分子印迹流动注射化学发光法测定盐酸强力霉素

研究发现在碱性条件下,盐酸强力霉素对鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光反应具有明显的增敏作用,据此建立了分子印迹-流动注射化学发光法定量分析盐酸强力霉素的新方法。以甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂合成了盐酸强力霉素的分子印迹聚合物。以此分子印迹聚合物为分子识别物质,利用盐酸强力霉素-鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系,结合流动注射化学发光分析技术,建立了测定盐酸强力霉素高选择性的分子印迹-流动注射化学发光分析方法。方法的线性范围为9.0×10-7～6.0×10-5 g·mL-1,检出限为3.2×10-7 g·mL-1。对6.0×10-6 g·mL-1的盐酸强力霉素水溶液进行分析,9次平行测定的相对标准偏差为3.5%。利用此方法测定尿样和盐酸强力霉素药片中盐酸强力霉素的含量,结果令人满意。     

非糖基化促红细胞生成素的聚乙二醇定点修饰及修饰产物性质

临床用重组人促红细胞生成素(rhEpo)是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell, CHO)表达的糖蛋白, 糖基对稳定蛋白的结构和生物活性非常重要, 但CHO表达体系生产成本高、产量低. 以大肠杆菌表达的促红细胞生成素为非糖基化蛋白(rh-ngEpo), 对其进行聚乙二醇(PEG)修饰可以提高蛋白稳定性和体内循环半衰期. 本文采用分子量为20000的N-末端专一性的单甲氧基聚乙二醇-丙醛(mPEG-ALD)修饰rh-ngEpo, 对影响修饰反应的因素进行了考察. 结果表明, 在最佳反应条件下, 单修饰率可达55%. 修饰混合物经离子交换层析分离, 获得了纯度大于95%的单修饰产物, 其二、三级结构证明与原蛋白相似. 肽图分析结果表明, PEG绝大部分修饰在蛋白N-末端的氨基酸残基上. ELISA分析表明, 单修饰产物的体外活性虽然比修饰前减少30%, 但热稳定性得到显著增强, 在SD大鼠体内的药代动力学性质得到显著提高. 研究结果表明, PEG可以在一定程度上替代糖基的作用, PEG修饰的非糖基化Epo有望成为一种新型的促红细胞生成蛋白药物.     

聚乙二醇共价修饰药用蛋白质的分析方法

聚乙二醇共价修饰蛋白质具有重要的生物学应用意义。分析聚乙二醇共价修饰蛋白质对确定产物的修饰程度是必要的,近年来渐成研究热点。主要介绍了聚乙二醇共价修饰蛋白质的各种分析方法与其优缺点。同时对不同原理的分析方法进行了分类比较。     

高分子多孔微球产品的制备及其在类病毒颗粒分离纯化中的应用

高分子多孔微球在医药领域的分离纯化中应用广泛,是重要的化工产品。高分子多孔微球的形成是一个复杂的过程,利用聚合物与有机溶剂致孔剂的相分离,可得到小于100 nm孔径的多孔微球;而水和疏水性聚合物之间相分离程度远大于有机溶剂与聚合物间的相分离程度,因此可获得大于100 nm孔径的多孔微球。针对不同应用领域选择不同的方法,设计并制备出合理的微球结构,对多孔微球的实际应用十分关键。本综述介绍了纳孔、介孔、大孔微球产品的制备方法悬浮聚合和种子聚合法,重点介绍本课题组制备超大孔微球的方法--反胶团溶胀法和W/O/W复乳法,上述两种方法解决了常规方法难以制备大孔径微球产品的问题,拓展了多孔微球在类病毒颗粒等大尺寸蛋白分离纯化领域的应用。在此基础上,以HB-VLPs为模型对比了不同孔径微球对类病毒颗粒吸附量、回收率、结构、以及纯化效果的差异,揭示超大孔微球产品在类病毒颗粒分离纯化中的优势。     

微波能用于酵母中海藻糖高效液相色谱分析样品制备的研究

利用微波能提取酵线中的海藻糖，建立了一种海藻糖分析样品的快速制备方法。高效液相色分析结果表明，无论是提取选择性、还是提取时间消耗，用微波法提取均具有常规提取法所无法比拟的优越性。经２０ｓ微波处理后，海藻糖酶已失活，故有效防止了提取过程中海藻糖的降解。微波提取不失为一种良好的样品的制备方法，尤其适用于对酵母低谢的研究。     

大孔树脂分离提取麻黄碱的研究

本文研究了九种大孔吸附树脂对麻黄碱的吸附能力，其中以D151，XAD－4，XAD－7的吸附效果较好，静态吸附容量分别为240.4mg/ml,122.1mg/ml,87.2mg/ml。三种树脂最佳吸附pH值为11，D151和XAD－7采用.08mol/L的HCl洗脱，XAD－4采用0.02mol/L的HCl与甲醇1：1的混合液洗脱。将三种树脂直接用于麻黄草提取液的麻黄碱分离提取，回收均在90％以上，纯度在80％以上，一次吸附提纯倍数为15－19倍。     

聚乙二醇修饰蛋白体系的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法新探

比较了聚乙二醇修饰蛋白体系的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)银染、考染、碘化钡染色3种染色方法;提出和比较了银染-碘化钡复染和考染-碘化钡复染2种复染方法.结果表明,银染-碘化钡复染的凝胶中,未修饰蛋白条带消失,PEG修饰蛋白条带保留,游离PEG条带显色;而考染-碘化钡复染的凝胶中,未修饰蛋白、修饰蛋白和游离的PEG条带可同时显色.两种复染方法中,PEG组分的检测限均达到了0.01μg.因此,对PEG修饰蛋白体系的SDS-PAGE可先用考染或银染后再用碘化钡复染,便可在同一块凝胶上先后或同时观察到未修饰蛋白、修饰蛋白和游离PEG的情况,简化了实验操作,方便了实验结果的比较分析.     

合成分枝型聚乙二醇的简便新方法

以赖氨酸和mPEG5000为起始物,利用多肽合成中常用的保护、缩合和脱保护等方法合成了在生物医学领域中具有重要应用价值的分枝型聚乙二醇.用该方法形成的分枝型PEG在有机相中以缩合反应的方式一步完成,反应条件温和,且有较高的产率(61%).各步产物的表征都与其结构一致.最终产物分枝型PEG的¹HNMR的表征结果与其结构吻合.     

基于灰色灾变模型的通货紧缩预测

针对未来期间通货紧缩是否存在的分歧以及通货紧缩可能存在的危害性,利用灰色灾变预测模型结合中国通货紧缩的小样本数据,预测未来通货紧缩发生的日期,预测结果显示通货紧缩约在2020年前后出现,预测结果一方面意味着当前应该审慎选择货币政策和财政政策,另一方面在2020年前后应该积极调整货币政策和财政政策,避免通货紧缩的出现可能给经济运行带来的负面性影响.     

疏水相互作用色谱法分离大豆凝集素

采用疏水相互作用色谱法（ＨＩＣ）,以苯基琼脂糖凝胶ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ为固定相,硫酸铵－磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ６．８）为流动相,从大豆匀浆液中分离出大豆凝集素（ＳＢＡ）。