Isolierung und Eigenschaften der sauren Phosphatase aus Ananas comosus

Zusammenfassung Im Bromelin, einer Protease aus Ananas comosus Var. Cayenne, sind einige Fremdaktivitäten enthalten. Durch Gel-Chromatographie an Sephadex G-75 läßt sich die saure Phosphatase und eine Esterase, die N-Acetyl-l-tyrosinäthylester spaltet, von der Protease abtrennen. Durch Blektrofokussierung konnte die saure Phosphatase in mindestens zwei Isoenzyme vom isoelektrischen Punkt 4, 3 bzw. 6,1 aufgetrennt werden.Die Michaelis-Konstante der sauren Phosphatase gegenüber p-Nitrophenylphosphat beträgt 0,76 · 10^–3 M (nach Lineweaver-Burk) bzw. 0,73 · 10^–3 (nach Eadie). Das pH-Optimum in Citratpuffer liegt bei pH 5,5. Es bestehen Anzeichen dafür, daß neben der höhermolekularen Phosphatase (Mol.-Gew. > 100000) auch eine niedermolekulare saure Phosphatase in den Stengeln der Ananas comosus vorkommt.In den Strünken der Ananas lassen sich erhebliche Mengen einer pflanzlichen Ribonuclease nachweisen. Dieses Enzym läßt sich durch Ionenaustausch-Chromatographie an DEAE-Cellulose von den anderen Begleitenzymen abtrennen.Eine weitere Varietät von Ananas comosus, die in Brasilien vorkommt, enthält ebenfalls große Aktivitäten an saurer Phosphatase sowie Ribonuclease, jedoch wenig Protease und keine Aktivität gegenüber N-Acetyl-l-tyrosinäthylester.

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Isolation and properties of the acid phosphatase from ananas comosus

Bromelin, a protease from pineapple (ananas comosus var. Cayenne), contains several foreign activities. Acid phosphatase and an esterase splitting N-acetyl-l-tyrosineethyl ester can be separated from the protease by gel chromatography on Sephadex G-75. The acid phosphatase can be separated into at least two isoenzymes with isoelectric points of 4.3 and 6.1, resp., by means of electrofocusing.The Michaelis constant of acid phosphatase for p-nitrophenylphosphate is 0.76×10^–3 M (according to Lineweaver-Burk) and 0.73×10^–3M (according to Eadie). The optimum pH value in citrate buffer is about 5.5. Besides the higher-molecular phosphatase (mol.-weight > 100000) also a lower-molecular acid phosphatase seems to occur in the stems of ananas comosus.Considerable amounts of a vegetable ribonuclease can be detected in the stalks of ananas. This enzym can be separated from other accompanying enzymes by ionexchange chromatography on DEAE-cellulose. Another variety of ananas comosus, occurring in Brazil, also contains high activities of acid phosphatase and ribonuclease, but only small amounts of protease and no activity towards N-acetyl-l-tyrosineethyl ester.

     

Verwendung schneller Reaktorneutronen zur raschen und zerst?rungsfreien Spurenanalyse, insbesondere von Sauerstoff

Zusammenfassung Der intensive Fluß schneller Neutronen, wie er von Kernreaktoren geliefert wird, kann für eine rasche und zerstörungsfreie, aktivierungs-analytische Bestimmung einer Vielzahl von Elementen verwendet werden. Bei manchen Elementen läßt sich sogar bei der Aktivierung mit schnellen Reaktorneutronen eine im Vergleich zur Aktivierungsanalyse mit thermischen Neutronen tiefere Erfassungsgrenze erreichen. Werden die Proben in einem schnellen, halbautomatischen Rohrpostsystem zum Reaktorkern befördert, können auch sehr kurzlebige Radionuklide gemessen werden. Besonders Sauerstoff läßt sich über die Kernreaktion ¹⁶O(n, p)¹⁶N sehr empfindlich bestimmen, wobei die hochenergetischen -Quanten des 7,2 sec Stickstoff-16 gemessen werden. Es können so bis zu 10 ppm Sauerstoff in vielen Arten von Analysenproben erfaßt werden. Das halbautomatische Analysensystem, das mit Hilfe einer schnellen Rohrpost die Durchführung rascher und zerstörungsfreier Aktivierungs-analysen im Forschungsreaktor München erlaubt, wird beschrieben. Die Verwendung des Systems zur Sauerstoffanalyse und die damit zusammenhängenden Probleme werden genauer besprochen.

