酶解时间对罗非鱼鱼皮胶原蛋白酶解物抗氧化活性的影响

为了探究酶解时间对罗非鱼鱼皮胶原蛋白酶解物抗氧化活性的影响,采用酸法提取罗非鱼鱼皮胶原蛋白,胃蛋白酶酶解3、6、9、12和24 h制备酶解物,进行紫外光谱扫描,水解度测定,以DPPH·、·OH和O2?·清除率为指标评价抗氧化活性.结果表明:最大紫外吸收峰相似,水解度与酶解时间呈正相关;9 h酶解物对三种自由基清除效果最...     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性.采用正交实验方法, 以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正 交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGCS0-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对 肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bel-2表达的影响.结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶 量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温 度为40℃、酶解时间为2h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bc1-2的表达.紫贻贝酶解多肽具有 抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的.     

鳙鱼活性多肽酶法制备工艺研究

为优化鳙鱼活性多肽酶法制备工艺,分析了鳙鱼肉糜预处理温度和酶解温度对水解度的影响,确定了最佳的预处理条件为85℃水浴中加热预处理20 min,酶解温度设为55～75℃.经均匀设计实验优选和最优条件验证实验证实,以氮溶指数为指标的最优酶解条件为:酶解时间8.0 h,固液比1∶4.25,蛋白酶A用量3‰,酶解温度75℃,产物氮溶指数达80.54%;以多肽得率为指标的最优酶解条件为:酶解时间8.0 h,固液比1∶2,蛋白酶A用量3‰,酶解温度75℃,产物多肽得率达11.92%;以产物总抗氧化指数为指标的最优酶解条件为:酶解时间1.0 h,固液比1∶6,蛋白酶A用量3‰,酶解温度55℃,所得产物总抗氧化指数达87.42‰.     

鲷鱼鳞多肽的酶法制备及抗氧化活性研究

以鲷鱼鳞为原料,经物理方式处理后,采用单因素实验考察液料比、pH值、温度、酶底比及酶解时间对鲷鱼鳞酶解液水解度和DPPH自由基清除率的影响.结合响应面优化设计对酶解条件进行优化,结果在液料比为28∶1、酶底比7.0%、pH值7.3、50℃、酶解6 h条件下,所得酶解液水解度为10.35%,DPPH自由基清除率为82.33%.DPPH自由基清除、羟基自由基清除、还原力、金属螯合测试表明,酶解产物的抗氧化活性与浓度呈现剂量依赖性,具有抗氧化活性.分子量测定及氨基酸组成分析表明,酶解产物含有大量的寡肽,相对分子质量分布区间为180~1 000 u,其富含甘氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸,且含有多种人体必需的氨基酸.     

超滤对苜蓿蛋白酶解物抗氧化性的影响

采用超滤法从苜蓿可溶性蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽.考察操作压力、操作温度及料液质量浓度对超滤过程中膜通量的影响,并对超滤前后苜蓿可溶性蛋白酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较.结果表明:采用截留相对分子质量3 000的聚砜膜对苜蓿可溶性蛋白酶解物进行超滤分离的最适工艺条件为操作压力0.35 Mpa、操作温度25 ℃、苜蓿可溶性蛋白酶解物质量浓度35 g/L;超滤有效地除去了料液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量 1 000～500,500～130及130以下的组分分别从21.85%,21.64%和4.91%提高到27.91%,30.83%和7.61%,其抗氧化活性也得到提高.     

水蛭的酶解及其产物抗凝血活性评价

以水蛭为原料,研究不同酶解因素(酶种类、酶用量、酶解时间、pH值、酶解温度、底物浓度)对水蛭酶解产物抗凝血活性的影响规律,优化水蛭的酶解技术参数,并对酶解产物进行活性评价;研究结果表明,优化后的酶解技术条件为,适宜的水解酶为胰蛋白酶,酶用量7000 U/g,酶解时间7 h,酶解pH 8.3,酶解温度50℃,底物浓度14%(w/w)。在该条件下得到的酶解产物抗凝血酶活性最高,达到640 U/g。     

