转基因满江红鱼腥藻细胞内颗粒体的变化

用透射电镜观察NPTⅡ(新霉索磷酸转穆酶Ⅱ eomycin phosphotransferase Ⅱ)在满江红鱼腥藻染色体gI-LA(谷氨酰氪合成酶基因)位点定点整合后藻细胞内颗粒体的变化．转基因后的满江红鱼腥藻细胞内的代谢发生了很大的变化，为了快速适应和自我调节这一变化．细胞内的储藏颗粒处在积聚与解积聚的动态转化过程中．通过了解储藏颗粒的结构变化，可为研究转基因藻细胞光合同氮及生理生化的变化提供物质结构方面的信息．     

NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。     

植物激素对小立碗藓愈伤组织诱导及分化影响

小立碗藓(Physcomitrella patens(Hewd.)B.S.G.)作为独特的模式植物在分子生物学研究中被广泛应用.本实验以改良的Knop培养基为基本培养基,研究添加不同种类和浓度配比的植物激素对小立碗藓愈伤组织诱导及分化的影响.实验结果表明当糖浓度为2%,添加KT 0.05 mg·L-1或添加6-BA 0.05 mg·L-1,在温度(25±1)℃,光照强度3000～4000lx,光照周期12/12 h/d条件下培养,诱导小立碗藓愈伤组织的效果最为理想.诱导愈伤组织分化的实验结果表明未添加任何植物激素的Knop培养基上分化出正常的配子体且数量最多.添加2,4-D或IAA的培养基上能长出较多的原丝体.     

水稻cFBA和菠菜cpTPI串联基因在鱼腥藻7120中的表达及其对光合作用的影响

利用转基因技术，将水稻cFBA和菠菜cpTPI串联基因转入到鱼腥藻7120中进行表达．结果发现：与野生藻相比，转基因藻蛋白粗提液中两个酶的比活力提高了33．3％；转基因鱼腥藻的生长明显优于野生型鱼腥藻，当在培养基中添加适量NaHCO3时，这一优势更加明显；转基因鱼腥藻的净光合速率和真实光合速率都有明显提高，光饱和点和光补偿点也有所提高．以上这些结果表明，在鱼腥藻7120中特异的提高“非限速酶”——FBA和TPI的水平，能在一定程度上提高转基因鱼腥藻的光合作用速率和生长速度．     

转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻6803及其野生藻培养

通过摇瓶培养考察转小鼠金属硫蛋白基因集胞藻６８０３及其野生藻的光合自养培养过程中碳源浓度、氮源浓度和光照度对这两种藻生长的影响。野生藻的最适生长碳源浓度（０．０５－０．５ｇ／Ｌ）比转基因藻的最适生长碳源浓度（０．０２－０．０５ｇ／Ｌ）高。氮源浓度对转基因藻和野生藻的影响趋势相同。在０．３－４．５ｇ／Ｌ范围内,随着氮源浓度的增高,藻体生长的最大细胞浓度降低。转基因藻生长的最佳光照度为１５００ｌｘ,野     

对虾白斑病毒VP28基因在聚球藻中的表达与分析

通过PCR从实验室保存的pMD-VP28质粒中扩增得到对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28基因,同时在设计的引物起始密码子前添加促进外源基因在蓝藻中表达的SD序列,引物末端添加限制性内切酶住点BamH I和EcoR I,从质粒pRL-439获得强启动子PpsbA,酶切连接构建了pDC-VP28高效表达穿梭裁体.利用三亲接合转移成功地将构建的栽体pDC-VP28转化聚球藻7002.对转基因聚球藻进行培养,其表达产物通过SDS-PAGE分析,发现表达量达3%左右.     

不同光质对紫球藻生长及藻胆素含量的影响

利用绿光、蓝光、红光、白光(对照)4种光质培养紫球藻,通过测定藻密度和藻液的光吸收以比较不同光质对紫球藻生长的影响,同时测定藻胆素含量,可溶性总蛋白的含量．实验结果表明:绿光培养条件下紫球藻的生物产量、藻胆素、可溶性总蛋白的含量最高,蓝光次之,而在红光培养条件的紫球藻生长最缓慢．实验数据为紫球藻的高密度放大培养提供依据．     

转人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)基因的鱼腥藻的构建

本研究目的是构建转G-CSF基因的工程鱼腥藻Anabaena sp..首先将b型G-CSF克隆于中间载体pRL 439和穿梭表达载体pDC-8上.通过三亲接合转移将穿梭表达载体pDCG-CSF转入鱼腥藻内.通过PCR扩增的方法在转基因鱼腥藻中检测到G-CSF基因的存在.     

蓝藻接合转移系统以及相关因素

蓝藻是一类进行光合放氧的原核生物,蓝藻因其结构的特点,已经成为表达外源基因的理想宿主之一,而接合转移是蓝藻基因转移系统中普遍使用的一种方法。通过接合转移技术可以深入研究光合作用、细胞分化、氮固定和对环境的抵抗。介绍了有关蓝藻接合转移的载体、质粒以及接合转移在蓝藻中的应用,为蓝藻基因工程发展提供信息。     

封闭式光生物反应器集胞藻6803光自养和混合营养培养比较

采用封闭式光生物反应器进行了蓝藻基因工程常用宿主系统集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803的混合营养培养,并与光自养培养进行了比较,在两种培养方式下,集胞藻6803的饱和光强基本相同,都为5000lx,当入射光强为5000lx,初始葡萄糖浓度为1．74g/L时,混合营养生长在葡萄糖消耗完（69．5h)时的藻细胞密度为1．36g/L,叶绿素浓度为20．08mg/L,能量得率为16．7％,分别为同期光自养生长的3．8倍,2．3倍和2．6倍,这表明封闭式光生物反应器混合营养培养方式在促进集胞藻6803生长和光合色素合成及提高培养过程能量得率等方面都有显著作用。