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Summary The intense fast-neutron fluxes, which are available in nuclear reactors, can be used for rapid and non-destructive activation analysis of many elements. Some elements have even superior detection limits for activation with fast reactor neutrons compared to reactor thermal-neutron activation. Short-lived radionuclides can also be measured using a fast pneumatic tube system. Oxygen can be determined by the nuclear reaction ¹⁶O(n, p)¹⁶N initiated by fast reactor neutrons counting the high-energy gamma rays of the 7.4 sec nitrogen-16. The method is suitable for determining as little as 10 ppm of oxygen in many types of analytical samples. The fast transfer system, which is used in the Munich research reactor for rapid and non-destructive activation analysis is described. The use of the transfer-system for oxygen activation analysis and problems associated with oxygen analysis are discussed.

     

Variaminblau als colorimetrisches Reagens

Zusammenfassung Es wurde ein colorimetrisches Verfahren mit Variaminblau zur Bestimmung von Fe³⁺, Cr⁶⁺, Mn⁷⁺, V⁵⁺, Ag⁺, JO₃ ^–, J₂ und weiterer oxydierender Ionen entwickelt. Äquivalente Mengen dieser Ionen geben dieselbe Extinktion, so daß eine einzige Vergleichslösung zur Auswertung der Extinktionen aller Ionen genügend ist. Es werden die günstigsten Umstände für die Bestimmungen entwickelt, weiter wird ein Verfahren zur Bestimmung von Fe^III, Mn^VII, Cr^VI, V^V nebeneinander beschrieben.     

Methoden zur Identifizierung, Anreicherung und Charakterisierung genetisch bedingter Acylcholin-Acyl-Hydrolase-Varianten (E.C. 3.1.1.8.)

Zusammenfassung Es werden verschiedene Methoden zur Differenzierung genetisch bedingter Enzymvarianten der Pseudocholinesterase (spektrophotometrischer Test, Agar-Diffusionstest, Säulenchromatographie), Versuche zur Charakterisierung der verschiedenen Enzymproteine und der in der Stärkegelelektrophorese auftretenden vier Enzymfraktionen mitgeteilt. Ein Reinigungsverfahren für die Pseudocholinesterase wurde ausgearbeitet; nach der Immunisierung von Kaninchen mit dem angereicherten Enzymprotein wurden mit dem gewonnenen Antiserum immunchemische Versuche durchgeführt.

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Summary Methods are reported for the differentiation and characterisation of genetically determined enzyme variants and the enzyme fractions occuring in starch-gel electrophoresis of pseudocholinesterase (spectrophotometrical assays, agar diffusion test, column chromatography). A method has been developed to purify the pseudocholinesterase. Rabbits were immunized against a purified enzyme protein. Results of these immuno-chemical assays are given.

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Die in der Literatur am häufigsten zu findende Bezeichnung Pseudocholinesterase wird hier verwendet.

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Wir danken der Deutschen Forschungsgemeinschaft, dem Bundesministerium für Wissenschaftliche Forschung und dem Fonds der Chemischen Industrie für ihre Unterstützung.     

Zur Farbreaktion der Naphthole und Naphtholsulfos?uren mit 4-Aminoantipyrin

Zusammenfassung Die photometrische Methode zur quantitativen Bestimmung der Phenole mit 4-Aminoantipyrin wurde auf Naphthole und einige Naphtholsulfosäuren ausgedehnt. Die 1-Naphtholsulfosäuren geben in wäßriger Lösung eine beständige Rotfärbung, die Reaktion folgt bis zu einer Konzentration von 10 g/ml dem Beerschen Gesetz. Bei der 2-Naphtholreihe kann man die Methode nur bei 2-Naphthol und 2-Naphthol-8-sulfosäure anwenden. In den Fällen wo der gebildete Farbstoff in Chloroform löslich ist, wird durch Überführung in die organische Phase die Empfindlichkeit der Methode etwa 10fach gesteigert.     