蛋白质酶促水解反应机理与动力学模型

研究蛋白质酶促水解制备生物活性多肽的反应机理与动力学行为，并建模表征不同反应机制的酶解曲线。基于对不同实验条件下反应时程特性的分析，以经典的米氏方程为理论基础，提出了同时考虑蛋白质单底物水解、蛋白酶失活以及底物或产物抑制因素的机理模型，并构建了指数形式动力学方程dh／dt=aexp（-bh），其中参数（a和b对于不同反应机理具有不同的表达形式和确定的数值结果，对于牛血清白蛋白（BSA）-胰蛋白酶（trypsin）模型体系，经实验拟合平均相对误差为4．73％，并求得该体系相应热力学和动力学常数：Km=0．0748g/L，Ks=7．961g/L，Kd=9．358min^-1，K2=38．439min^-1，Ea=64．826kJ／mol，Ed=80．031kJ／mol。所建整套模型可用于蛋白质酶解反应过程的模拟、热动力学常数的计算和生物反应器的优化设计。     

酶解牛肉多肽粉的营养评价

牛肉经酶解后喷雾干燥,得到酶解牛肉多肽粉,对其进行营养成分分析结果显示:其蛋白质含量87.5%,总脂肪含4.54%,氨基酸种类齐全,构成比例符合WHO/FAO标准,其人体需要量最大的赖氨酸和亮氨酸含量高,对人体有益元素含量由高到低分别为Mg、Ca、Zn、Fe、Cu.富含维生素E、B1、B2.酶解牛肉多肽粉是一种高蛋白、低脂肪的功能性保健品,具有很高的开发潜力.     

红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究

采用玻珠破壁 ,硫酸铵分级沉淀 ,凝胶过滤和离子交换等方法 ,从L 苯丙氨酸工业生产菌株红酵母中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 (PAL) ,纯化倍数为 1 39,收率为 1 2 6%,纯化到的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一蛋白带 ,其亚基分子量约为79.4kD该酶最适反应温度为 40℃ ,最适反应pH为 8.5 ,以L Phe为底物 ,40℃ ,pH 8.5的Km值为 3 87× 1 0 - 4 mol/L 除了Mg2 +和Na+,其它金属离子如Fe3+,Cu2 +,Co2 +,Hg2 +等对其都有明显的抑制作用 .     

文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

罗非鱼下脚料酶解产物中抗菌肽的初步研究

为了得到具有高活性的抗菌肽,开展罗非鱼下脚料的深加工利用,提高综合效益、减少环境污染。本研究以罗非鱼下脚料为原料,经过初步试验得出最佳酶解条件为:酶解温度为55℃,pH为9.0,底物浓度为10%,加酶量为4000Ug,酶解时间5h。酶解液在4℃下,以12000rpmin的速度离心20min,上清液经分子质量截留为1ku的超滤,获得分子质量小于1ku的粗肽组分。     

利用热带假丝酵母提高酶解马铃薯汁的蛋白质含量

马铃薯汁用糖化酶水解，接种热带假丝酵母，在摇床中３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ培养３ｄ．分别用（ＮＨ４）２ＳＯ４或柠檬酸铵为氮源，用Ｎａ２ＨＰＯ４－ＫＨ２ＰＯ４缓冲液和ＣａＣＯ３为ｐＨ值稳定物质时，测定发酵基质中蛋白质的增加量．结果表明，以（ＮＨ４）２ＳＯ４为氮源，用Ｎａ２ＨＰＯ４－ＫＨ２ＰＯ４缓冲液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ６．８）和ＣａＣＯ３（０．３％）为ｐＨ稳定物质时，发酵基质中蛋白质含量的增加值最大，以干重计，蛋白质含量从１０．４％增加到３９．６％．     

粘红酵母产L-苯丙氨酸解氨酶的研究

对粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)产生L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)的产酶条件进行了研究.结果表明粘红酵母产酶最佳条件为培养基／g*L－1;葡萄糖5．0,豆饼水解液10．0(以氨基酸计),KH2PO40．5,Ph5．5;接种量5%,摇瓶转速170r／min,28℃培养15h后添加L-苯丙氨酸至终质量浓度0．5g·     

α-硫辛酸对小牛血管细胞氧化损伤的保护作用

为了研究α-硫辛酸（lipoic acid, LA）对心血管氧化损伤的保护作用，本研究以离体培养的小牛主动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞为实验材料，探讨了LA 对这两种细胞氧化损伤的影响.结果表明，在H2O2胁迫下，LA可以剂量依赖性地提高细胞内的超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制细胞内过氧化产物丙二醛（MDA）的产生，提示LA对小牛主动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞氧化损伤有保护作用.本研究为LA的保健和药用价值开发,特别是对LA在保护心血管免受氧化损伤的功效的研发，提供了自由基生物学实验依据.     

