来源于类芽孢杆菌属新型耐有机溶剂脂肪酶的克隆、表达与性质研究（英文）

脂肪酶(EC 3.1.1.3)全称为三酰基甘油水解酶,是一类能够将长链脂肪酸甘油酯水解成脂肪酸和二甘酯、单甘酯或甘油的酯键水解酶.它除了能够水解脂肪外,还具有催化酯化反应、酯交换反应、酸解反应、醇解反应以及氨解等反应的性质.在脂肪酶催化的反应中,通常用有机溶剂代替水.有机溶剂可以转移合成反应的平衡方向,通过溶剂工程修饰酶的选择性能够提高底物的溶解度、有机相产物的回收率、酶的热稳定性.但有机溶剂对酶活性和稳定性有不同程度的影响.因此,寻找在有机溶剂中表现出高活性和稳定性的脂肪酶是一个亟待解决的重要课题.由于微生物种类多、作用底物专一性强,且微生物来源的脂肪酶一般分泌到胞外,因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源.目前,微生物脂肪酶的研究主要集中于根霉属(Rhizopus)、曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、毛霉属(Mucor)、地霉属(Geotrichum)、假丝酵母属(Candida)、假单胞菌属(Pseudomonas)、伯克霍尔德菌属(Burkholderia)等具有工业应用价值的菌株.很少有类芽孢杆菌属所产脂肪酶进行相关酶学性质的研究.我们以Paenibacillus pasadenensis CS0611为出发菌株,在全基因序列草图中得到了一个新型脂肪酶基因lp2252.以Paenibacillus pasadenensis CS0611基因组为模板,设计特异性引物对目标序列进行扩增,并成功将其插入到表达载体p ET-28a中得到含有目的基因的重组质粒.在E.coli BL21(DE3)中,脂肪酶lp2252经0.1mmol/L的IPTG诱导后在20°C实现了高水平表达.重组脂肪酶的活性约为野生型的1631倍.用镍离子亲和层析柱快速、高效地纯化了两端带有组氨酸标签的重组脂肪酶,回收率为63.5%,纯化因子为10.78.纯化后的脂肪酶最适温度为50°C,在20-40°C范围内具有良好的稳定性.最适pH值为7,属于中性脂肪酶,同时在pH 3.0-8.0间具有较高稳定性.在金属离子如钙、镁离子和一些非离子表面活性剂的作用下,其活性有所提高.此外,纯化后的脂肪酶可被一系列水溶性有机溶剂激活,例如一些短链醇.而对某些水不溶性有机溶剂,其也具有高度的耐受性.综上所述,本文所涉新型脂肪酶在非水相催化领域具有广泛的应用和前景.     

环氧化合物水解酶的研究进展

环氧化合物水解酶(Epoxidehydrolase,EHs,EC3.3.2.3),是一组催化环氧化合物水解为相应邻位二醇的酶类,在哺乳动物、植物、昆虫和微生物体内广泛存在.由于环氧化合物的环氧乙烷部分是一个亲电的三元环,其C-O键的极性很强,能与体内包括DNA和蛋白质在内的多种活性物质发生反应,具有较强的毒性,甚至致癌性.研究表明,有两种酶涉及到环氧化合物的脱毒过程,其一为谷胱甘肽转移酶,该酶是一种广谱性脱毒酶,具有清除自由基的功能,但目前仅发现少数来源细菌的谷胱甘肽转移酶能降解模式环氧化合物;其二为环氧化合物水解酶,该酶能选择性地降解体…     

有机硅化合物的生物转化

有机硅化合物的研究开发是近来较活跃的研究方向。本文概述了有机硅化合物的生物转化，可能的应用前景及意义．     

Enzymatic Enantioselective Synthesis of （R）－2－Trimethylsilyl－2－hydroxyl－propionitrile by Defatted Apple Seed Meal

