谢产物间苯氧基苯甲醛（3-PBALD）苯环之间的“主-客体”相互作用形成包络物，实现了对3-PBALD的定量测定。在优化条件下，该荧光探针响应值与间苯氧基苯甲醛浓度在0.05～0.5μg/mL之间呈线性关系，线性方程为?IF=681.2c+192.5，检出限为0.03μg/mL。将其应用于水样中间苯氧基苯甲醛加标回收实验，回收率在84.7%～91.6%之间，相对标准偏差（RSD）低于4.3%。