反相高效液相色谱中溶质保留过程的热力学研究Ⅲ: 熵变及其分量,吸附及解吸附熵变

从理论上推导出了用柱相比和不用柱相比时溶质在反相高效液相色谱保留过程中的总熵变△S~(~P~a~)的两个表达式, 后者亦为计量置换保留模型中线性参数与该过程热力学函数间的定量表达式。△S~(~P~a~)也能够被分成两个独立的分量,吸附熵变△S~(~Ⅰ~,~a~)和解吸附熵变△S~(~Z~,~D~)。依据液相色谱中溶质计量置换保留模型中容量因子与流动相中置换剂活度a~D间的定量关系, 对在不同a~D条件下熔质的总熵变、吸附及解吸附熵变进行了估算, 并用实验测定的总熵变△S~(~P~a~,~e~)与估算总熵变△S~(~P~a~,~c~)进行了比较, 获得了结果的一致性。本文对传统的"吸附伴随着熵减小, 相反, 解吸伴随着熵增大"的定性规律予以定量的说明。     

反相高效液相色谱中溶质保留过程的热力学研究4: 焓熵补偿

依据液相色谱中溶质计量置换保留模型, 对溶质在反相液相色谱(RPLC)保留过程及其吸附、解吸附过程中的焓熵补偿进行了研究, 证实了在RPLC中焓熵补偿确实存在。从焓熵补偿的定义出发, 从理论上证明了溶质在保留过程中的焓熵补偿温度本质上为溶质保留值的收敛温度, 其数值为Z对1/T线性作图的斜率与截距之比。与惯常计算焓熵补偿温度的方法相比, 本文的方法所得补偿温度更为合理且不受流动相中强溶剂浓度变化的影响。     

疏水界面上标准蛋白质吸附等温线的研究

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线.除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外,细胞色素-c、肌红蛋白、胰岛素、α-淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附.用Langmuir、计量置换吸附模型(SDM-A)、BET和Jovanovic吸附模型对这些蛋白的吸附等温线拟合后发现,SDM-A关系式能够良好描述这7种蛋白的吸附,Langmuir关系仅能较好地描述后5种蛋白质的吸附.而Jovanovic和BET关系式对上述两类蛋白质吸附的描述欠妥.实验发现对于不同盐浓度条件下卵清蛋白的吸附,用SDM-A和Langmuir公式拟合所得的参数与盐浓度之间呈现出一定的规律性.     

前沿洗脱色谱中溶质突破曲线的研究

考虑了溶质与色谱固定相间的相互作用和固定相表面上活性点总数不变以及溶质在柱内的质量平衡,推导出了描述溶质在前沿色谱中突破曲线的基本方程,对此方程的性质进行了初步讨论,并将实验测定的几种生物大分子的洗脱曲线与本文推导出的方程进行了比较,获得了结果的一致性。     

用内渗水滤纸上点滴反应开展中学化学实验

内渗水滤纸是一种表层由疏水毛细管(滤纸毛细管壁被一层疏水材料覆盖、并且有疏水作用的毛细管)组成而内层仍有滤纸毛细管(以下分别简称疏水表层和内层)的特制滤纸。     

反相液相色谱中同系物体系实验点与预测方程参数间的匹配研究

以波相色谱中溶质计量置换统一保留模型（SDM-R）的二参数、三参数和四参数方程为基础,研究了在预测同系物保留值时实验点与预测方程参数间的匹配关系。用两个实验点,分别以二、三和四参数方程对反相色谱中同系物保留值进行预测,发现预测值与实验值基本相符,但以二参数方程预测结果为最佳。又与其它保留方程的预测结果进行了比较,证实了上述结论。当实验点数增加到4～5个时,多参数方程预测同系物的准确度增加,且明显高于二参数方程。同时还讨论了方程中各参数与同系物碳数间的线性关系,发现二参数方程中的参数遵循同系物变化规律。     

源于大肠杆菌蛋白的表达、液相色谱复性与纯化新进展

对近两年来源于大肠杆菌（Escherichia coli,E．coli）的蛋白表达和用蛋白折叠液相色谱（protein folding liquid chromatography,PFLC）法对所形成的包涵体目标蛋白的复性并同时纯化的新近发展做了简要的介绍和评述．PFLC法用于包涵体蛋白分离、纯化很广,其特点是除了在色谱柱上将目标蛋白与其他组分分开,还同时要在色谱柱上进行包涵体蛋白折叠．可以说,现代生物技术中所用的大多数有价值蛋白产品的制备仍然有赖于不同机理的液相色谱（Lc）法．而用PFLC法对源于E．coli的蛋白的制备方法更具可塑性和容易达到规模化,其生成本可以成倍地降低．该文主要内容包括了E．coli蛋白的表达及样品前处理、PFLC的实用范围、PFLC的优化、PFLC中的新技术、新设备和新方法、PFLC的分子学机理、应用事例及对未来的展望．     

蛋白折叠液相色谱法中流动相对重组人干扰素-γ质量回收率的影响

蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响。分别以3.0 mol/L (NH4)2SO4 +0.05 mol/L KH2PO4(pH 7.0)和0.05 mol/L KH2PO4(pH 7.0)为流动相A和B,采用35 min非线性梯度洗脱时,所得rhIFN-γ的质量回收率最高。     

α-淀粉酶在疏水作用色谱中保留的热力学研究

研究了经不同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶(α-Amylase)在疏水作用色谱(HIC) 中的保留行为.结果表明,天然及经盐酸胍变性的α-淀粉酶在HIC中的保留行为都很好地遵循非线性Van′t Hoff方程,且由所计算出的α-淀粉酶在HIC中保留的热力学参数发现,在实验温度范围内,α-淀粉酶的保留为熵驱动,焓变(ΔH0)、熵变(ΔS0)和热容量变(ΔCP 0)3个热力学参数都分别与绝对温度及其倒数之间存在线性关系. 同时,对部分胍变α-淀粉酶的折叠自由能ΔΔGF进行了测定,发现变性α-淀粉酶在HIC固定相表面的折叠自由能远比在溶液中的高,且对于相同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶,均以298K时的折叠自由能为最大.     

多功能蛋白增活器的研制及性能研究

自制了一种新型的多功能蛋白增活器,它具有同时除变性剂、分离杂蛋白、复性目标蛋白及便于回收变性剂的功能。考查了其对蛋白的分离、复性性能。发现这种多功能蛋白增活器可对６种标准蛋白进行良好地分离。同时对盐酸胍变性的溶菌酶和核糖核酸酶完全复性。通过测定压力－流速曲线,发现多功能蛋白增活器的压力均远远低于普通色谱柱。将其应用于基因工程发酵的粒细胞集落因子（Ｇ－ＣＳＦ）的分离纯化,可使纯度接近于１００％,生物活性大于常规方法３倍