冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

一种用于暗场电镜术的超薄碳膜制备方法

高分辨透射电镜术观察单个重原子和未染色生物分子,一个重要问题是底质的背景噪音。利用超薄(20—30A)碳膜做支持物和暗场电子显微术成象较好地解决了这个问题。近年来利用这种技术研究核酸、蛋白质等生物分子.获得了许多新的结构信息。一些作者应用间接蒸发碳到新劈开的云母片,制备较均匀和颗粒性小的超薄碳膜(1、2)。本文介绍了一种简易高效制备超薄碳膜的装置和方法。     

猪瘟病毒的形态结构与形态发生的电子显微镜研究

猪瘟病毒的形态结构与形态发生的电子显微镜研究王镇闵光伟李明义藤俊琳丁明孝翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）猪瘟病毒（Ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）属瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）、黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖｉ...     

Association of Chromosomal Telomere DNA With Nuclear Matrix in HeLa Cell

Using Electron Spectroscopic Imaging (ESI), we visualized the in situ binding of nucleic acids to nuclear matrix and 3H-thymidine incorporation which indicates that a small partial DNA bound to nuclear matrix tightly. Furthermore we found that chromosomal telomere DNA could bind to nuclear matrix specifically by the dot and Southern hybridization. The result of the Southwestern blot suggests that telomere DNA has high affinity to lamin B, vimentin and some nuclear matrix proteins. Therefore, the nuclear matrix and lamina of HeLa cell are possibly associated with spatial organization and action of chromosome.     

电镜技术解析出30nm染色质的双螺旋结构

正2014年4月25日,中国科学院生物物理研究所朱平研究员和李国红研究员课题组在美国Science杂志上,以研究论文(Research Article)形式发表了题为"Cryo-EM study of the chromatin fiber reveals a double helix twisted by tetranucleosomal units"的学术论文,解析了30 nm染色质纤维的三维结构,提出了"左手双螺旋结构"模型。这一重大发现,受到国内外学者的密切关注。1一道憋了30年的难题DNA是细胞中遗传物质的载体,它究竟以什么     

鸭瘟病毒DNA合成动态与部位的电子显微镜放射自显影研究

本文应用~3H-TdR掺入的电子显微镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒DNA在细胞内合成的动态与部位,证明鸭瘟病毒DNA合成的持续时间很长,当病毒核壳体大量装配、病毒粒子已经成熟与释放时,病毒DNA的合成仍继续进行。病毒DNA是在核内电子密度低的基质中合成的。核内毒浆是病毒DNA积聚与核壳体装配的场所,不是病毒DNA合成的部位。     

用高压电镜与立体视镜观察整装细胞内病毒与细胞骨架的关系

以前,我们曾发现牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)可诱导大量对松胞素B不敏感的微丝,而且病毒的释放与微丝结构有某种关系。在此基础上,我们用整装电镜技术对细胞骨架与成熟病毒的关系做了进一步地探讨。将牛肾次代细胞培养在敷有方华膜和鼠尾胶膜的金网或镍网上,接种病毒24小时后,在室温下用戊二醛和锇酸固定细胞,并用醋酸双氧铀染色1小时,再经脱水和临界点干燥后,于日本JEM—200CX电镜下观察,加速电压200KV,同一视野以8度之差,拍摄二张照片,用于立体视镜观察。正常牛肾细胞的边缘,细胞质膜完整,骨架系统层次分明,线粒体等细胞固定在细胞骨架网络上。在IBRV感染的细胞中,细胞骨架发生了明显的变化,其层次减少,微丝束增多,分布似乎更有方向性。许多区域细胞质     

DGD包埋－去包埋样品的免疫标记

小鼠膀胱上皮细胞经细胞选择性抽提和ＤＧＤ包埋后，制备超薄切片，并对其进行免疫标记。结果表明，ＤＧＤ包埋－去包理样品中的ＡＵＭ蛋白仍可特异地被抗体所识别，这一结果为证明小鼠膀胱上皮细胞中由ＡＵＭ蛋白组成的梭形泡以及腔面不对称单位膜结构均与中间纤维相连提供了证据。本文还对ＤＧＤ白埋后样品免疫标记技术进行了讨论。     

痘苗病毒复制与中间纤维的关系

痘苗病毒属于痘病毒科,是最大最复杂的一类动物病毒。其繁殖过程中最突出的特点是,病毒的DNA复制是在宿主细胞质内进行的。最近发现,在真核生物的细胞核中,有活性的DNA聚合酶不是沿DNA模板滑行,而是固定在核骨架上进行DNA复制。那么在细胞质内复制的痘苗病毒DNA是否也与某种细胞骨架成分相关?其复制方式是否也与核内DNA复制的模型相似?这不仅对于深入了解病毒DNA复制方式,而且对于了解细胞骨架的结构与功能都有重要的意义。     

HeLa细胞端粒DNA与核骨架的特异性结合

本文首先应用电子能量损失谱成像技术通过对磷元素的分析,直观地显示核酸与HeLa细胞核骨架纤维的结合;再用~3H-Thymidine掺入实验说明有一部分DNA紧密结合在核骨架上;继而用Dot和Southern分子杂交分析证明染色体端粒DNA特异地与核骨架紧密结合;最后采用DNA与蛋白质的体外吸附杂交实验进一步说明端粒DNA序列与Lamin B,波形蛋白(Vimentin)以及某些核骨架蛋白质有较高的亲和性。从而逻辑地推测HeLa细胞核骨架,Lamina参与染色体的空间排布及其行为。