液—固吸附体系中计量置换吸附模型的热力学研究

研究了液－固吸附体系中溶质计量置换吸附过程中的自由能变，推导出了新的表示溶质种类、溶质浓度和溶剂对Ｇｉｂｂｓ自由能变贡献的数学表达式，并阐明了该表达式中各种参数的物理意义。将用通常方法测定的自由能变分为与溶质吸附和溶剂解吸附有关的两个独立的自由能变，推导出了液－固吸附体系中溶质计量置换吸附模型的两个线性参数βａ和ｑ／Ｚ对绝对温度倒数的线性关系，又将吸附过程中溶质的焓变和熵变分成两个独立的分量。用…     

液相色谱中的溶质计量置换保留模型

自从1983年笔者与Fred.E.Regnier教授合作提出了色谱中溶质计量置换保留模型(Stachiometric Displacement Model of Retention,以下简称为SDM-R)以     

基因重组人Gamma-干扰素发酵和提取优化工艺的研究

对基因重组人Ｇａｍｍａ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株的发酵工艺进行了研究．结果表明,采用在２５０ｍＬ摇瓶中装液量为１５０ｍＬ,按照１∶４０的稀释比进行两次扩大培养,并在大肠杆菌生长最为活跃的对数生长期内进行诱导表达效果最好．收集菌体以后,将菌体进行冷冻和超声破碎,并在２．０ｍｏｌ／Ｌ脲中浸泡８ｈ～９ｈ以清洗杂蛋白,然后用７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍（Ｇｕ·ＨＣｌ）提取．在优化工艺条件下,ｒＩＦＮ－γ的收量为９．０×１０６ＩＵ／Ｌ～１２．８×１０６ＩＵ／Ｌ,总蛋白为７９．５ｍｇ／Ｌ～１２７．２ｍｇ／Ｌ,比活为５．６×１０５ＩＵ／ｍｇ～８．０×１０５ＩＵ／ｍｇ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳含量可达６０％～８０％,使ＰＢＶ２２０ＤＨ５α工程菌株获得了高效表达．     

胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现,两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时,得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。     

用前沿色谱法测定蛋白质吸附等温线时增浓方式的研究

用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线,两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源,指出了可能解决这一问题的途径。     

关于混合模式色谱固定相对蛋白保留特征的研究

为使混合机理色谱(MMC)得到广泛地应用, 合成、表征和评价MMC固定相就成了首先要解决的问题. 依据离子交换色谱柱也具有疏水色谱(HIC)保留机理的特征, 选了4种弱阳离子交换(WCX)柱和一根二维[2D(WCX,HIC)]色谱柱, 研究了标准蛋白在这两类色谱柱上的保留行为. 这四种WCX色谱柱中的两种能在WCX和HIC两种分离模式下分离蛋白, 虽不如2D色谱柱效果好, 但有可能当成“准2D柱”来使用. 发现蛋白在这四种WCX柱上所显示的HIC分离特征各不相同, 且保留值随盐浓度变化呈现出的“U型”曲线也有大的差异. 实验结果显示, “U型”曲线的宽度和临界点分别与色谱动力学和热力学因素相关. 还对这两类色谱固定相的峰容量表征方法和命名提出了建议和说明.     

反相液相色谱中动力学因素对肽谱影响规律研究

研究了用反相色谱模式, 在不同流动相流速条件下所得到的细胞色素C的肽谱图. 发现在低流速时, 保留弱的肽谱峰增多, 而在高流速时保留强的肽谱峰增多, 未发现溶质分子质量与溶质相对保留值(RRT)之间存在有特定的变化关系. 然而却发现了两种变化规律, 即溶质相对保留值(RRT)与流动相流速之间的双对数线性关系(1) log RRT＝a＋blog ν, 及所得该二线性参数, a与b之间的线性关系(2) a＝c＋db. 预计该结果可能会在液相色谱指纹图谱研究和蛋白质组学中分离低丰度蛋白时有潜在的应用价值.     

用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置中流动相用量的优化研究

 在生物大分子的高效液相色谱分离中 ,由计量置换保留模型可得出生物大分子在色谱柱上的保留行为取决于流动相中置换剂的浓度的结论。据此提出了用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置 (USRPP)中最小流动相用量的估算公式 ,并进一步得出在保持最小流动相用量不变的条件下 ,改变流动相流速和线性梯度时间几乎不影响制备型USRPP分离蛋白的分离度和复性效率的结论。该结论与实验结果一致。     

反相液相色谱中溶质保留参数间的定量关系研究

 比较了Snyder经验公式中的K0w 与S和溶质计量置换保留模型 (SDM R)中溶质保留参数Z(1mol溶剂化溶质被溶剂化固定相吸附时 ,在其接触表面处释放出溶剂或置换剂的总摩尔数 )与lgI(与 1mol溶质对固定相的亲和势有关的常数 )之间的定量关系。SDM R中的两个参数间不仅对同系物溶质可以有很好的线性关系 ,而且对非同系物溶质也有很好的线性关系。其线性关系的好坏主要取决于这两个参数数值范围的大小 ,与文献中报告的线性关系取决于是否单因素影响溶质的保留和完全由统计学规律决定的结论不同。