血清和Pouronic F68对悬浮培养杂交瘤细胞的保护作用

报道了生物反应器中血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８对杂交瘤细胞的作用及其物理机理。实验发现当生物反应器中流体主体Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ湍流涡旋尺度与细胞大小中小于细胞时，血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８未能对细胞提供保护作用。     

脐血单个核细胞和CD34+细胞体外扩增造血干/祖细胞

考察了脐血单个核细胞(MNC)和CD34+富集细胞在SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性.实验发现CD34+富集细胞具有很高的扩增潜力,通过3周培养总细胞扩增了(883.2±322.4)倍,而MNC仅扩增了(53.3±6.2)倍.对比细胞集落生成和CD34+细胞的扩增发现,MNC的集落密度由最初的(270.9±54.9)CFCs/105cells上升至第7天的(1 496.3±417.7)CFCs/105cells,CD34+细胞百分比则由最初的(0.99±0.18)%上升至第7天的(4.4±1.9)%,而CD34+富集细胞在培养过程中,虽然集落总数和CD34+细胞总数始终呈上升趋势,但是其集落密度和CD34+细胞百分比则始终呈下降趋势.在两种起始细胞培养中,CFU-GM(粒细胞-巨噬细胞集落形成单位)在集落中的含量逐渐增加,BFU-E(爆式红细胞集落形成单位)含量则逐渐降低.在3周的短期培养中,MNC可以得到更多的集落形成细胞(CFC)和CD34+细胞.     

葡萄糖和谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长代谢的影响

在生物反应器的批培养过程中考察了葡萄糖及谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长及代谢的影响。当葡萄糖浓度降至1～4mmol／L，谷氨酰胺浓度降至0．4～2mmol／L时，细胞生长并未受到明显影响，但细胞代谢途径发生转换，乳酸及氨的生成显著减少。葡萄糖和谷氨酰胺浓度的比例对杂交瘤细胞的生长及代谢也有影响，葡萄糖相对较多时，其细胞得率小，乳酸得率大；而当谷氨酰胺相对较多时，其细胞得率小，氨得率大。实验结果表明谷氨酰胺与葡萄糖的能量代谢在某种程度上可进行相互补充。     

GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成

在TPO IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF，从脐血CD34^ 细胞定向诱导巨核细胞的形成，以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO IL-3、TPO IL-3 GM-CSF(5、20、100μg／L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多倍体的作用。结果发现：在TPO IL-3的细胞因子组合中添加GM-CSF有利于总细胞的扩增，对巨核细胞的纯度没有显著的影响。体外培养14d后，培养物巨核细胞中多倍体(≥8N)巨核细胞比例明显提高，从中可以看出GM-CSF能促进巨核细胞多倍体的形成。     

从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

转瓶中不同供氧状况对昆虫细胞生长的代谢的影响

对传统转瓶进行了改进,使之成为一套既可有效控制供氧又可在线检测细胞摄氧率的小型多功能培养装置,并在此基础上,系统考察了不同供氧状况对ＩＰＬＢ－Ｓｆ２１－ＡＥ昆虫细胞生长和代谢的影响。结果表明：维持适宜的溶氧水平对优化昆虫细胞的生长和代谢至关重要,昆虫细胞的摄氧率与其生长代谢密切相关,并可作为在线监控细胞生态状态的重要依据。     

Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究I.动态球转球过程

研究了动态球转球接种Ｖｅｒｏ 细胞培养过程中的细胞生长特性,提出了细胞球转球的机理,通过与消化接种的比较,证明在动态球转球接种的细胞培养过程中,细胞的比生长速率和增殖倍数均较低,因而认为以动态方式实现细胞球转球接种不适合于细胞的大规模培养过程。     

人胚胎骨髓基质干细胞的长期培养及体外成骨特性

研究了人胚胎骨髓基质干细胞(hBMSCs)在体外长期培养时的基本特性和向成骨细胞的分化能力。结果表明：前三代hBMSCs多数呈长梭形,生长快速,增殖能力强;而后几代细胞变得比较扁平,生长缓慢,增殖能力下降;至第六代,细胞已失去增殖能力。每一代细胞生长均分为延滞期、对数生长期和稳定期,延滞期一般为6～7d,对数生长期为4～5d,最后是稳定期。前三代细胞对数生长期的群体倍增时间(PD71)基本相同,而第四代细胞的PDT略有上升,第五代细胞的PDT最大。在体外扩增能力方面,前三代细胞均可以扩增18倍左右,而第四、第五代细胞则下降至11倍、5倍。实验结果表明扩增后的细胞经过诱导可以形成钙化小结,与未诱导细胞相比碱性磷酸脂酶(ALP)活性显著提高。     

生物反应器中杂交瘤细胞的物理破损

结合高速搅拌转瓶试验和鼓泡柱试验，考察了生物的反应器中流体主体湍流切和气地杂交瘤细胞的破损作用。实验发现在没有气泡的情况下，只有当Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ湍流涡旋尺度五细胞大小相当或小于细胞时，生物反应器中流体主体湍流剪切才能导致细胞破损。     

一种测定动物细胞平均沉降速率的新方法

通过构建细胞沉降过程的理想化模型，提出了一种简易的细胞沉降速率测定方法。标准颗粒沉降实验结果验证了这种方法的准确性。利用该方法测定杂交瘤细胞的沉降速率，定量描述了杂交瘤活细胞与死细胞之间的沉降速率差异，活细胞的沉降速率(15．5mm／h)大约是死细胞(9．36mm／h)的1．67倍，约是细胞碎片(1．46mm／h)的10倍；把该方法用于不同种类不同培养时期的脐血造血细胞，发现它们具有不同的沉降速率。这些数据将为细胞连续灌注培养过程的细胞截留研究提供依据。