具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的催化抗体的研究Ⅰ．谷胱甘肽特征全抗原的合成、表征及性质

用２，４－二硝基氯苯保护谷胱甘肽的巯基制出半抗原，再通过戊二醛共价反应使其与牛血清白蛋白表面的氨基结合，经超胶ＡｃＡ５４凝胶层析纯化，制备出有较强免疫原性的谷胱甘肽全抗原。用元素分析、红外光谱及核磁共振表征了半抗原的结构。电泳分析得全抗原分子量平均为８７０００道尔顿。光谱分析及圆二色谱研究表明其有较强的可见、紫外及荧光特征吸收，且抗原结构的紧密性增强。     

活力高于天然谷胱甘肽过氧化物酶的含硒抗体酶

还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基和两个羧基分别与2,4-二硝基氯苯(DNCB)和甲醇反应,合成出半抗原Hp2;通过戊二醛将Hp2连到牛血清白蛋白(BSA)上,合成出全抗原Ag2;吸收光谱法测出Hp2在BSA上的平均连接量为30.2mol/mol.用标准的单克隆抗体(McAb)制备技术,制备出阳性McAb(IgG)-4G3;4G3对GSH和半抗原Hp2的解离常数(K_D)表明,单克隆抗体4G3对GSH具有较强的亲和力.对4G3进行两步化学诱变(Chemical Mutation),诱变后即为具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒抗体酶(m4G3),m4G3的GPX活力为9337U/μmol,是兔肝GPX(RL-GPX,5780U/μmol)的 1.6倍,曾报道的含硒抗体酶m4A4(1239 U/μmol)的7.5倍,制备出活性高于天然酶的抗体酶,证实了半抗原设计思想.将m4G3拆分成Fab和Fc片段,发现m4G3的活性中心位于Fab片段上,m4G3的硒代半胱氨酸(Se-Cys)含量为1.9 mol/mol.     

氯霉素全抗原的合成与鉴定

采用戊二醛法和羰基二咪唑法，将半抗原氯霉素(CAP)与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联，制得氯霉素全抗原CAP-BSA，并由紫外光谱和红外光谱确定偶联成功。所合成抗原的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)只见一条区带，表明所合成的氯霉素与BSA偶联物可以作为免疫抗原。用市售的氯霉素快速检测试剂盒可以定量测定所合成抗原中氯霉素的含量。将固体配成1mg／mL液，用TNBS法测氨基酸残基，得到BSA上偶联的氯霉素数目。     

曼氏血吸虫谷胱甘肽S—转移酶Sm26／2抗原肽研究

在计算机辅助下，应用Ｇｏｌｄｋｅｙ和ＰＣ－Ｇｅｎｅ程序，根据新报道的曼氏血吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｓｍ２６／２的氨基酸序列，进行亲水性、柔韧性、可接近性、电荷分布和二级结构分析，预测出６个抗原肽，并用固相法进行了合成。经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法测定，其中的２个对抗日本血吸虫免疫球蛋白多克隆抗体（抗－Ｓｉ－ＩｇＧ－ＰｃＡｂ）显示出较好的抗原性，１个对抗血吸虫表膜单克隆抗体（Ａ６ＭｃＡｂ）显示出较好的抗原性     

具有抗HIV病毒活性的杂多酸HPA-23与谷胱甘肽的作用

以谷胱甘肽作为病毒包络蛋白的模拟物，用ＮＭＲ方法研究了与具有抗爱滋病病毒活性杂多酸ＨＰＡ－２３的作用。对不同配比的ＨＰＡ－２３和谷胱甘肽混合物的＾１Ｈ和＾１＾８＾３ＷＮＭＲ谱研究结果表明，还原型和氧化型谷胱甘肽均以Ｃ末端ＣＯＯ＾－与ＨＰＡ－２３骨架的钨原子配位，还原型谷胱甘肽侧链上的巯基（ＳＨ）也参加配位。ＣＯＳＹ谱证明了ＳＨ配位为慢交换反应。早在七十年代初，人们就发现杂多酸具有抗病毒活性。最近报     

可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

对噬菌体展示人单链抗体库进行筛选,得到与半抗原S-二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯特异结合的单链抗体3B10。用计算机模拟分析了单链抗体的空间结构,发现抗原结合的CDR3区位于抗体的表面,推测其可能进一步参加硒化反。利用突变引物,在大肠杆菌中表达了可溶性抗体蛋白,并用化学方法将催化必需基团硒代半胱氨酸（Sec）组装到3B10抗原结合部位,获得了具有谷胱甘肽过氧化酶活力的人源抗体酶。动力学研究结果表明,抗体酶和天然酶一样,符合乒乓反应机制。     

