重组人FK506结合蛋白12的基体辅助激光解析电离飞行时间质谱分析

用MALDI－TOF－MS测定了具有生物活性的重组人FK506结合蛋白12(rhFKBP12)的分子量和胰蛋白酶酶解的肽质量指纹谱,实验测定结果与理论计算值一致。证明其一级结构是正确的,在表达、复性和纯化过程中没有氨基酸的丢失、变异和修饰。     

NanoLC-ESI MS/MS对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白的准确鉴定

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白(商品名益塞普)是一种用于治疗中度及重度活动性类风湿关节炎的重组蛋白药物.该药由肿瘤坏死因子受体和人IgG1的FC片段融合而成.国内的药品报批时,没有明确规定必须为人IgG1的FC片段.但该药品出口到国际市场时,要求必须确定为人IgG1的FC片段.人IgG共有4个亚型,序列高度同源.为准确鉴定人IgG1,本实验应用超高效纳升液相色谱一高解析离子淌度质谱仪HDMS进行了分析,结果表明重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白一级结构正确,FC片段确实为人IgG1,符合出口国际市场的标准.     

用非离子去污剂提高胶内酶切效率的初探

在蛋白质组学研究中,蛋白质混合物样品通常采用二维凝胶电泳分离,然后用生物质谱鉴定,其中蛋白质的胶内酶切是关键的一步,它对获得的数据的质量和鉴定结果有较大的影响。本研究旨在改进胶内酶切方法,拟在胶内酶切时加入非离子去污剂,来提高胶内酶切的效率。实验结果表明非离子去污剂的去折叠和增加蛋白质的溶解度的作用明显缩短了蛋白质的酶切时间,提高了酶切效率,增加了肽质量峰的数量和质量,提高了蛋白鉴定的可信度。     

肝移植后人血清中差异表达蛋白质的纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定

建立了基于质谱的人肝移植后血清中差异表达蛋白质的分析方法,肝移植前后的人血清蛋白质用双向凝胶电泳分离,AgNO3染色,差异蛋白质斑点用胰蛋白酶进行胶内酶解后,采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行鉴定。鉴定了8个显著差异表达的蛋白质,Mascot检索分值101~1543分,肽段匹配数5~34个,序列覆盖率10%~43%。所发现的差异蛋白质多与免疫调节有关,可为深入研究肝移植术后免疫排斥的分子机理提供线索。     

串联飞行时间质谱鉴定急性脊髓损伤大鼠针刺后的差异蛋白质

针灸作为一种传统的康复治疗手段在治疗脊髓损伤方面已取得了较好疗效[1].本实验建立了急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱,初步观察了针刺治疗对急性脊髓损伤组织中蛋白质的变化与差异表达,用2种质谱技术鉴定了急性损伤相关差异蛋白质,对进一步从蛋白质组学角度研究脊髓损伤的病理机制和针刺治疗急性脊髓损伤的机理提供了重要参考数据.     

多肽电泳结合质谱技术在血清多肽组学研究中的应用

近年来,多肽组作为蛋白组的补充部分,被众多研究者所瞩目,血清多肽标志物用于临床诊断的报道越来越多[1].     

生物分子间非共价键复合物的质谱研究

生物分子间非共价键复合物,存在于每个细胞的生命活动过程中,在细胞的结构和功能中起重要作用.干扰了这些复合物会导致疾病的发生.因此对生物分子间非共价键复合物进行广泛的研究,将能深入了解正常的生理生化过程和一些疾病的致病机理.     

溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定电泳分离蛋白的C端序列

C端测序是蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的重要依据。建立了溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定蛋白质C端序列的方法,并应用于重组人肿瘤坏死因子受体和纽兰格林的C端测序。首先根据待测蛋白序列进行溴化氰理论裂解,如果C-端肽段理论分子量在500~5000U之间,则将待测样品进行SDS-PAGE分离,考马斯亮兰染色,然后进行胶内溴化氰裂解,最后应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定C-端肽段的分子量,电喷雾串联质谱对C端肽段进行测序。应用本方法分别测定了这两个蛋白质C端19个和11个氨基酸残基序列。研究结果表明:本方法灵敏、有效、实用性较强,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制和蛋白质的结构确证,是对目前蛋白质C端测序方法的有效补充。     

酶切质谱法测定蛋白质的二硫键

二硫键是维持蛋白质活性构象的最重要因素之一,不正确的二硫键结构常导致蛋白质活性明显降低,甚至完全失活.早期测定二硫键主要采用"酶切-分离纯化-测序"法,过程繁琐,样品需求大.生物质谱为二硫键的测定提供了全新的策略.本文以重组人肝细胞生成素(rhHPO)--这一由我国独立发现和表达成功的、治疗严重肝病的潜在新药--为研究对象,探索了生物质谱进行二硫键定位的方法.     

磷酸化肽段质量数的分布特征

基于双向电泳和液相色谱的蛋白质鉴定是蛋白质组最常用的技术,质谱谱图的好坏对鉴定的成功率起决定性作用。其中,某些不确定的修饰和非蛋白污染物是影响谱图质量的难以忽略的因素。Mann等曾经建立过"肽的可能的质量列表",并指出存在"肽质量禁区MFZ(MassForbiddenZone)",其研究的质量范围为0～2000u。本文在此基础上,编写了基于Web的肽段质量数分析统计软件PMFstat,研究了0～5000u质量范围的胰蛋白酶酶切肽段的质量分布,并特别考察了磷酸化肽段的质量数特征。结果表明:磷酸化效应导致"肽质量禁区"明显变窄和肽质量分布峰值左移。