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枯草芽孢杆菌通过超声破壁,(NH4)2SO4分段盐析,DEAE SepharoseFF离子交换层析,Blue SepharoseCL 6B亲和层析,SephadexG 200凝胶过滤等纯化步骤,分离出6 磷酸葡萄糖脱氢酶。经PAGE和SDS PAGE检测为单一蛋白区带,比活1 7375IU/mg,纯化倍数72 7,收率13 6%。凝胶过滤法测定表观分子量220KD,SDS PAGE测定亚基分子量50 5KD,可见该酶是由四个相同亚基构成的四聚体。测定最适pH、温度分别为8 5,37℃,底物G6P的Km值0 177mmol·L-1。考察了部分金属离子及EDPA对该酶活性、紫外、荧光光谱的影响。 相似文献
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采用DEAE—Sephaurose离子交换层析,Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术,对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化,纯化倍数为112.3倍,比活为1.46U/mg,回收率为8.2%,纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带,测得全酶相对分子质量为107kD,具有两个分子量相同的亚基,亚基相对分子质量为51kD,最适pH值为8.0,最适温度为30℃,对热不稳定,以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物,其Km值分别为Km1(NADP^ )=19.8μmol/L和Km2(6-GPA)=22.6μmol/L,在5mmol/L~50mmol/L浓度范围内,Mg^ ,Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用,Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用,K^ ,Na^ ,Cl^-,NO^-3,SO^-4对酶几乎没有影响,用PMSF,TNBS,NBS,DTT和BrAc对酶进行修饰,实验结果表明,丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。 相似文献
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