由生产胰岛素后的猪胰残渣和废液中用亲和层析法制备胰蛋白酶抑制剂

1.介绍了两种新的固定化胰蛋白酶的制备方法。一种是以微球型硅胶为载体,以戊二醛为交联剂,将猪胰蛋白酶吸附和固定在载体上。另一种是以甘蔗渣纤维素为载体,以对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为双功能试剂,将猪胰蛋白酶共价偶联在载体上。两者都已成功地用作亲和层析的吸附剂,从工业生产胰岛素后的胰渣和废液中回收胰蛋白酶抑制剂。 2.提出了应用固定化胰蛋白酶的亲和层析技术从胰渣和废液中回收胰蛋白酶的工艺流程。经过中间试验,证明采用所制订的工艺流程,可以得到相当数量、具有一定纯度的胰蛋白酶抑制剂。 3.根据对所得抑制剂的初步分析,推测它是一种小分子量的硷性多肽,类似Kazal抑制剂。     

人胎肝金属硫蛋白的分离纯化及酶联免疫吸附检测

人胎肝经匀浆、离心、乙醇沉淀后,通过Sephadex G-75、DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析分离,获得金属硫蛋白的两种亚型(MT-1和MT-2)。经氨基酸组成分析证明是均一的。MT-1为抗原免疫青紫兰兔制备了抗血清,以纯化的IgG建立了人MT的酶联免疫吸附检测(ELISA)方法,并给出了标准工作曲线。     

毛细管区带电泳法快速测定食品中的金属硫蛋白

 采用毛细管区带电泳法 (CZE) ,以 5 0cm× 75 μmi d 毛细管柱作为分析柱 ,0 .0 2mol/L磷酸二氢钠 0 .0 2mol/L磷酸氢二钠混合体系 (pH 7.0 )作为背景电解质 ,以紫外检测器在波长 2 0 0nm的条件下检测 ,对具有生物活性的金属硫蛋白 (MT)的两种异构体 (MT1,MT2 )进行了分离。样品经过预处理后 ,采用外标法可对食品中的金属硫蛋白进行定量测定。该方法的最低检测质量浓度为 1mg/L ,相对标准偏差低于 10 % ,加标回收率为 82 .0 %～93.4%。     

[B10G1u,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究

采用PCR方法, 将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu, 在B24和B25位之间插入Asp, 构建了\胰岛素原基因. 利用通用型质粒pBV220构建表达载体, 在大肠杆菌DH5α中表达, 表达蛋白为包含体形式, 约占菌体总蛋白的20%～30%. 经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白. 用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切, 经DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物. 用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质, 用圆二色谱测定了构象变化. 放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明, 突变体分子缔合性明显下降, 放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的73.6%和146%.     

金属硫蛋白溶液聚合状态的研究

通过动态光散射实验首次证明了兔肝金属硫蛋白亚型 和 在不同的缓冲体系中不仅仅是以二聚体的形式 ,而且是以多种聚合形式存在[1] .深入考察金属硫蛋白在溶液中的聚合形式对于研究金属硫蛋白的结构和功能都具有非常重要的意义 .我们通过计算机模拟 [1] 比较系统地研究了各种因素对金属硫蛋白聚合的影响 .结果表明 ,在溶液聚合的分子识别过程中可由多种因素共同调控金属硫蛋白 ,这些因素主要包括静电相互作用、疏水性相互作用和溶液中阴阳离子等 .通过这些因素的综合分析 ,首次对兔肝金属硫蛋白在溶液中多种聚合形式的形成机制及相应的分子…     

兔肝金属硫蛋白-Ⅱ的晶体培养及初步衍射研究

Metallothionein\|Ⅱ,6 8kDa,purified from the liver of rabbit induced by cadmium,has been crystallized in the space group P6 322 using hanging drop vapor diffusion method,with unit cell parameters a=b=113 4 ?, c =146 6?.There are 8 molecules per asymmetric unit and a solvent content of 58%.     

酵母双杂交系统检测金属硫蛋白(MT)间的相互作用

金属硫蛋白-3(MT-3),又称神经生长抑制因子,为金属硫蛋白家族中惟一具有生物活性的成员。为了验证其在细胞内是否形成二聚或多聚体,构建酵母双杂交系统用于检测。结果表明：MT-3与MT-3之间在酵母细胞内能发生相互作用,进一步用酵母双杂交实验还表明MT-3与MT-1间也存在弱相互作用。由此提示,在机体细胞中,MT-3可以以同源或异源二聚体的形式存在。     

兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定

由于金属硫蛋白(MT)基因的多态性,决定不同亚型的MT异构体的存在,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础.通过离子交换柱可将MT分成MT-1和MT-2两个异构体,用不同条件的反相高效液相色谱(RP-HPLC)可将MT-1和MT-2分成不同的亚型异构体,并利用MALDI-TOFMS和LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量.结果表明,兔肝MT在不同的pH条件下分离得到不同分子量的亚型异构体.在酸性条件下,MT-1可分为2个主要亚型异构体,分子量分别为6149.0和6244.5,而MT-2主要分为3个亚型异构体,分子量分别为6149.0,6244.0和6127.0.MT-1和MT-2有2个亚型异构体分子量相同的异构体存在.在酸性条件下,MT-1的2个异构体及MT-2分子量为6127的亚型异构体可稳定存在.     

金属硫蛋白加质子常数及与C_d(Ⅱ)络合常数测定

用pH计和Cd离子选择电极测定了金属硫蛋白的加质子常数及其与Cd(Ⅱ)的络合常数,用改进的简化络合模型处理实验结果,得到了去金属硫蛋白(apo MT)中6类不同的加质子基团的数目及其加质子常数。对Cd(Ⅱ)滴定数据的计算表明,MT中两个结构域——α和β对Cd(Ⅱ)的络合常数相差约1000倍。从热力学定量描述了MT中两个结构域结合金属离子选择优先顺序。     

凤眼莲重金属螯合肽的分离纯化及快速鉴定

本文以凤眼莲为模式植物,研究植物重金属螯合肽的分离纯化及其快速鉴定。凤眼莲放养在含2μg/ml Cd~(2+)的水中诱导13天。组织抽提液在低盐浓度下(0.01mol/L PBS)经Sephadex G-50柱层析,得到一个含Cd的巯基峰,凝胶过滤HPLC表观分子量为10000。将此巯基峰用过甲酸氧化,凝胶过滤HPLC表观分子量降至1300以下,经反相HPLC分析只有一个肽峰。G-50 Cd-巯基峰与反相HPLC肽峰的氨基酸组成相同,均为(Glu/Gln):Cys:Gly=2:2:1。依据重金属螯合肽的通式(γ-Glu-Cys)_n-Gly,可知n=2。过甲酸氧化后,反相HPLC和氨基酸组成偶联分析是鉴定是否为重金属结合肽以及其n值的快速有效的方法。