一个新的调控人类细胞死亡基因的发现

ａｓｙ基因是最近发现的一个凋亡诱发基因［１］,但诱发细胞凋亡的机制仍不清楚为研究ａｓｙ基因诱发凋亡的机制,本文以ＡＳＹ为诱饵蛋白（Ｂａｉｔ）,采用酵母双杂交系统从人肺细胞系（ＷＩ３８）ｃＤＮＡ文库中筛选ＡＳＹ结合蛋白基因从１×１０６个共转化子中,分离鉴定了３个Ｈｉｓ＋ＬａｃＺ＋克隆,其中一个克隆的插入片段与Ｇｅｎｂａｎｋ全序列比较没有发现同源基因,推测为一个新基因,命名为ａｓｙ相互作用蛋白基因ａｓｙｉｐ（ａｓｙｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）ａｓｙｉｐ基因在人的各种组织中均组成性转…     

全长和截短的δ内毒素cryIAc基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

在昆虫病毒转移载体ＰＶＬ１３９３多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因ｃｒｙＩＡｃ，得到了重组转移载体ｐＴｈＹ１，用ＫｐｎＩ将ｃｒｙＩＡｃ基因进行了截短，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ２．随后在两种重组转移载体ｃｒｙ基因的下游引入了ＩＥ１启动于驱动的ｎｅｏ基因作为筛选标记和ＳＶ４０小ｔ抗原终止区作为ｃｒｙ基因的终止信号，得到了重组转移载体ｐＶＬＹｌｎｅｏ和ＰＶＬＹ２ｎｅｏ，分别用两种重组转移载体ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫Ｓｆ９细胞，用Ｇ４１８筛选后经有限稀释法纯化，得到了携带全长和截短。ｒｙＩＡｃ基因的两种重组病毒ｖＶＬＹ１ｎｅｏ和ｖＶＬＹ２ｎｅｏ，分别在昆虫细胞中表达了分子量为１３３３００和８２０００的ｃｒｙ蛋白，大小分别与ｃｒｙＩＡｃ晶体蛋白和预计的截短蛋白相同，并均具有与原晶体蛋白相同的免疫活性，生物测定表明两种表达产物均具有杀虫活性，和昆虫病毒一起产生协同增效毒性．     

单细胞克隆法快速筛选重组昆虫杆状病毒

首次采用显微操作系统挑取包含有重组病毒的单细胞，成功地获得了重组杆状病毒的单细胞克隆，并得到了重组病毒的纯培养．对有多角体的和无多角体的重组病毒细胞的挑取表明，这一方法对重组杆状病毒的筛选具有普遍适用性．我们发展的这一方法比常规的空斑技术简便、快速，只需两周左右即可完成重组病毒的筛选．     

研究蛋白质相互作用的新系统——酵母双杂交系统

自酵母双杂交系统创建以来,已经成为研究蛋白质相互作用的重要手段,被广泛用于各个生物学研究领域,揭示了大量未知蛋白质之间的相互作用. 近来,在经典的酵母双杂交系统基础上,又相继提出许多新的研究方法,如:三杂交系统,单杂交系统,逆向双杂交系统,SOS富集系统等等. 酵母双杂交及其衍生系统已经成功地运用于蛋白质之间,蛋白质与DNA、RNA、配体之间的相互作用的研究     

内皮细胞生长抑制素 --抗肿瘤血管生成的细胞因子

综述了内皮细胞生长抑制素的结构和功能;探讨了其与胶原蛋白Ⅹ　Ⅷ的关系以及抗血管生成、抗肿瘤生长和转移的可能机理;展望了其在肿瘤诊断、治疗等方面的应用前景.内皮细胞生长抑制素是胶原蛋白Ⅹ　ⅧC-末端的酶解产物,在血管生成过程中起负调控作用,通过阻断血管生成的信号并诱导内皮细胞的凋亡而特异性地抑制内皮细胞的迁移和新血管的生成,从而抑制肿瘤的生长和转移.其抗血管生成的机制目前尚未完全清楚,研究显示它是一个结合紧密的球状折叠分子,一面富含精氨酸残基,是肝素的结合位点,推测与抗血管生成的机制有关.内皮细胞生长抑制素作为抗肿瘤的内源性药物,具有高效性,低毒性,无耐药性等优点.     

癌胚抗原启动子驱动tk基因在人肺腺癌细胞中的靶向表达

用荧光素酶报导基因,发现ｃｅａ启动子在ＣＥＡ阳性的肺腺癌细胞Ａ５４９中的活性是在ＣＥＡ阴性的宫颈癌细胞Ｈｅｌａ中的１６倍．构建了重组表达质粒ｐＣＥＡｔｋ,ｃｅａ启动子控制效应基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的表达．转染了质粒ｐＣＥＡｔｋ的Ａ５４９细胞对甘昔洛韦（ＧＣＶ）的敏感性是未转染细胞的８６５倍,而转染了ｐＣＥＡｔｋ的Ｈｅｌａ细胞则仍保持对ＧＣＶ的抗性．结果表明：ｃｅａ启动子可用于ＣＥＡ阳性的肺腺癌等细胞的靶向性基因治疗     

绿色荧光蛋白的结构、发光机制及其应用研究

源自水母的绿色荧光蛋白作为生物标记物有其独特优点.近年来的研究揭示了其结构、发光特性和发光机制,并使之广泛应用于生物学的各个领域.     

杨树菇(Agerocybe aegerita)蛋白Yt对MCA诱发性大鼠肺癌作用的影响

检测了杨树菇活性蛋白组分Yt对甲基胆蒽(MCA)诱发性大鼠肺鳞状细胞癌的抑制效果,支持了在药用真菌中,除了多糖,蛋白是另一类重要的抗肿瘤物质这一观点.用MCA诱导大鼠肺鳞状细胞癌.在3个月内,对照组注射生理盐水,处理组注射蛋白组分Yt .3个月后取血并处死大鼠,计算诱癌率,检测10项生化指标和血常规指标,切片观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸骨骨髓、睾丸(雄鼠)及卵巢(雌鼠).结果表明MCA对于对照组的诱癌率为58.33%,而对于处理组的诱癌率为33.33%,对照组与处理组的诱癌率差异显著(p<0.05).10项生化指标中有5项指标与对照组比较有显著性改变天冬氨酸氨基转换酶含量显著升高(0.02<p<0.05),白蛋白含量显著降低(p<0.01),血糖含量显著升高(p<0.002),尿素氮含量显著降低(p<0.05), 胆固醇含量显著降低(p<0.01).在血常规的指标中,Yt处理组的白细胞,红细胞,血红蛋白,血色素,血小板及中性淋巴细胞与对照组比较有显著变化白细胞数量显著增加(p<0.02),红细胞数量显著降低(0.02<p<0.05),血红素含量,红细胞压积、体积、血红蛋白含量显著降低(p<0.001),中性淋巴细胞数量显著增多(0.01<p<0.02).但是这种变化都没有超过正常范围.各器官的石蜡切片表明,除雄性大鼠的睾丸和附睾外,各器官没有明显病变.     

控制细胞生死的一把新钥匙TRAIL

TRAIL是最近克隆的 TNF家族中的一个新成员 ,其最显著的特异性是 :能迅速诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无影响 .其受体和竞争受体的多样性表明 TRAIL具有与 TNF不同的控制细胞死亡的独特机制 ,TRAIL通过与不同的细胞表面特异性受体结合来调控死亡信号的转导过程 .研究表明 ,TRAIL对肿瘤的杀伤效率高 ,特异性强 ,是一个很有潜力的抗肿瘤细胞因子 .