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等电聚焦分离与18O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究 总被引:3,自引:3,他引:0
磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究。基于此,本研究采用18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记,并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化。结果表明:在pH=4~5的KH2PO4缓冲体系中,37℃,标记反应持续19~24h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-18O回标现象。建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中是有效的;最后与高准确度高灵敏度高分辨率的LTQ-FTICR质谱仪联用,建立了基于18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR的磷酸化蛋白质组定量技术。实验结果表明,该技术可以实现磷酸化肽段的有效定性和定量。本研究为磷酸化蛋白质组学定量研究提供了实用技术。 相似文献
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研究了醇氧化酶-过氧化氢酶联合的酶促反应的最佳条件,建立了简便测定乙醇的吸光光度法,乙醇浓度在0.0686~5.115 mmol/L范围内符合比尔定律,回归方程为:A=0.00403 0.08585c(mmol/L),相关系数为0.9986,检出限为0.0172 mmol/L(S/N=3),本法所用仪器简单,已用于酒后唾液中乙醇的测定。 相似文献
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