毛细管电泳法测定单胺氧化酶活性

应用毛细管电泳技术,建立了快速测定单胺氧化酶（MAO）活性的方法。研究对分离缓冲液pH值、浓度、毛细管表面改性剂十四烷基三甲基溴化铵（TTAB）浓度等影响因素进行优化,探讨了方法的可行性,确立了最佳分离条件。以70cm×50μm（i．d．）未涂敷熔融石英毛细管为色谱分离柱,运行电压15kv,运行缓冲液：0．5mmol／LTTAB,磷酸盐缓冲液（50mmol／L,pH 10．5）;紫外检测波长：214nm。MAO催化犬尿胺（Kyn）反应的产物4-羟基喹啉（4-HQ）的浓度和峰面积的线性范围为5～1000μmol／L,相关系数为0．9997,相对标准偏差（RSD）小于5．6％（n=5）,检出限为2μmol／L（S／N=3）。实验证明,此方法可以用于生物样品中MAO催化活性的检测。     

脂质体在液相色谱和毛细管电泳中的应用

脂质体具有与细胞膜相似的封闭双层结构,是接近天然生物膜的理想模型。该文综述了脂质体的制备和性质表征方法,固定脂质体色谱用于药物在脂质体膜上的吸收和蛋白质与脂质体膜的相互作用研究,脂质体毛细管电泳在药物分离、蛋白质分离和蛋白质相互作用方面的应用研究。     

基于核酸适配体的微流控芯片酶反应器用于蛋白质的分析

将核酸适配体作为胰蛋白酶固定化介质,制备了一种新型的微流控芯片酶反应器,并与高效液相色谱-串联质谱联用,搭建了在线分析平台;分别使用标准蛋白及混合蛋白样品对芯片的酶解效率及联用平台的分析能力进行了初步评价。结果表明,5 ng肌红蛋白经该平台分析后肽段覆盖率可达到37%;对500 ng混合蛋白进行3次平行分析,肽段覆盖率及相对标准偏差分别为44.3%、6.5%(牛血清白蛋白), 65.0%、2.7%(肌红蛋白)和62.0%、5.6%(细胞色素c);初步实验表明,该在线分析平台具有检测灵敏度高、重现性好、酶解效率高的特点,有望在蛋白质组学分析中发挥重要作用。     

低速低压温度敏感硼酸亲和色谱制备

利用原子自由基转移聚合原理,制备聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-4-乙烯基苯硼酸)改性的温度敏感硼酸亲和色谱固定相,并对其进行傅里叶红外光谱,X射线光电子能谱等结构表征以及用热失重对其接枝率进行了测定.用HPLC研究了腺苷和脱氧腺苷的保留行为.并且应用于空间生命仪器搭载装置的分离装置中,在不同温度下对腺苷进行富集并对其收集液进行分析.结果表明,在水溶液为流动相的条件下,可以实现在低流速、低压的条件下对腺苷的富集,且回收率为85.4%.     

龙血竭总酚活血化瘀活性成分的虚拟筛选及初步活性研究

应用Discovery Studio虚拟筛选软件,以凝血酶为受体,对龙血竭总酚活血化瘀有效成分进行了虚拟筛选. 虚拟筛选确定的受试成分对体外凝血酶活性的影响数据表明,计算机辅助虚拟筛选结果与体外药理实验结果基本符合. 受试成分龙血素A、龙血素B、龙血素C、7-羟基-4'-甲氧基黄烷、4',7-二羟基高异黄烷能抑制体外凝血酶活性,具有活血化瘀的药理作用.      

个体老龄化生物标志物体外筛选模型的建立

根据蛋白交联理论,以丙酮醛及人血清白蛋白建立体外筛选模型,模拟体内氨基脲敏感的胺氧化酶介导美拉德反应导致蛋白交联的生物学过程.采用串联质谱结合¹⁸O标记的方法,定量分析丙酮醛对人血清白蛋白肽段的修饰程度用于表征衰老的程度,并对该方法的各项实验条件进行优化.建立了个体老龄化生物标志物体外筛选模型,优化了胰蛋白酶酶切及¹⁸O标记的实验条件.通过对优化条件下酶解后标记效率的评估,认为该方法将来可用于蛋白质组学方法,研究老龄化生物标志.     

ADTIQ导致SH-SY5Y细胞凋亡和多巴胺转运体表达降低

新内源性神经毒素1-乙酰基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(ADTIQ)生成与糖代谢密切相关,可能成为糖尿病并发PD的一个关键因素,但是其神经毒性还不清楚.针对ADTIQ的神经毒性,该研究采用SH-SY5Y细胞为模型,MTT法,Annexin V/PI双染法,Caspase 3/7活性检测细胞存活率和细胞凋亡,Western-blot检测多巴胺转运体(DAT)的表达量.结果表明,随着ADTIQ浓度增大,细胞的存活率逐渐下降,凋亡率增加,同时ADTIQ导致DAT表达降低.研究提示ADTIQ导致多巴胺神经元的凋亡与PD的发生息息相关,糖尿病引起ADTIQ增加,可能成为高糖损伤多巴胺神经元的一个重要原因.     

抑制off-gel分离中18O标记回标的方法研究

off-gel分离法和¹⁸O标记是蛋白质组学研究中常用的分离和标记方法,通过对大鼠纹状体蛋白酶解后的肽段进行off-gel分离,以及基于超滤后的¹⁸O标记与off-gel分离的结果表明,off-gel对复杂生物样品具有良好的聚焦和分离效果,超滤去除游离酶后,¹⁸O标记的肽段没有发现明显回标现象,¹⁶O与¹⁸O标记的肽段1:1混合后,90%以上的蛋白¹⁶O/¹⁸O比值为1.04±0.16,因此,对复杂样品的考察结果说明基于超滤的¹⁸O标记可以与off-gel分离联合使用,扩大了¹⁸O标记在分离方法中的选择范围,能够应用于定量蛋白质组学的研究中.     

Salsolinol合成酶的高效液相色谱-电化学活性检测方法研究

Salsolinol合成酶是一种催化多巴胺(DA)和乙醛(AcH)生成Salsolinol的酶,它在内源性儿茶酚异喹啉类物质代谢过程中起重要作用。研究显示该类物质具有一定的神经毒性,与帕金森病(PD)发病机制密切相关,因此Salsolinol合成酶可能是PD的一种关键致病因子。本文从雄性SD大鼠鼠脑中分离得到Salsolinol合成酶的粗酶液,采用高效液相色谱结合电化学检测器体系(HPLC-ECD)建立了一套灵敏度高、重复性较好的酶活检测方法,并进行了方法稳定性和灵敏度的验证,方法简便、稳定,适用于不同生物样品中该酶活性的测定;同时也将该方法应用于超滤分离后不同截留分子量样品的活性测定,结果显示该酶的活性主要集中在3K下层滤液。     

红霉素肟的HPLC分析

用HPLC方法分析合成甲基红霉素中间体红霉素肟的含量,考察了该方法的稳定性.采用外标法,色谱条件:色谱柱Nova-pak C18;流动相 V(CH3CN)∶V(0.033 mol/L KH2PO4)=30∶70,检测波长205 nm,检测灵敏度0.1AUFS.结果显示该方法有很好的稳定性和精密度.