IntroductionOverthepastyears ,thesynthesisofchiralaldehyde cyanohydrinswaswellstudied .1Incontrasttochiralalde hyde cyanohydrins ,therewereonlyfewreportsaboutthepreparationofopticallyactiveketone cyanohydrins ,2 whichareusefulstartingmaterialsandintermediatesforthesyn thesisofmanychiralnaturalproducts .3Wethereforefo cusedonthepreparationofopticallyactivesiliconcontain ing (R ) ketone cyanohydrin ((R ) 2 trimethylsilyl 2 hy droxyl propionitrile)usingacetonecyanohydrinastran scyanationagen…     

水/有机溶剂双相中杏仁醇腈酶促不对称合成(R)-苯乙氰醇

 研究了水／有机溶剂双相中来源于杏仁的（R）－醇腈酶催化苯\r\n甲醛与HCN不对称合成（R）－苯乙氰醇,系统探讨了有机溶剂、水相与\r\n有机溶剂相体积比、水相pH值和反应温度对反应速度、转化率和产物光\r\n学纯度的影响．结果表明,上述因素对醇腈酶促不对称合成（R）－苯\r\n乙氰醇反应均有显著影响．异丙醚为该反应最好的有机溶剂,水相与有\r\n机溶剂相体积比以1／2为宜,适宜的pH值为3．4,最佳反应温度为0～\r\n5℃．在该优化反应条件下,反应转化率和产物的光学纯度均高达99％\r\n以上．     

乳酸乙酯对映体纯度的气相色谱法测定

用气相色谱法(手性毛细管柱)成功地测定了乳酸乙酯的对映体纯度;测定(±)-乳酸乙酯的相对标准偏差为0.13%～0.66%,相对误差为0.045%～4.0%;该法具有高效、高选择性、高灵敏度、操作简便等优点.     

PS IM 催化核苷类化合物3＇-酯选择性合成中的底物识别

研究了有机溶剂中酶促核苷类化合物3＇-酯高区域选择性的合成反应,探讨了核苷结构中R1位取代基变化对酶促酰化反应的影响.结果表明:来源于Burkholderia cepacia的固定化脂肪酶PS IM在有机溶剂THF中的催化效果最佳,且酰化反应的优势位点均为3＇-羟基(90％～＞99％)；随着核苷中R1位取代基由F变化至CF3或酰基供体链长由C6增加至C14,该酰化反应的3＇-区域选择性均呈现逐渐增加的趋势,构效关系分析表明,这主要源于PS IM 酶特殊的活性中心结构.     

PSIM催化核苷类化合物3'-酯选择性合成中的底物识别

研究了有机溶剂中酶促核苷类化合物3'-酯高区域选择性的合成反应,探讨了核苷结构中R1位取代基变化对酶促酰化反应的影响.结果表明:来源于Burkholderia cepacia的固定化脂肪酶PS IM在有机溶剂THF中的催化效果最佳,且酰化反应的优势位点均为3'-羟基(90%～>99%);随着核苷中R1位取代基由F变化至CF3或酰基供体链长由C6增加至C14,该酰化反应的3'-区域选择性均呈现逐渐增加的趋势,构效关系分析表明,这主要源于PS IM酶特殊的活性中心结构.     

不同反应体系中(S)-1-(4-甲氧基)-苯基乙醇的不对称生物合成

在不同反应体系中,研究了固定化红酵母细胞催化对甲氧基苯乙酮不对称还原合成(S)-1-(4-甲氧基)-苯基乙醇的反应.结果表明,在含离子液体的混合反应体系和双相反应体系中,该不对称还原反应的效率得到了不同程度的提高.此外,离子液体中阴阳离子类型对该反应的影响较大,特定阴阳离子间的匹配对同定化红酵母细胞发挥最佳催化效果至关...     

混合溶剂体系中牛肝β-半乳糖苷酶催化5-氟-2'-脱氧尿苷区域选择性半乳糖基化反应

研究了混合溶剂体系中有机溶剂种类和含量对牛肝β-半乳糖苷酶催化5-氟-2'-脱氧尿苷区域选择性半乳糖基化反应的影响.结果表明,在含10%(体积分数)有机溶剂体系中,该酶稳定性差,失活严重.减少有机溶剂含量可显著减轻其对该酶的毒害作用.然而,有机溶剂的添加对酶促糖基化反应的区域选择性的影响很小(均保持在99%以上).牛肝...