Bestimmung der organischen Bestandteile von Aerosolpartikeln aus Reinluft

Zusammenfassung Das für die Untersuchung der organischen Bestandteile von Reinluft-Aerosolteilchen entwickelte Analysenverfahren beruht auf der Kombination von klassischen Trennmethoden mit Verfahren der Dünnschicht- und der Gas-Chromatographie bzw. der Gas-Chromatographie/Massenspektrometrie. Im Gegensatz zu älteren Verfahren werden alle vorkommenden organischen Verbindungen, soweit sie äther-löslich sind bzw. in eine äther-lösliche Form überführt werden können, erfaßt. Die verfahrensbedingten Substanzverluste sind so gering, daß schon 100 mg Aerosolteilchen ausreichend sind für die Analyse der organischen Bestandteile (bei ca. 10% organischer Substanz). Ein Anwendungsbeispiel für das Analysenverfahren wird gegeben. Best. von Organ. Substanzen in Luft; Chromatographie, Dünnschicht/Chromatographie, Gas/Massenspektrometrie; Aerosolbestandteile in Reinluft.

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Determination of the organic constituents of aerosol particles from clean air

The method developed for analysing the organic matter of atmospheric particles from clean air is based on the combination of classical separation procedures and thinlayer chromatography together with gas chromatography and gas chromatography/mass spectrometry, respectively. In contrast to methods published earlier, all organic compounds present can be detected (if they are or can be converted to compounds soluble in ether). The loss of organic matter inherent in the analytical procedure is small enough to allow the determination of the organic constituents of 100 mg of aerosol particles (with about 10% organic matter). An example for the application of the analytical method is presented.

     

Versuche zur Charakterisierung des Retentions-Verhaltens chemisch gebundener Umkehrphasen in der HPLC

Zusammenfassung Das Retentionsverhalten von Alkylbenzolen, Alkylbromiden, Alkyldisulfiden, Chlorbenzolen und Methylbenzolen auf neun verschiedenen chemisch gebundenen unpolaren Umkehrphasen wurde untersucht mit MeOH/H₂O als Eluens. Die Substanzgruppenselektivität ist fär alle Phasen innerhalb eines Faktors 2 gleich, kaum temperaturabhängig, jedoch stark eluensabhängig. Der Kapazitätsfaktor k hängt mit der Sättigungslöslichkeit im Eluens generell über einen gebrochenen Exponenten zusammen. Der Exponent ist eluensabhängig, dagegen wenig abhängig von der Substanzklasse und der stationären Phase. Die Absolutwerte von k sind für die verschiedenen Substanzklassen ähnlich, hängen aber stark vom Säulentyp ab. Die Ergebnisse werden im Modell der solvophoben Wechselwirkung betrachtet.

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Investigations on the characterization of the retention behaviour of chemically bonded reversed phases

Summary The retention behaviour of alkyl benzenes, alkyl bromides, alkyl disulphides, chlorobenzenes and methylbenzenes on nine different chemically bonded non-polar phases was investigated using MeOH/H₂O as mobile phase. Group selectivity is equal for all phases within a factor of 2, shows little temperature dependence, but strongly depends on eluent composition. Capacity factors k are connected to solubility via an exponent generally different from unity. The exponent depends on eluent composition, but little on solute and bonded phase properties. Absolute values for k are similar for different solute classes, but strongly depend on stationary phase type. Results are interpreted in terms of solvophobic interaction.

     

Gas-chromatographische Bestimmung von Mono-, Di- und Tri?thylenglykol in Wasser

Ohne Zusammenfassung

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Gas-chromatographie determination of ethylene glycol, diethylene glycol and triethylene glycol in water