多肽电泳结合质谱技术在血清多肽组学研究中的应用

近年来,多肽组作为蛋白组的补充部分,被众多研究者所瞩目,血清多肽标志物用于临床诊断的报道越来越多[1].     

MALDI-TOF-TOF-MS对完整蛋白质C端序列的直接测定

C端序列测定是蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的必检项目.本文建立了基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-FOF-TOF-Ms)串联质谱的源内裂解(IsD)技术进行蛋白质c端的测定方法.此方法成功应用于纽兰格林(Neuregulin)、TP-Ⅱ、泛素(ubi)和肌红蛋白(myo)的C端测序,且分别检测到了c端的10、24、24和36个氨基酸残基.该方法简便快速,适用于部分蛋白药物的质量控制和结构确证.     

硅烷化处理对Moo/HZSM-5催化剂上甲烷脱氢芳构化活性的影响

结合催化剂的活性评价及固体高分辨核磁共振谱、X射线光电子能谱和X射线荧光光谱和热重等技术,考察了硅烷化处理对Mo/HZSM-5催化剂上甲烷脱氢芳构化活性的影响.结果表明,采用大分子有机硅烷对HZSM-5分子筛进行硅烷化处理,除去了分子筛外表面的酸性位,并使分子筛本身发生了脱铝.硅烷化处理使Mo/HZSM-5催化剂在进行甲烷脱氢芳构化反应时催化剂上总的积碳量明显减少,从而提高了催化剂的活性.     

无标记定量法研究冠心病不稳定性心绞痛血瘀证的差异蛋白质组

应用高解析离子淌度质谱(HDMS)与纳升级超高效液相色谱(UPLC)联用, 寻找冠心病不稳定性心绞痛血瘀证血浆差异蛋白, 探索冠心病不稳定性心绞痛血瘀证的蛋白质组学特点. 采用美国Agilent公司多克隆抗体亲和柱去除冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者和健康人血浆中6种丰度最高的蛋白后, 进行无标记定量蛋白质组(Label free proteome)分析. 结果表明, 本方法的离子强度变异系数小于5％, 保留时间变异系数小于3％, 具有良好的重现性. 动态范围约104数量级. 总蛋白数3843种, 差异倍数大于1.5倍的差异蛋白数25种, 上调蛋白数13种(包括心绞痛血瘀证患者独有蛋白3种), 下调蛋白数12种. ACTA1, ITIH3和 LBP仅在冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者血浆中表达, Haptoglobin, SAA, CP, C6, MYH11, APOH和ANXA6在冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者中高表达, 而HBB, HBA, HBE, HBD, HBG, HRG, IGHG, GSN和TF在冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者中低表达. 表达上调的差异蛋白根据功能可分为: (1) 急性时相反应蛋白; (2) 补体蛋白; (3) 细胞骨架蛋白; (4) 凝血相关蛋白. 表达下调的差异蛋白根据功能可分为: (1) 载脂蛋白; (2) 运输蛋白; (3) 抗凝血相关蛋白; (4) 免疫球蛋白; (5) 细胞骨架调控蛋白. 以上结果提示, 冠心病不稳定性心绞痛血瘀证可能属于一种炎症反应; 冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者可能同时存在心肌损伤、凝血因子异常、脂代谢紊乱与氧运输障碍; 这些方面相互影响, 互为因果. 这些差异蛋白可为研究或发现抗心绞痛药物作用的新靶标提供线索. 本研究结果表明, 非标记定量蛋白质组学(Label free proteomics)是疾病及证候生物标志物研究的一种有效手段.     

多目标识别的联合变换相关器的研究

提出了一种可用于多目标识别的联合变换相关器。为改善相关信号的性能,对功率谱作了优化处理。为消除相关面上的零级项和目标间的相关项,可用联合功率谱减去纯目标输入的功率谱和参考图像的功率谱;为增强和锐化相关峰,将相减的功率谱作指数函数滤波处理。分析了指数滤波参数对相关结果的影响。计算机模拟结果表明,这种相关器所输出的相关信号比经典联合变换相关器和二元联合变换相关器输出的相关信号更好,互相关得到了抑制,自相关得到了增强,具有很好的抗噪能力。     

重组人FK506结合蛋白12的基体辅助激光解析电离飞行时间质谱分析

用MALDI－TOF－MS测定了具有生物活性的重组人FK506结合蛋白12(rhFKBP12)的分子量和胰蛋白酶酶解的肽质量指纹谱,实验测定结果与理论计算值一致。证明其一级结构是正确的,在表达、复性和纯化过程中没有氨基酸的丢失、变异和修饰。     

防御性蒸馏网络抗梯度攻击的鲁棒性分析

防御性蒸馏自提出后,由于其对梯度攻击有很好的防御效果,已被广泛用于提高神经网络的鲁棒性.但是原始蒸馏过程需要对教师和学生网络进行共两次训练,即需要双倍的算力.目前许多工作仍然基于原始的防御性蒸馏方法来增强模型的鲁棒性.文章指出,防御性蒸馏应对梯度攻击的鲁棒性仅与最大的两个logits的差值有关,而logits值与温度和损失函数值有关.学生网络向教师网络学习这一蒸馏过程并非防御性蒸馏起作用的根本原因,只需在训练时增大最大两个logits值之差即可达到防御对抗攻击的作用.文章理论推导并实验验证了上述结论,并基于logits值与温度的正相关关系设计了最佳温度的估计算法,该算法可显著减少寻找最佳温度所消耗的算力.在数据集MNIST和CIFAR-10上,文章提出的快速防御性蒸馏对梯度攻击的鲁棒性与原始防御性蒸馏相同,算法时间消耗和测试集成功率均优于原始防御性蒸馏.文章研究对于防御性蒸馏原理的理解具有理论意义,对防御性蒸馏在实际部署中算力的节省具有实际意义.     

纤维素金属螯合物及其质谱分析在研究血清蛋白质与多肽中的应用

用纤维素做固相支持物,通过碱处理、环氧活化、偶联螯合剂、固定金属离子等方法制成纤维素金属螯合物,并用合成的纤维素金属螯合物处理健康人血清,然后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)检测蛋白质和多肽以确定其分离效果。确定了最佳的合成方法、螯合剂、金属离子和缓冲体系。再利用普通的纤维素制成了性能优良的纤维素金属螯合物,它能较好地分离血清中的蛋白质和多肽。     

蛋白质及多肽C端测序的研究进展

C端序列是蛋白质和多肽的重要结构与功能部位,对蛋白质的生物功能甚至起决定性作用。另外,C端剪切也是蛋白质重要的翻译后修饰之一。随着蛋白质组学研究的不断深入,蛋白质C端测序对其功能研究将发挥越来越重要的作用。一些新的蛋白质C端测序方法已建立,提高了灵敏度和重复性,能够在蛋白质组水平应用。本文较系统地介绍了蛋白质C端测序3种方法:羧肽酶法、化学法及串联质谱法的原理、特点、应用及在蛋白质组学研究中的新进展。随着C端测序新方法的不断建立,将在蛋白质组研究中发挥更大的作用。     

HCS-140碳硫仪故障检修

介绍了几例HCS-140高频红外碳硫仪故障检修方法.