酶解蛋膜制备小分子多肽的工艺研究

目的 以废弃蛋膜为原料,用碱性蛋白酶水解制备小分子多肽.方法 在单因素实验的基础上以水解度、肽质量分数为响应值,采用4因素(时间、温度、酶用量、pH)3水平的响应面(Re-sponse Surface Method,RSM)分析法根据回归分析确定影响因子.结果 在分析各因素的显著性和交互作用后,得到最佳水解条件:时间2.3h、温度48℃、酶用量2.0%、pH9.1,蛋膜水解度(DH)达到18.23%,肽含量达到62.38%.结论 为废弃蛋膜的综合利用提供了一条思路.     

星点设计-效应面法优化鹿角多肽酶解工艺

采用星点设计-效应面法优化鹿角多肽酶解工艺。煎煮法提取鹿角胶后经胃蛋白酶水解得到鹿角多肽,采用单因素法初步考察底物浓度、酶用量、温度、pH、酶解时间等因素对多肽峰面积及含量的影响;再以底物浓度、酶用量、温度为自变量,双缩脲法测得多肽含量及HPLC法测得峰面积总和为因变量进行星点设计试验,确定最佳酶解工艺,并进行验证。结果表明,星点设计 效应面法得到的最佳酶解条件为酶用量1.8%、底物浓度0.08 mg/mL、温度40 ℃。该方法简便、可行、稳定,预测性良好。     

阿胶酶解成分对贫血小鼠造血系统的保护机制

运用5-氟脲嘧啶制备的小鼠贫血模型研究降解分离后所得阿胶有效组分A、B的升高红、白血球的作用机制.结果显示:体外消化液中提取的A、B组分能促进贫血小鼠外周血白细胞和红细胞的升高,促进骨髓和脾造血干/祖细胞集落BFU-E,CFU-E,CFU-GM的增加,提高外周血GM-CSF,IL-6,EPO的含量,降低负相造血因子INF-γ、TGF-β含量,刺激肝和肾EPO和GMCSF mRNA表达.从而说明从体外模拟人胃、肠的消化系统分离的阿胶组分A、B能够刺激造血.该有效补血活性成分的升高红、白血球的作用机制可能与保护贫血小鼠造血微环境和造血干、祖细胞,刺激髓外造血器官相关造血细胞因子表达有关.     

肝素酶Ⅰ对合成的肝素五糖的酶解作用及对其抗Xa因子活性的影响

研究肝素酶Ⅰ（来源于Flavobacterum heparinas,EC4.2.2.7)对人工合成的且含有与抗凝血酶Ⅲ特定结合位点的肝素五糖（SHP）的酶解作用,并对酶解作用的动力学进行研究,利用强阴离子高效液相色谱（SAX－HPLC）对酶解混合物进行分离,利用质谱（ESIMS）和核磁共振波谱（1H－NMR）技术对所得的二糖和三糖的结构进行确证。研究 结果表明,这种被作为肝素反向试剂的肝素酶I可水解人工所合成的肝素五糖,从而使之丧失抗Xa因子活性。     

酶解章鱼下脚料的产物分析

为了提高下脚料的综合利用率,用4种商业蛋白酶对章鱼下脚料进行水解,并初步分析检测产物中的氨基酸和抗氧化多肽.实验结果表明:动物蛋白酶水解液中的复合氨基酸获取率占总氨基酸的57.12%,达到57.12%;而4种蛋白酶水解产物中肽类物质的·OH清除力IC50均小于1.28 mg·mL^-1,Fe²⁺螯合力IC50均小于2.82 mg·mL^-1,还原力随多肽质量浓度增加而提升;这种工艺条件和方法可以同时获取两类活性物质(复合氨基酸、抗氧化性多肽),