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以氯甲基聚苯乙烯为基质的新型排阻色谱固定相的合成及在生物大分子分离中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
以单分散交联聚氯甲基苯乙烯为基质,先后与乙二胺和δ-葡萄糖酸内酯反应,得到了亲水性能良好的排阻色谱固定相,其表面羟基含量高达5.4mmol/g。本文评价了改性后树脂的亲水性、溶剂匹配性、耐压性能及化学稳定性,用三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液(pH=7.0)为流动相,蛋白质,混合样的分离遵循排阻色谱分离机理。聚苯乙烯和蛋白质标准样的排阻色谱分离机理。聚苯乙烯和蛋白质标准样的排阻色谱校正曲线 范 相似文献
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用疏水色谱(HIC)对8.0mol/L脲变性的α-淀粉酶(α-Amy)和α-糜蛋白酶(α-Chy)的变性动力学进行了研究。结果表明:α-Amy的变性为平缓的渐变过程,其变体数目较多,且绝大多数变体的疏水性都小于天然蛋白;α-Chy是骤变(可能是瞬间变性)过程,相对而言α-Chy的变体数目较少,且疏水性均大于天然蛋白。认为两种蛋白不同的脲变动力学行为,可能是因蛋白中α-螺旋含量以及蛋白质自身稳定性不同所致。 相似文献
55.
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0 mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40 min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rhSCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。 相似文献
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依据计量置换保留理论所得到的参数lgI, 来测定不同构象态α-糜蛋白酶(α-Chy)在两种不同高效疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相表面的折叠自由能, 发现脲变α-Chy在HPHIC固定相表面获取的折叠自由能比溶液中的高很多, 不同HPHIC固定相表面为脲变α-Chy提供不同的折叠自由能, 且都随变性剂脲浓度的增大而增大;通过对不同HPHIC色谱柱后复性α-Chy的比活测定, 还发现脲变α-Chy的复性效率与其从固定相表面的折叠自由能有关, 同一构象的α-Chy从固定相表面得到的折叠自由能越高越有利于其折叠成天然蛋白质. 相似文献
59.
60.