应用电镜放射自显影技术研究病毒DNA的复制及宿主细胞内RNA的转录

应用电镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒(DPV)DNA复制及宿主细胞内RNA的转录功能,并扼要报导了我们的主要实验结果: 1.DPV的DNA合成是在核内电子密度较低的均匀基质中进行的,随后,转移到电子致密的毒浆结构中装配病毒核壳体。从病毒DNA复制到发育成熟的病毒仅需3小时。 2.DPV的DNA复制的持续时间较长。病毒DNA的复制与核壳体的装配及病毒的成熟与释放可同时进行。 3.DPV在细胞核内装配,也可在细胞质内装配。 4.宿主细胞的核仁依然存在,并保持其转录RNA的功能。     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

非洲爪蟾卵提取物中200nm膜泡与环形片层及核被膜上核孔复合体形成的关系

将ＬａｍｂｄａＤＮＡ引入活化的非洲爪蟾卵提取物中，在由磷酸肌酸与磷酸肌酸激酶构成的ＡＴＰ再生系统的参与下，在这种非细胞体系中能够围绕由ＬａｍｂｄａＤＮＡ诱导形成的染色质重建核被膜结构，同时在染色质外出现类似核被膜结构的环形片层。在这两种膜结构中核孔复合体的形成都与直径２００ｎｍ左右的单层圆形小膜泡密切相关，这些小膜泡可以附着在染色质表面或独立于染色质之外相互融合成扁平囊状的双层膜片层，双层膜进一步融合形成核孔，与此同时，核孔复合体在核孔上完成装配。     

非细胞体系重建核染色质组装、结构和DNA复制

用lambda DNA和蛙卵提取物进行非细胞体系核重建实验,结果显示,lambda DNA参与构成了重建核的染色质;染色质组装是逐步进行的;组装的染色质含有典型的核小体串珠状一级结构、300的螺线管和染色质的更高级结构;重建核能够复制DNA。     

神经丝的体外组装与结构分析

神经丝的体外组装与结构分析佟向军１陈建国１刘洁２庞世瑾２翟中和１（１．北京大学生命科学院，２．中国科学院高真空物理国家实验室）神经丝是第Ⅳ类中间纤维，特异地在神经细胞内表达，在神经轴突中相互平行排列成束，是神经细胞骨架的主要成分，占蛋白总量的８０％以...     

THE ASSOCIATION OF VACCINIA VIRUS WITH INTERMEDIATE FILAMENT

The intermediate filament-lamina-nuclear matrix system (IF-lamina-Nm System) can be shown clearlyusing selective extraction, embedment-free electron microscopy and whole mount cell preparation. A del-icate intermediate filament network was demonstrated in vaccinia virus factory for the first time. It isa part of the cytoplasmic intermediate filament network. The components and substructures of vacciniavirus bind firmly to intermediate filaments. Both assembled and assembling vaccinia viruses are fixedin the intermediate filament network. Direct connections between viruses and intermediate filaments canbe observed. We propose that vaccinia virus assembly depends on intermediate filaments as support.     

猪瘟病毒的形态结构与形态发生的电子显微镜研究

猪瘟病毒的形态结构与形态发生的电子显微镜研究王镇闵光伟李明义藤俊琳丁明孝翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）猪瘟病毒（Ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）属瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）、黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖｉ...     

Association of Chromosomal Telomere DNA With Nuclear Matrix in HeLa Cell

Using Electron Spectroscopic Imaging (ESI), we visualized the in situ binding of nucleic acids to nuclear matrix and 3H-thymidine incorporation which indicates that a small partial DNA bound to nuclear matrix tightly. Furthermore we found that chromosomal telomere DNA could bind to nuclear matrix specifically by the dot and Southern hybridization. The result of the Southwestern blot suggests that telomere DNA has high affinity to lamin B, vimentin and some nuclear matrix proteins. Therefore, the nuclear matrix and lamina of HeLa cell are possibly associated with spatial organization and action of chromosome.     

DGD包埋－去包埋样品的免疫标记

小鼠膀胱上皮细胞经细胞选择性抽提和ＤＧＤ包埋后，制备超薄切片，并对其进行免疫标记。结果表明，ＤＧＤ包埋－去包理样品中的ＡＵＭ蛋白仍可特异地被抗体所识别，这一结果为证明小鼠膀胱上皮细胞中由ＡＵＭ蛋白组成的梭形泡以及腔面不对称单位膜结构均与中间纤维相连提供了证据。本文还对ＤＧＤ白埋后样品免疫标记技术进行了讨论。     

鸭瘟病毒DNA合成动态与部位的电子显微镜放射自显影研究

本文应用~3H-TdR掺入的电子显微镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒DNA在细胞内合成的动态与部位,证明鸭瘟病毒DNA合成的持续时间很长,当病毒核壳体大量装配、病毒粒子已经成熟与释放时,病毒DNA的合成仍继续进行。病毒DNA是在核内电子密度低的基质中合成的。核内毒浆是病毒DNA积聚与核壳体装配的场所,不是病毒DNA合成的部位。