通过原生质体融合改建酵母细胞的研究IV.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-lay菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var, ellipsoideus H UK-1> aa, his一)与糖化酵一母(Saccharomyces dia-staticus, a, arg')的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下刘一其发酵生物学进行比较研究后，在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验结采表明，种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77男，这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71 0o)和新市一号(29.54落)分别增产3.56%和4.16劣。在大米原料的发酵中，其酒精产量平均为35.38不，比大米酒精生产菌株M-85(32.87男)相对增产酒精7.64形，而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20男，比生产菌株新市一号(28.70男)相对增产酒精5.23男.由此可见，种间融合杂种HU-KDF-ls5在不同类型的淀粉质原料的发酵中，其酒精增产效果显著而稳定，这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融台技术对酒精酵母的选育，特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅳ.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-185菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var. ellipsoideus HUK-1,(1a,his~-)与糖化酵母(Saccharomyces diastaticus, a, arg~-)的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下对其发酵生物学进行比较研究后,在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验。结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77％,这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71％)和新市一号(29.54％)分别增产3.56％和4.16％;在大米原料的发酵中,其酒精产量平均为35.38％,比大米酒精生产菌株M-85(32.87％)相对增产酒精7.64％,而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20％,比生产菌株新市一号(28.70％)相对增产酒精5.23％.由此可见,种间融合杂种HU-KDF-185在不同类型的淀粉质原料的发酵中,其酒精增产效果显著而稳定,这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融合技术对酒精酵母的选育,特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

假丝酵母和白地霉的原生质体融合研究

对影响假丝酵母和白地霉原生质体制备与再生的因素:菌龄、破壁酶的种类和浓度、酶解时间、脱壁促进剂、渗透压稳定剂进行了研究。在综合比较原生质体制备率和再生率基础上,确定了制备原生质体的优化条件为:选用对数生长中期的菌体,用0.05%EDTA进行预处理,以0.7 mol/L NaCl为渗     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究Ⅱ，酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究

本文研究了酿酒酵母与糖化酵母的种间融合杂种HU-KDF-185在不同温度条件下发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液的酒精生成率、发酵强度和发酵速率。实验结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185在所试条件下的发酵力均超过两融合亲株,并优于酒精生产菌株K氏酿酒酵母。例如,在30℃、32℃和35℃发酵葡萄糖时,它比对照株K氏酵母分别增产酒精3.0％、1.93％和1.85％;其中在32℃发酵时,各菌株可获得最高的酒精生成率。而在32℃发酵麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液时,杂种HU-KDF-185也比K氏酵母分别增产2.0％、9.71％和5.26％。     

糖化酵母及酿酒酵母原生质体制备中若干条件的探索`

本 文意欲从糖化酵 母 ( a Se eha r om ye e sd ia s t a tie u s) 菌株5 1 0 1 一 7 C、5 2 0 6 一 I B、5 3 0 1 一 1 4 D及酿酒酵母 sr.cer ve is ae ) 菌 株 H U 一 T Y 一 I A 出发,按 L S ( 27) 正 交 表 设 计 实 验,进一步探 索酵母原 生质体制备条件.结果表 明,在选择 的诸因素 中,菌体菌龄与酶解脱壁时间之间有着极显 著的交互作用.各 因素对原 生 质体形 成和再生 的影响程度依次为:酶解脱 壁时 间与菌 龄交互作用 > 酶解脱壁时间> p一 硫基 乙醇预处理浓度> 菌龄。经实验确认,原生质体制备 最优条件为:取菌龄为 15hr的菌体,以。.01 m ol / L 的 p一 琉基 乙 醇预 处理,蜗牛酶温浴时 间为60 m in.依此约可获得 80 % 的原生质体形成率和 50 环的原生 质体再生率.     

Ca2+对诱导大肠杆菌摄取外源DNA的影响

将CaCl2诱导大肠杆菌建立感受态及其质粒的转化过程进行逐一分解,根据转化效率探讨了Ca2+在各个步骤中的作用.结果发现,Ca2+并不能永久性地改变细胞的结构和生理状态;细胞只有在Ca2+存在下才能维持其摄取DNA的能力;在诱导大肠杆菌摄取DNA的过程中,Ca2+主要是在转化步骤中起作用,转化前是否用Ca2+处理或处理时间长短对大肠杆菌摄取DNA能力影响不明显.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅲ.种间融合杂种HU-KDF-185发酵能力的生产性鉴定试验

从原生质体融合获得的K氏酵母(Saccharomyces cerevisiae var.ellipsoideus)和糖化酵母(Saccharomyces diastalicus)的种间融合杂种中筛选到一株酒精高产菌株HU-KDF-185,它在番薯渣糖化液(约5.0—5.5Brix)的工厂生产性发酵试验中,原料的酒精得率平均是30.77％;而当前使用的酒精生产菌株K氏酵母(对照1)则是29.71％,新市一号菌株(对照2)则是29.54％.试验结果表明,种间杂种HU—KDF-185比K氏酵母和新市一号菌株分别增产酒精3.56％和4.16％.由此可以确定,杂种HU-KDF-185是一株具有生产价值的酒精高产菌株.     

