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三、蛋白质的化学降解~([1,2,3,4]) 在蛋白质一级结构的测定中,化学降解也是一个很重要的手段。一般化学降解的肽段都比较大,适合于在自动液相顺序仪中测定顺序,同时也有利于肽段次序的排列,但因肽段较大,分离困难,往往碰到不溶解和集聚等问题,产率也比较低。蛋白质化学降解常用的方法有。1.用溴化氰`~([5])(CNBr)降解蛋白质中的甲硫氨酸;2.用二甲基亚砜(DMSO)~([6])和卤氢酸等降解蛋白质中的色氨酸;3.用羟氨降解蛋白质中-Asn-Gly-结构;4.用稀酸~([?])部份降解蛋白质中Asp等。现在分述如下: (一)溴化氰降解用溴化氰降解蛋白质中的甲硫氨酸是化学降解中最常用的方法,特别是反应专一,产率比较高。又由于蛋白质中甲硫氨酸数目较少,因此降解后肽段数目也比较少,有利于肽段次序的排列。其反应机理如下: 相似文献
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The results from the study on the separation, purification, amino acid composition and amino acid sequence of CBa, one of the four CNBr degradation fragments of crystalline trichosanthin, are presented. Its amino acid composition is: Asp3, Thr2, Ser2, Hse1, Glu2, Gly2, Ala6, Val1, Tyr3, Phe3, Lys2, Arg1. The sequence of the CBa is Gly-Tyr-Arg-Ala-Gly-Asp-Thr-Ser- Tyr-Phe-Phe-Asn-Glu-Ala-Ser-Ala-Thr-Glu-Ala-Ala-Lys-Tyr-Val- Phe-Lys-Asp-Ala-Hso. 相似文献
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二、蛋白质的酶降解~([1,2,3]) (一)总述早期研究蛋白质的氨基酸顺序是用部分酸水解法作为一种降解手段.这样做工作量很大。用酶降解蛋白质,则有下列优点:1.专一性高,降解后,肽段不太复杂,易纯化,产率也高。2.Gln,Asn,Trp以及遇酸不稳定的Ser,Thr,Tyr都可保存下来。酶解时要注意下面几点:a.合适的pH。b.合适的温度。c.酶与底物的比例(以下简称酶比)要适当。d.保温时间要适当。可先用极少量的蛋白质,根据上述四个因素做试验,以选择合适的酶解条件。蛋白质在开始酶解时往往不太溶解,所以,在酶加入以前,要先把蛋白质磨碎或用超声波弄细,然后与酶保温一段时间,溶液就逐渐变清。此外酶解时,最好选用能挥发的缓冲液,如碳酸氢铵(Ammonium bicarbonate),醋酸三乙胺(Triethylamine acetate),N-甲基吗啉(N-methyl/morpholine)等,因它们可在冻干时除去。酶解一定时间后,用酶的特殊抑制剂,或冻干、或调节pH等来终止反应。为了抑制微生物生长,常在酶解液中加入一粒百里酚(thymol)结晶。 相似文献
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近年来由于避孕药的需要增加,致使薯芋皂素供应不足,并且影响了甾体副肾皮激素和其他重要甾体激素的生产。为了解决当前甾体皂素供应问题,充分利用藩剑麻皂素资源是较为有效的途径之一。藩剑麻皂素之所以不能取代薯芋皂素,其关键问题是用化学方法在A环上引入1,4双键时,不但收率低,而且,若用二氧化硒脱氧,产品中残留的硒不易除去,影响质量。因此必须寻找新的方法来达到利用的目的。有机所与上海第九制药厂协作,开展了用微生物在A环上引入1,4双键的工作。我们以藩麻皂素制得的中间体-16β-甲基-△9(11) 相似文献
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许多有疗效的甾体激素化合物,例如付肾皮质激素和甾体口服避孕药,它们的A环都具有4-烯-3-酮或1,4-双烯-3-酮的结构。具有这种结构的甾体化合物可用△~5-3-羟基或5β或5α-3-羟基甾体为原料用化学方法合成。但用化学方法难以直接使5α-3-酮甾体形成4-烯-3-酮或1,4-双烯-3-酮化合物。而微生物,如节杆菌(Arthrobacter Simplex)或诺卡氏菌(Nocardia sp.)却能使5α甾体脱去C_(4,5)两个氢原子而形成4-烯-3-酮,或同时脱去C_(1,2)两个氢原子而形成1,4-双烯-3-酮,或形成1-烯-3-酮。这两种微生物在使5α-3-酮甾体化合物脱氢时,因其它部位结构不同而往往产生不同的结果。 相似文献
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