甲状腺素脱碘抗体酶制备半抗原和全抗原的合成与单克隆抗体的制备

铜离子;衍生物;甲状腺素脱碘抗体酶制备半抗原和全抗原的合成与单克隆抗体的制备     

甲基睾酮的控温相分离免疫分析

建立了一种新的甲基睾酮（ＭＴ）测定的免疫分析方法。通过将ＭＴ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制得了ＭＴ全抗原ＭＴ－３－ＢＳＡ（Ａｇｍｔ）。将Ａｇｍｔ经兔子免疫获得了针对ＭＴ的多克隆抗体（Ａｂｍｔ）。与温度敏感性水凝胶偶联的抗原（ＰＮＴＰ－Ａｇｍｔ）和游离半抗原ＭＴ竞争性地与有限量的Ａｂｍｔ和辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）的偶联物（ＡＢｍｔ－ＨＲＰ）反应。根据临界析相温度以上免疫复合物沉淀的特性进行分离,根据     

去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定

在低温条件下,去甲氯胺酮与琥珀醛酸反应,合成了半抗原羧基-去甲氯胺酮,电喷雾质谱鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,红外光谱法鉴定结果表明,人工抗原合成成功,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定表明去甲氯胺酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联比为11:1。经动物免疫,获得高效价特异性多克隆抗体,抗血清效价可达5.12×104。     

氯黄隆酶联免疫吸附分析技术研究

对邻氯苯磺酰胺进行衍生合成半抗原,并与载体蛋白质共价偶联制备突出氯黄隆分子特异性部分的合成抗原,以合成抗原免疫兔获得对氯黄隆具高亲合力的抗血清。采用硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ纤维素反相吸附法分离纯化抗体,用辣根过氧化物酶以改良的过碘酶钠法标记 混合酸酐法标记半抗原。在此基础上建立了对氯黄隆具高度特异性的同接竞争,包被抗体,包被抗原直接竞争酶联免疫吸附分析技术。在优化条件下,氯黄隆测定的线性浓度范围为１０＾０－１０＾３ｎｇ／ｍＬ,检出限〈０．１ｎｇ／ｍＬ。邻氯苯磺酰胺及与氯黄隆结构类似的常用磺酰脲类除草剂不干扰氯黄隆的分析。     

含磷抗原及含硫抗原诱导的抗体水解活性的比较

以过渡态理论为基础,以羧肽酶A(CPA)的天然肽底物马脲酰-苯丙氨酸为模型,分别以磷原子和硫原子为四面体过渡态类似物的中心原子来设计和合成了半抗原和全抗原,将两类抗原用免疫方法诱导制备出抗体,然后对两类抗体水解肽键的活性进行比较。     

对克百威具高度特异性的免疫分析技术研究

合成了保留氨基甲酸酯结构的克百威半抗原,并采用活性酯法与载体蛋白质共价连接制备突出克百威分子结构特征的合成抗原。以合成抗原免疫新西兰白兔获得对克百威具高亲合力的抗血清,采用硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ纤维素反相吸附法分离和纯化抗体。以辣根过氧化物酶采用改良的过碘酸钠法标记抗体、混合酸酐法标记半抗原。在此基础上分别建立了对克百威具高度特异性的间接竞争,包被抗原、包被抗体直接竞争酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）     

基于分子模拟的脱氧雪腐镰刀菌烯醇半抗原分子设计及免疫效果研究

运用分子模拟软件Hyperchem 7.5,对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其6种不同连接臂修饰后的DON衍生物的分子构型进行量化计算,通过对其结构参数以及分子轨道的计算比较,获得高特异性、高生物活性的DON半抗原结构,避免了半抗原设计方面的盲目性。同时合成了其中的3种半抗原,通过碳二亚胺(EDC)法与BSA进行偶联免疫Bal b/c小鼠,制备多抗血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)和间接竞争ELISA法进行抗体效果的比较。结果表明,分子模拟计算结果与免疫实验的结果相一致,分子模拟对半抗原结构设计具有指导性意义。     