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．     

钙离子荧光指示剂导入植物细胞原生质体的研究

研究了不同ｐＨ条件（４．５～６．８）对钙离子荧光指示剂Ｉｎｄｏ－１－Ｋ＋及Ｆｕｒａ－２ＡＭ导入绿豆下胚轴原生质体的影响．结果表明，在正常生理条件下（ｐＨＳ．６），有４０％以上的原生质体被标记；在将Ｉｎｄｏ－１－Ｋ＋和Ｆｕｒａ－２ＡＭ导入绿豆下胚轴、胡萝卜根韧皮部、蚕豆叶肉、小白菜下胚轴、水稻花药愈伤组织和鸢尾花粉等细胞原生质体的研究中，发现不同材料之间具有明显的差异．     

硒酵母对鱼酱油品质的影响

以鱼蛋白为原料，在酶解与曲酶发酵相结合的基础上，于后熟阶段加入硒酵母作为有机硒的载体和增香工具，生产品质优良的富硒营养鱼酱油。试验结果表明：采用后熟温度35℃，酵母液量10％，酱醅盐度8％和12％，后熟发酵周期12d的工艺条件，可生产出优质的富硒鱼酱油。产品的氨基氮、有机酸等营养成分均高于国家标准，有机硒的含量达到国内专用硒保健品的水平。     

铁皮石斛叶肉原生质体的分离与培养研究

对铁皮石斛无菌试管苗叶片原生质体的游离及培养条件进行了研究.结果表明原生质体分离的适宜酶液配比是0.5%Pectinase和1.0%Cellulase Onozuka R-10,渗透压调节剂的浓度为0.5 mol/L,以蔗糖作为渗透压调节剂优于甘露醇和葡萄糖,质壁分离处理后的叶片原生质体产量提高了16.6%,存活率提高了14.2%.培养在1/10 MS附加2 mg/LNAA+0.5 mg/L6-BA和多种有机成分培养基上的铁皮石斛无菌苗叶片原生质体,3～5 d后开始第一次分裂,30 d后长成胚性细胞团.弱光照(150 1x)和稍低的温度((21±0.5)℃)适于原生质体的培养.     

秋水仙素诱导铁皮石斛多倍体研究

用不同质量分数秋水仙素处理铁皮石斛种胚原球茎诱导多倍体,结果表明：1.秋水仙素对种胚原球茎的生长有不同程度的抑制作用,对根系生长的抑制尤为明显.2.由于种胚原球茎完整性好,耐受性强,要获得多倍体则需较高质量分数的秋水仙素或较长的处理时间.3.本实验诱导多倍体有相当一部分是非整倍体,通过流式细胞检测到的变异率高于形态学观察的结果.4.经秋水仙素处理后,有些植株的茎变得粗短,出现茎分叉现象,叶片形状呈锯齿状,变小变厚等变异特征.     

重金属胁迫对宽叶泽苔草生长、重金属及养分吸收的影响

盆栽试验以宽叶泽苔草(Caldesia grandis Samuelsson)为材料,采用500 μmol·L^-1 Cd、500 μmol·L^-1Cr、500 μmol·L^-1 Pb、1 000 μmol·L^-1 Cu溶液处理,研究重金属胁迫对宽叶泽苔草生长、重金属及养分吸收的影响.结果表明:宽叶泽苔草对重金属毒害具有很强的抗性,各种重金属胁迫下植株地上部并未表现出失绿或坏死等中毒症状;重金属Cd、Cr、Pb和Cu处理,分别显著提高根和地上部茎叶中Cd²⁺、Cr⁶⁺、Pb²⁺和Cu²⁺质量分数;Cu处理显著增加植株Mn²⁺质量分数,减少地上部Fe³⁺质量分数;Pb处理显著增加根系Mn²⁺质量分数;但对Zn²⁺质量浓度无显著影响.相关分析表明,植株地上部中Fe³⁺和Mn²⁺呈显著负相关,而Mn²⁺和Cu²⁺呈显著正相关;地下部中Pb²⁺与Mn²⁺呈显著正相关,Cr⁶⁺与Zn²⁺呈显著负相关.     

ZnSO4损伤嗅上皮可逆性的研究

为探讨ZnSO4对嗅上皮的损伤是否可逆,以成年SD大鼠为对象,ZnSO4或Triton X-100分别灌流单边鼻孔,用免疫组化技术,检测损伤后30、45和60 d嗅球酪氨酸羟化酶的免疫反应,结果在损伤后30 d,损伤鼻孔同侧嗅球的TH阳性细胞密度明显下降,Triton X-100损伤后45 d的TH阳性细胞密度比30 d时增加,60 d时已接近对照组,但ZnSO4损伤后45、60 d与30 d的结果类似,提示ZnSO4对嗅上皮的损伤是不可逆的.     

