光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶的某些理化性质

光合细菌Chromatium vinosum含有一种可溶性氢酶和一种膜结合态氢酶。在培养基中加入终浓度为1μmol/L的Se,细胞中可溶性氢酶的含量增加1.7倍。C.vinosum可溶性氢酶可以利用甲基紫精、苄基紫精和细胞色素C为电子载体催化吸氢与放氢,但不能利用NAD,NADH,NADP和NADPH等进行催化放氢和吸氢。可溶性氢酶易被CO所抑制,在反应系统中加入终浓度为2.5μmol/L的CO时,可抑制氢酶最大放氢活性的一半。与C.vinosum膜结合态氢酶相比,可溶性氢酶较易被胰蛋白酶降解而使氢酶催化吸氢和放氢的活性降低。     

循环伏安法研究棕色固氮菌固氮酶组分性质

用循环伏安法研究固氮酶国内外尚未见报道。木工作在不加电子传递体的情况下,用该法研究了棕色固氮菌的钼铁蛋白(Av1)和铁蛋白(Av2)的某些性质。 所用菌株为棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)野生型菌株op或230,以及不能合成FeMoco的缺陷型菌株UW-45。Av1和AV2的分离、纯化及活性如前文所述。 循环伏安法采用叁电极系统,及前文所述仪器,在-590到470mV内进行扫描,     

化学模拟生物固氮——Ⅺ 固氮酶铁钼辅基模拟物的生物活性

据固氮酶厦门模型Ⅱ合成的固氮酶铁钼辅基模拟物与缺陷型棕色固氮菌uw-45提取液重组后,在完全的酶促反应条件下,具有明显的生物催化活性,其还原乙炔为乙烯的转化数通常在3—6(分~(-1))之间,相当于天然铁钼辅基活性的1—2％左右;还原分子氮为氨的转化数在1.5—3(分~(-1))左右,可用普通微量氨扩散法和Nessler比色法检出。重组模拟物的乙炔转化数与氮转化数之比值符合于棕色固氮菌活性固氮酶相应的转化数之比。经柠檬酸盐处理后,以氯为外配位基的模拟物的重组活性可显著提高。     

苯硫酚对固氮酶催化活性的影响

研究了苯硫酚对棕色固氮菌固氮酶催化底物还原活性的影响．结果表明；当反应体系中固氮酶钼铁蛋白与苯硫酚的摩尔比为1:4时．固氮酶的乙炔还原活性比对照组下降了62．3％，下降的幅度随着苯硫酚浓度的升高而增大；但在乙炔存在的情况下，固氮酶的放H2活性随着苯硫酚的浓度的升高而升高．在氩气氛下，苯硫酚浓度的升高对固氮酶放H2活性的影响不明显．这一现象有可能是由于苯硫酚取代与铁钼辅基的Fe1原子连接的半胱氨酸的巯基而引起的．     

电位处理对棕色固氮菌整体细胞固氮活力的影响

用电化学综合测试仪调控电位,研究了棕色固氮菌整体细胞氧化还原性质。结果表明:电处理的菌体电位在-800 mV～ 500 mV(相对于饱和甘汞电极电位)之内,菌体的固氮活力均高于未处理的细胞,其中在-400 mV 和-600 mV 处理的,其同氮活力分别增高78％和70％。用控电位法测定了棕色固氮菌整体细胞活性氧化还原电位为 E′_AOR=-645mV和E″_AOR= 566 mV。     

高产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件研究

从霉变的玉米芯中筛选到一株高产纤维素酶的菌株，经18S rRNA基因序列分析和菌株形态特性分析，确定该菌株为灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)．利用固体纤曲培养产生纤维素酶，研究了培养基起始pH值、培养温度、培养时间、接种量、氮源、稻草粉与麸皮比例、表面活性剂等对菌株产酶的影响．在最适条件下菌株培养72h后，羧甲基纤维素酶(CMCase)活力高达6812U／g(干曲．下同)，滤纸酶活力(FPA)达172U／g．利用该菌株对蔗渣进行分解．其糖化率达36．4％．     

棕色固氮菌钼铁蛋白的结晶及其氧化还原电位的研究

本文叙述棕色固氮菌固氮酶钼铁旦白的分离和结晶方法。降低固氮酶提取液的离子强度,可获稠密的暗棕色钼铁旦白结晶。钼铁旦白的晶体为针状。其比活性为1643毫微克分子乙烯形成分钟毫克旦白。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,重结晶的钼铁旦白达均一的纯度。 结晶纯的钼铁旦白用染料平衡法测定,其氧化还原电位为-54mV,每个钼铁旦白分子传递电子数(n)为3.9～4。此电位对比固氮过程中的Fd和固氮酶的铁旦白来说是太正;然而它与半还原态变为氧化态的钼铁旦白的电位值基本是一致的。     

化学模拟生物固氮——Ⅸ 铁钼辅基模型化合物的合成和性能表征

采用乙二醇基阴离子作为活插头(可通过水解除去的双配位螯形配位体),对前文提出的合成方法作了重要改进,以期所合成的铁钼辅基模型化合物中Mo~(Ⅳ(Ⅲ))第一配位界内两个不稳定的配位体处于相邻的位置,如厦门模型Ⅲ(或厦门模型Ⅱ)所要求。合成和重组活性评价结果,重组活性比使用乙腈等为活插头的提高2个数量级,化学催化活性和选择性接近于天然FeMo-co水平。     

化学模拟生物固氮——Ⅵ.铁钼辅基模型化合物的合成及其催化性能

本文讨论了先前我们提出的固氨酶活性中心骈联双座双立方烷原子簇结构模型的一些特征。根据这一模型。设计了铁钼辅基模型化合物的合成方案,合成了三系列的铁钼辅基模型化合物,其Mo、S~*、Fe之比如同这一模型所要求的,为1:～6:6～8。由氯化物系列和柠檬酸盐进行配位体交换而得到的柠檬酸盐系列中的两个样品,在KBH_4还原C_2H_2为C_2H_4的反应中具有很高的催化活性(按每个Mo计算,转变数为20～30分~(-1))和选择性(91～95％),接近天然的铁钼辅基的水平,并在与Av突变种UW_(45)重组后,按Shah和Brill的方法测定,显示出明显的固氮酶活性。     

花生根瘤菌在自生条件下固氮和吸氢相关性

花生根瘤菌x_(-1)菌株在自生条件下和合适的培养基中,可诱导固氮酶及氢酶的活性,固氮酶反应产生的H_2(内源H_2)能直接诱导氢酶,氢酶活性表达的时间进程是在固氮反应之后,在外源H_2的存在下,固氮酶和氢酶则可同时表达,不同有机碳化合物对固氮酶与氢酶的影响不同,丙酮酸明显提高固氮活性,但对氨酶没有促进作用,蔗糖对固氮活性没有促进作用但对吸氢表现促进作用,分子H_2明显提高固氮活性,2.4-二硝基苯酚抑制需H_2的固氮活性,在外源H_2存在下其抑制作用更明显,铵抑制固氮酶的形成、固氮酶受铵抑制时氢酶也相应受到抑制。