甲基睾酮的控温相分离荧光免疫分析

本文报道一种新的甲基睾酮（ＭＴ）测定的免疫分析法。通过将ＭＴ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制得了ＭＴ全抗原ＭＴ－３－ＢＳＡ（ＡｇＭＴ）,将ＡｇＭＴ经兔子免疫获得了针对ＭＴ的多克隆抗体。与温度敏感性水凝胶偶联的抗原和游离半抗原ＭＴ竞争性地与有限量的异硫氰基荧光素标记抗体反应。根据临界析相温度以上免疫复合物沉淀的特性进行分离,降低背景干扰。该法对ＭＴ测定的线性范围在２７．５ｎｇ／ｍＬ￣１．１μｇ／ｍＬ,     

模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的合成及表征

用Ｂ，Ｂ－二氟硼杂唑烷酮保护谷氨酸的α－氨基和α－羧基，通过液相合成法制得谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸三肽。结合苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）与硒化氢（Ｈ２Ｓｅ）的突变，再经纯化制得具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的三肽模拟物，即γ－谷氨酰－硒代半腕氨酰－甘氨酸。元素分析、氨基酸分析均证明了两种三肽的结构。电子能谱技术分析测得硒的价态及含量。     

曼氏血吸虫合成多肽抗原研究

在计算机的辅助下，根据曼氏血吸虫２６ＫＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶的氨基酸序列，通过对其亲水、柔韧性、可接近性、电荷分布和二级结构的分析来预测出６个抗原肽，并用固相法进行了合成。经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法测定，其中的２个对抗日本血吸虫免疫球蛋白多克隆抗体（抗－ＳＪ－ＩｇＣＰｃＡｂ），１个对抗血吸虫表膜单克隆抗体（Ａ６ＭｃＡｂ）均显示良好的抗原性。     

硒代二半胱氨酸对白血病细胞系谷胱甘肽过氧化物酶的影响

观察了硒代二半胱氨酸对白血病细胞系（Ｕ９３７和Ｋ５６２）生长增殖和谷胱甘肽过氧化物酶的影响．结果表明，硒代二半胱氨酸抑制白血病细胞生长和增殖，其抑制作用与药物浓度呈正相关．经３．０μｍｏｌ／Ｌ（ＩＣ５０）硒代二半胱氨酸作用３天后（Ｕ９３７和Ｋ５６２白血病细胞内谷胱甘肽过氧化物酶活性显著提高（Ｐ＜０．０１），在培养第３天和第６天时无显著差别．谷胱甘肽过氧化物酶活性的提高有利于白血病细胞生长的抑制．     

邻苯二甲酸二丁酯免疫检测 Ⅰ.人工抗原的制备及表征

邻苯二甲酸二丁酯免疫检测 Ⅰ.人工抗原的制备及表征;邻苯二甲酸二丁酯;人工抗原;半抗原;制备;表征     

二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究

以二甲氧基硫代磷酸酯类农药为目标,设计合成了系列半抗原及抗原,制备了4种宽谱特异性抗体。研究结果表明,含不饱和烷烃手臂的半抗原所制备的抗体宽谱特异性优于含酰胺键手臂的半抗原所制备的抗体。采用目标待测物的特征次级结构作为包被半抗原可显著提高ELISA检测灵敏度。经条件优化建立的最佳间接竞争ELISA多残留检测方法可同时检测8种常用高毒农药,其检出限(LOD)在2.6～104μg/kg之间,符合相关限量标准要求。生菜样品药物添加平均回收率为73.9%～121.4%;平均相对标准偏差为10.6%～18.4%。菜心样品药物添加平均回收率为80.4%～121.2%;平均相对标准偏差为13.5%～24.4%。方法精密度均达到气相色谱法的检测水平。     

硒与维生素E对需谷胱甘肽抗氧化酶的保护作用

观察了微量元素硒和维生素Ｅ对体外培养的仓鼠幼肾成纤维细胞的三种需谷胱甘肽抗氧化酶活性的保护作用。发现：三种促氧化剂,即Ｆｅ－ＡＤＰ、特丁基氢过氧化物（ｔ－ＢＨＰ）和Ｈ２Ｏ２,均显著刺激ＭＤＡ生成,抑制谷胱甘肽过氧化物酶的活性,而对谷胱甘肽还原酶无影响。其中ｔ－ＢＨＰ的作用最强,并可使谷胱甘肽Ｓ－转移酶的活性降低。两种抗氧化剂均对上述过氧化反应及酶活性抑制有明显预防作用,且维生素Ｅ更为有效。说明：ＧＳＨ－Ｐｘ较易受到过氧化反应损伤;维生素Ｅ是更为有效的抗氧化性保护物质。