紫草多糖对hCG诱导大鼠黄体细胞分泌功能的影响

采用体外黄体细胞培养,观察中药紫草的水溶成分——紫草多糖对hCG诱导的黄体细胞分泌孕酮影响,并探讨其可能机制。选取未成年雌性SD大鼠,分离黄体细胞,分为基础组和hCG组,分别添加不同浓度紫草多糖,放射免疫检测各组细胞内和培养液中的孕酮(Progesterone,P4)含量;将细胞悬液分为4组:空白对照组、1.50g.L-1紫草多糖组、2×104 U/L hCG组以及hCG(2×104 U/L)+紫草多糖(1.50g.L-1)组,在培养的不同时间点(0、0.5、1、2h时),分别测P4产量,观察紫草多糖对培养黄体细胞作用的起效时间和动力学变化。此外,上述4组培养0.5h后离心分离细胞和培养液,分别测得细胞内和培养液中的cAMP和cGMP含量,将细胞内和培养液中的含量之和作为总量,并计算其cAMP/cGMP比值。结果表明:1.紫草多糖呈剂量依赖性地抑制hCG刺激下黄体细胞P4的生成。2.加大剂量(>3.00g.L-1)紫草多糖亦可抑制基础P4的生成。3.1.50g.L-1紫草多糖组从作用0.5h起,即显著抑制黄体细胞hCG刺激下的P4生成(P<0.01)。4.hCG可明显增加黄体细胞cAMP含量,导致cAMP/cGMP增加。添加1.50g.L-1紫草多糖可增加cAMP、cGMP含量,但cAMP/cGMP比值下降。结论:紫草多糖可直接作用于促性腺激素的靶细胞——黄体细胞,并抑制hCG诱导黄体细胞分泌功能,该抑制作用起效快,并可能通过cGMP介导。     

培养液诱导微生物改性粉土的抗剪强度特性研究

通过直剪试验, 研究培养液类型、浓度和培养时间3因素变化时, 微生物对粉土抗剪强度的影响. 通过向土体中注入不同浓度的葡萄糖和淀粉溶液, 对土体进行15、30和60d的培养. 制作环刀试样, 进行直剪试验. 分析发现, 淀粉溶液和葡萄糖溶液培养的微生物均能显著提高粉土的抗剪强度; 相同培养时间下, 培养液浓度增大, 粘聚力和内摩擦角呈增大趋势; 用葡萄糖和淀粉溶液培养60d后, 粉土的粘聚力提高2.38和2.03倍, 内摩擦角扩大了6.54和8.40倍. 实验结果可为微生物改性土工程提供参考.     

温郁金对紫外线致雄性小鼠免疫遗传损伤的拮抗效应

以ICR雄性小鼠为实验动物、以紫外线为诱变剂,研究了温郁金对紫外线致ICR雄性小鼠免疫遗传损伤的拮抗效应.采用了小鼠骨髓嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte,简称PCE）微核实验等方法.测定了小鼠血象、血红蛋白含量、胸腺及脾指数,小鼠肝脏过氧化氢酶（catalase,简称CAT）活性,小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）的微核率等指标.结果显示：实验剂量的温郁金均能使紫外线引起脾脏指数和胸腺指数、红细胞数、白细胞数以及血小板数、血红蛋白含量和CAT活性的下降明显回升;实验剂量的温郁金则能使紫外线引起PCE微核率的上升明显回落.结论是温郁金对紫外线引起的小白鼠免疫遗传损伤具有一定的拮抗效应.     

硬骨鱼类卵子发生研究及其应用前景

硬骨鱼类的发育有卵生和卵胎生两种形式，其卵子发生的过程相似，目前人为地将卵原细胞到卵母细胞分为6个连续时相。卵原细胞期的卵巢体积小，卵原细胞均一，单层滤期卵巢体积增大，初级卵母细胞为主，卵黄和滤泡细胞出现，细胞代谢加强，卵黄泡期卵巢亦增大，卵膜开始形成，卵黄沉积，出现卵黄粒和脂肪滴，卵黄充满期卵巢继续增大，卵母细胞个体急剧增大，卵黄球和皮质泡形成，个别出现油滴，卵膜增厚，成熟期卵巢和卵子达到最大，各种不同鱼类的卵膜形态不一，衰退期卵巢退回到单层滤泡期，多次产卵类型退回到卵黄充满期，继续保持产卵能力。卵子发生的过程受MIH，GtH等多种激素的调控。对硬骨鱼类卵子发生的研究，将为人工增养殖技术的改进提供理论依据。