抗栓肽和尿激酶原（B链）嵌合体的构建与表达

通过基因工程重组技术,将抗栓肽（decorsin）基因与尿激酶的B链即scu-PA(B)基因用柔性Linker((Gly₄Ser)₃)融合在一起,构建新的嵌合体基因dscuPA(B),在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中通过IPTG诱导表达, 并考察了重组质粒在Rosetta(DE3)plysS在传代中的分离稳定性。该融合蛋白在大肠杆菌中是以包涵体的形式存在,对包涵体进行变性及复性后,并通过Zn²⁺螯合柱和SP阳离子交换柱进行纯化。质谱分析表明分子量为33.735kD,与理论值相符。目的蛋白质的纯度可达90%。纤维蛋白平板法测得嵌合分子的比活为90000IU/mg,与scuPA-32k的比活相近。体外血小板聚集实验表明融合蛋白有较强的抑制血小板聚集的功能,抑制常数IC50为0.31μmol/L。以上这些结果表明,该融合蛋白不但具有较强的溶栓功能,而且具有抗栓功能,可能是一种具有很好发展前景的双功能溶栓抗栓药物。     

[B10Glu,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究

采用PCR方法,将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu,在B24和B25位之间插入Asp,构建了[B10Glu,B24-Asp-B25]胰岛素原基因.利用通用型质粒pBV220构建表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白为包含体形式,约占菌体总蛋白的20%～30%.经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白.用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切,经DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物.用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质,用圆二色谱测定了构象变化.放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明,突变体分子缔合性明显下降,放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的73.6%和146%.     

三种金属硫蛋白动力学稳定性的理论研究

对三类金属硫蛋白（大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ,兔肝金属硫蛋白亚型Ⅰ和兔肝金属硫蛋白亚型Ⅱ）的单体和二聚体进行了水溶液条件下的分子动力学模拟。其中大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ的结构直接来自于晶体数据,兔肝金属硫蛋白亚型Ⅰ和Ⅱ的结构则通过同源蛋白模型搭建。动力学模拟的结果显示,这三种单体在水溶液中都具有相当大的柔性,柔性主要来源于柔性区的氨基酸残基。三类金属硫蛋白单体的动力学模拟均表明α结构域的动力学稳定性都要优于     

山蛭素（haemadin）在毕赤甲醇酵母中的表达及其性质鉴定

人工合成山蛭素基因后,利用基因重组的方法将山蛭素的基因克隆到pPicZαA载体,经过线性化,电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500 μg/mL的zeocin筛选得到高拷贝插入的GS115-H菌株,经过优化摇瓶表达条件表达量达到100 mg/L。摇瓶培养物经离心取上清,分别使用3 kD和10 kD的超滤膜超滤,阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后,得到纯度高于95%的目的蛋白,产出量为40 mg/L,回收率为40%。通过以chromozym TH为底物的凝血酶酰胺水解实验证实了其体外生物学活性：其抑制凝血酶常数为(2.46±0.13)×10^-13 mol/L。     

金属硫蛋白清除羟自由基功能的研究

引言金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,简称ＭＴ）是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白。１９５７年Ｍａｒｇｏｓｈｅｓｅｔａｌ首次从马肾中分离出该蛋白,现发现ＭＴ几乎存在于所有生物体中。哺乳类动物的ＭＴ通常是一条６１个氨基酸的肽链,其中含有...     

人脑枕叶区衰老进程的比较蛋白质组学研究

分别从23岁、64岁、72岁、83岁以及94岁无神经性和精神性疾病史个体大脑皮层枕叶区取样．制备蛋白质样晶．进行双向凝胶电泳(2-DE)、考马斯亮蓝染色、凝胶扫描和Image Master 2D Elite软件分析，每张胶上平均可检测到1000个以上蛋白质点．通过软件半定量分析．进一步研究了衰老过程中枕叶蛋白质的差异表达，发现随年龄增长有7种蛋白质有一致的显著上升或下降趋势．应用质谱进行肽质量指纹图谱(PMF)和／或肽序列标签(PST)分析．数据库检索共鉴定了11种蛋白质．其中有5种具有一致的上调或下调性．包括神经元突触结构蛋白低分子量神经丝蛋白(Neurofilament triplet L protein．NF—L)、参与抗氧化反应的硫氧还原蛋白过氧化物酶(Peroxiredoxin)、三羧酸循环关键酶(顺)乌头酸水合酶(Aconitate hydratase)和糖代谢途径中的关键酶烯醇化酶2(Enolase 2)以及分子伴侣蛋白T复合物蛋白l(T-complex protein 1)．首次建立了正常人脑枕叶区的双向电泳蛋白质表达图谱．针对人脑枕叶区蛋白质在衰老过程中的差异表达进行了研究，并对差异表达蛋白在衰老进程中可能的生物学意义做了探讨．     

毛细管区带电泳法快速测定食品中的金属硫蛋白

 采用毛细管区带电泳法 (CZE) ,以 5 0cm× 75 μmi d 毛细管柱作为分析柱 ,0 .0 2mol/L磷酸二氢钠 0 .0 2mol/L磷酸氢二钠混合体系 (pH 7.0 )作为背景电解质 ,以紫外检测器在波长 2 0 0nm的条件下检测 ,对具有生物活性的金属硫蛋白 (MT)的两种异构体 (MT1,MT2 )进行了分离。样品经过预处理后 ,采用外标法可对食品中的金属硫蛋白进行定量测定。该方法的最低检测质量浓度为 1mg/L ,相对标准偏差低于 10 % ,加标回收率为 82 .0 %～93.4%。     

重组人三叶因子3对细胞的增殖及迁移的影响

将重组人三叶因子3(Trefoil factor 3, TFF3)作用于人结肠肿瘤细胞,研究重组蛋白对细胞增殖的影响,结果发现该蛋白在较低的浓度(10～50 mg/L)下对细胞的增殖基本没有影响,在100～200 mg/L浓度下该蛋白对细胞仅有微弱的刺激作用,提高浓度对细胞增殖作用没有改变。同时研究了TFF3对损伤的单层结肠肿瘤细胞迁移的影响,发现TFF3对细胞有明显的促进迁移作用。     

转金属硫蛋白基因平菇的营养保健功能研究初报--对小鼠生长发育、学习记忆及抗疲劳能力的影响

以ICR小鼠为实验动物,对转金属硫蛋白基因平菇的营养保健功能进行了研究。结果表明：在参考人体可能摄入量范围内,喂饲转基因平菇的小鼠生长发育、学习记忆能力和抗疲劳能力都有显著提高。     

镉诱导扁藻（Platymonas cardiformis）类金属硫蛋白的初步研究

以CdCl2作为诱导剂，用不同浓度的CdCl2对扁藻进行诱导培养，随着CdCl2浓度的升高，扁藻的生长率逐渐降低。扁藻不能耐受1mmol／L以上的CdCl2．对MTL提取液进行紫外吸收、原子吸收等测定，结果表明扁藻类金属硫蛋白的合成随着CdCl2浓度的升高而增大，至0．25mmol／L达到最大值，每克湿藻能获得1．98mgMTI，诱导效果显著。