CNBr裂解结合ESI MS/MS测定重组人TNFR和纽兰格林的C端序列

随着基因工程和蛋白质工程的发展,越来越多的重组蛋白药物被研发和走向市场.为保证重组蛋白药物的质量,中国药品和食品监督管理局规定重组蛋白药物报批需提供包括N端、C端、二硫键、肽质量指纹谱等一级结构确证数据.     

NanoFlow及MS-MS鉴定疏水蛋白Bcl2

Bcl2是1种细胞内的跨膜蛋白质,是参与细胞凋亡过程的新型功能蛋白质家族中的第1个成员,该家族包括Bax,Bak,Bcl-x,ced-9,Mcl-1,A1,NR13和Bik,可抑制或促进细胞死亡,它们的功能域具有较大的保守性.由于Bcl2具有较强的疏水性,给其结构鉴定带来了很大难度.本文尝试用NanoFlow及MS-MS技术来鉴定该蛋白质.基本方法是:将蛋白质酶切后,测定其质量肽谱,然后自动对具有一定丰度的肽片进行质谱测序,最后通过数据库检索鉴定该蛋白质.与肽质量指纹谱技术(PMF)相比,它通过多个肽片的序列来求证一个蛋白质,比PMF更精确.     

应用光谱分析技术研究碘与β-环糊精结合物的结构特征

本文应用傅里叶变换拉曼光谱、傅里叶变换红外光谱、紫外光谱等分析方法,对采用不同工艺制备的碘与β-环糊精结合物进行了定性、定量分析。研究发现,碘与β-环糊精结合中碘的存在形式为游离碘、包结碘和胶束络合碘。水法工艺制备的样品,含碘量高但稳定性差。醇法工艺制备的样品,含碘量低而稳定性好。本实验建立的检测碘与β-环糊精结合物的分析方法简便易行,实验取得了满意的效果,本方法可用于制备碘与β-环糊精结合物原料药的质量控制。     

酶切质谱法测定蛋白质的二硫键

二硫键是维持蛋白质活性构象的最重要因素之一,不正确的二硫键结构常导致蛋白质活性明显降低,甚至完全失活.早期测定二硫键主要采用"酶切-分离纯化-测序"法,过程繁琐,样品需求大.生物质谱为二硫键的测定提供了全新的策略.本文以重组人肝细胞生成素(rhHPO)--这一由我国独立发现和表达成功的、治疗严重肝病的潜在新药--为研究对象,探索了生物质谱进行二硫键定位的方法.     

质谱分析福尔马林固定组织的多肽谱

福尔马林固定组织时,甲醛与蛋白质多肽链的氨基酸侧链上的功能基团,特别是氨基、亚氨基、酰氨基、羟基和巯基等相结合,使蛋白分子间形成大分子网络,蛋白不再发生迁移达到固定目的[1].