实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞建系的初步研究

目的将五指山猪(Wuzhi Shan Pigs,WZSP)表皮干细胞传至15代以上,初步建立实验用近交系小型猪WZSP表皮干细胞系。方法采集WZSP耳组织,通过中性蛋白酶消化获得表皮细胞,再通过0.25%胰酶 0.02?TA消化制成单个表皮细胞悬液,接种在Ⅳ型胶原包被的培养瓶内,采用无血清条件培养基培养,0.25%胰酶消化传代。对所培养表皮干细胞进行AKP染色鉴定。结果表皮干细胞能够快速粘附在Ⅳ型胶原上,呈克隆状生长,已传至15代以上,传代间隔为7 d左右;取第5代细胞进行AKP染色呈阳性。结论在本实验条件下,建立ESCs细胞系是可能的,经鉴定,所培养细胞具有干细胞基本特性。     

猪胚胎干细胞(EG)嵌合体鉴定研究

应用微卫星技术,检测验证经显微注射胚胎干细胞(EG)而获得的嵌合体猪,在其各种组织中的外源基因的嵌合情况。结果表明:本研究中所获得嵌合体猪的皮肤、大脑、胰、甲状腺、血有外源基因嵌合,而其肺、肝、脾、肾、空肠、卵巢这些组织并没有嵌合。     

自然分娩人工饲养获得净化小型猪尝试

目的探讨自然分娩人工饲养能否获得净化的五指山小型猪。方法母猪自然分娩后2 h内,将仔猪处理后转到隔离器,用奶粉、米粉、饲料分别过渡人工饲养。其间分别接种7次益生菌、补充铁硒制剂两次。饲养至42 d,测定其携带病原抗体。结果仔猪成活率为75%,原猪场所具有的病原均被隔离,达到净化试验目的。结论自然分娩人工饲养能获得无多种人畜共患疾病的净化五指山小型猪。     

促减数分裂甾醇（MAS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育能力的影响

利用促减数分裂甾醇(MAS)合成代谢过程中的抑制剂AY9944累积FF-MAS的原理,在猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944,间接地研究了内源性MAS对猪卵母细胞体外成熟质量的影响.猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCs)培养在NCSU23成熟培养液中,并添加不同浓度(0,10,20,40μmol/L)的AY9944培养44h.培养结束后,成熟的卵母细胞进行孤雌激活和以胎儿成纤维细胞为核供体重构胚胎,分别于48和144h观察胚胎发育情况,统计卵裂率和囊胚率及囊胚/2-细胞胚比率.结果如下:(1)随着AY9944添加浓度的增加,退化的卵母细胞增多,40μmol/L AY9944处理的退化卵显著,卵母细胞成熟率显著下降.(2)成熟培养液添加20和40μmol/L AY9944处理的孤雌激活胚胎的囊胚形成率和2-细胞胚发育到囊胚的比率显著增加(P<0.05).(3)以对照组(0μmol/L AY9944)和20μmol/L AY9944处理的卵母细胞为胞质受体,发现20μmol/L AY9944处理的克隆胚的发育能力囊胚率和2-细胞胚发育到囊胚的比率有所提高,但无显著差异(P>0.05).以上结果表明,猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944提高了猪卵母细胞体外成熟的胞质质量,胚胎的发育能力提高.     

小型猪生长激素基因研究进展

小型猪(Miniature pig)由于其体型小、饲料消耗少、便于操作、世代间隔短、具有大家畜和实验动物的双重特点,因此是一种理想的实验动物模型。目前主要应用于医学中的新药开发与鉴定、胚胎工程技术、心血管模型建立等研究领域[1]。猪生长激素(Porcine growth hormone,PGH)是由猪     

实验用小型猪胚胎移植技术研究进展

猪虽与人为非近缘关系,但二者在解剖学、生理学上相似性很高,且生化指标和器官大小极近似于人。所以广泛应用于生物医学等领域的研究。随着人类医学以及生物科学的发展,以猪作为实验动物的需求量不断攀升,自1966年以来,猪作为试验动物的用量排在各类试验动物使用量的第4位。     

中欧药学生物技术新药开发及动物模型研讨会会议记要

为了促进新药的开发，推动在该领域的信息交流，加强中国与欧盟国家在新药开发及动物模型研究领域的合作，此次会议邀请中国及欧盟国家药学、生物技术、基因组学及系统生物学学科领域的科学家，就该专题领域多个研究方向展开研讨和交流，加强沟通，尝试合作。     

皮肤移植排斥反应的研究进展

利用皮肤移植技术对近交系实验动物进行遗传检测和治疗人类皮肤烧伤等疾病已应用多年。本文简述皮肤移植免疫机理、移植后免疫反应时间以及受体细胞因子变化规律等内容。     

近交培育五指山小型猪GHR基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的探讨近交培育五指山猪矮小的分子机理,为五指山猪实验动物化奠定基础。方法近交系五指山猪肝脏组织提取总RNA,然后RT-PCR成功扩增出GHR基因,克隆入pGEM-Teasy载体进行测序,并与正常猪GHR基因序列进行比对;然后经SalⅠ和XbaⅠ双酶切回收后与同样经过双酶切回收的pEGFP-C1真核表达载体连接,构建五指山猪GHR基因真核表达载体。结果测序结果表明:五指山猪GHR基因编码区包括639个氨基酸;经过酶切和测序验证五指山猪GHR基因真核表达载体构建成功。结论经序列比对后发现GHR信号肽编码区发生两处氨基酸替换,可能会影响到生长激素的胞内运输;生长激素受体胞内域编码区发生多处突变,并且导致相应氨基酸发生替换,可能会影响生长激素受体的下游信号转导。五指山猪GHR基因真核表达载体的成功构建为进一步研究GHR的功能和下游信号转导奠定了基础。     

小型猪近交系鉴定研究进展

本文综述了国内外小型猪近交系鉴定方法的研究进展,包括：异体皮肤移植鉴定、基因组水平鉴定、生理生化标记、同工酶蛋白质鉴定、DNA遗传标记、SNP分析等分子遗传学的方法。综合分析,异体皮肤移植技术是大型哺乳动物近交系最佳鉴定方法。该技术将为我国创新资源近交系猪培育和开发利用奠定科学基础,为大型哺乳动物近交系鉴定提供科学的检测技术和方法,并使我国大型哺乳动物近交系研究处于国际领先地位。