杜仲树皮、新鲜叶片和杜仲愈伤组织块有效成分的含量测定

对杜仲树皮（市售）、杜仲新鲜叶片、杜仲幼苗各种愈伤组织块（茎段、幼叶、子房、花药经ＭＳ培养基附加生长调节素培养诱导而得的愈伤组织）的有效成分进行研究，证明它们有一些相同成分。用２，６－二氯酚靛酚滴定法测定了它们维生素Ｃ的含量；用紫外分光光度法测定了它们的桃叶珊瑚甙的含量；用薄层层析－分光光度法测定了它们的氯原酸的含量。     

杜仲翅果主要有效成分提取工艺的研究

研究杜仲翅果所含主要有效成分———杜仲油、杜仲胶和桃叶珊瑚甙的提取工艺,试验结果表明,杜仲油提取最佳工艺条件为:原料水分8.86%、提取时间15min×8次,提取率可达12.59%;杜仲胶最佳提取工艺为:浸提温度65℃、提取时间20min×5次,提取率可达8.94%;桃叶珊瑚甙采用乙醇/乙醚法提取工艺,提取率可达4.03%。     

杜仲叶片愈伤组织诱导及增殖培养条件的优化

以杜仲嫩叶为外植体,运用正交试验优选6-BA、NAA、2,4-D和PVP四种物质组合,进行杜仲愈伤组织诱导及增殖试验。结果表明:(1)这四种物质对杜仲愈伤组织诱导的影响顺序是6-BA>NAA>PVP,对增殖的影响顺序是6-BA>NAA>2,4-D。利用杜仲叶片诱导愈伤组织最佳培养基为MS+0.5 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1NAA+2%PVP。(2)增殖培养基中添加1.0 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-12,4-D为最适增殖组合,能明显提高杜仲愈伤组织增殖系数。应用优化的杜仲愈伤组织诱导及增殖培养条件,能获得较大量的愈伤组织,使规模化生产杜仲有效成分成为可能。     

杜仲愈伤组织的诱导及增殖效应

以杜仲（Eucommia Umoidues Olive）的幼茎为外植体，接种于附加NAA、2，4-D、KT、6-BA及其组合的MS培养基上，均能产生愈伤组织，但MS 2，4-D的培养基上愈伤组织容易褐化，其他均可正常生长，MS NAA0.5mg/L 6-BA0.5mg/L KT1.0mg/L的培养基是适合愈伤组织的增殖培养的。     

基于转录组高通量测序分析白光对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响

利用Illumina HiSeq 2500平台对光暗培养的杜仲愈伤组织进行了转录组高通量测序,利用BLAST软件进行差异表达基因的功能注释和富集分析,就白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响进行了研究.结果表明:通过Trinity软件合并组装后共获得62 030个Unigenes,通过BLASTX比对,共获得25 417(40.98%)个有注释信息的Unigenes.通过对KEGG通路进行深入分析表明,白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)培养杜仲愈伤组织18 d,与绿原酸合成相关的3种酶基因上调表达,它们分别为苯丙氨酸解氨酶(EC 4.3.1.24,phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、肉桂酸-4-羟基化酶(EC 1.14.13.11,trans-cinnamate 4-monooxygenase,C4H)、奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(EC 2.3.1.133,Shikimate o-hydroxyl-cinnamoyltransferase,HCT).由此推断,白光能促进杜仲愈伤组织中绿原酸的积累.研究结果为获取高产绿原酸资源和杜仲遗传分析提供有价值的资料.     

苦皮藤愈伤组织中有效成分的提取与测定

为扩大苦皮藤有效成分的来源,减轻对野生植物资源的需求压力,以苦皮藤素A含量为比较标准,对苦皮藤愈伤组织中有效成分的提取及其含量进行研究结果发现,以甲醇为提取溶剂采用回流提取时,料液比1∶8、60℃提取1.5 h,苦皮藤种子、叶和茎为外植体的愈伤组织苦皮藤素A提取率最高,皮藤素A含量茎愈伤组织种子愈伤组织叶愈伤组织.说明苦皮藤种子、叶和茎为外植体的愈伤组织中含有以苦皮藤素A为代表的主要活性成分.     

甘蔗愈伤组织耐盐性研究:耐盐愈伤组织的筛选及脯氨酸、还原糖含量变化

在附加不同浓度NaCl及2.4-D2mg/L的MS培养基上,甘蔗愈伤组织表现出不同的生长效应。培养基中NaCl浓度低时(1％以下),甘蔗愈伤组织表现为适应性生长;而在高NaCl浓度时(2％以上),愈伤组织生长表现出盐害特征。脯氨酸、还原糖测定结果显示,在盐适应情况下,甘蔗愈伤组织中的脯氨酸含量较高,还原糖含量较低;在盐害情况下则相反。     

五针松针叶愈伤组织的诱导和培养基优化

以五针松针叶切段为外植体，接种在ＧＤ和ＭＢ二种基本培养基上进行比较实验。结果表明，ＧＤ培养基诱导五针松针叶愈伤组织效果较好。在此基础上，对２，４－Ｄ，ＢＡ，肌醇，ＣＨ和蔗糖五个因子，四种水平进行了正交设计试验，试验结果表明，五针松针叶愈伤组织生长的最佳培养基配方和为ＧＤ＋５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋１ｍｇ／ＬＢＡ＋５００ｍｇ／Ｌ肌醇＋６００ｍｇ／ＬＣＨ＋３％蔗糖＋０．７％琼脂。     

玉米幼叶愈伤组织诱导和不定根的再生

以 7d龄左右的玉米 (ZeamaysL .)实生苗幼叶不同切段为材料 ,在添加不同植物激素的 1/ 2MS培养基上培养 ,2周后可以诱导出愈伤组织 ,第 2叶基部愈伤组织诱导率高于第 1叶 .MS预处理培养基中添加 1mg·L- 1呋喃腺嘌呤 (KT)或 1mg·L- 1苄基腺嘌呤 (BA)后 ,使诱导频率提高到 5 8.3%,并不同程度地诱导不定根的发生 ;诱导培养基中添加 1mg·L- 1KT或 1mg·L- 1BA对愈伤组织和不定根的诱导均有抑制作用 .当在诱导培养基中添加 5 0 0mg·L- 1水解酪蛋白(CH)时 ,诱导培养基中BA或KT对愈伤组织和不定根发生的抑制作用得到缓解 .     

茉莉酸甲酯,蔗糖和氮源对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量的影响

采用单因素和正交试验研究了氮源、蔗糖浓度和诱导子茉莉酸甲酯对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮类物质积累的影响.结果表明:各因子影响黄酮积累量依次为:茉莉酸甲酯＞蔗糖＞水解酪蛋白＞氮源;蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量积累的最佳培养基组合为:MS+NAA 1.0 mg/L+ 6-BA 2.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+蔗糖50.0 g/L+水解酪蛋白1.0g/L+ MeJA0.02 μmol/L,NH4+∶ NO3-为1∶1.在这种条件下,黄酮产量达到最高为9.78mg/L.     

黄芩愈伤组织的诱导培养及其黄芩苷的含量测定

试验首次建立了黄芩愈伤组织中黄芩苷的测定方法,并对黄芩愈伤组织生长和黄芩苷生成的稳定性进行了初步研究.采用高效液相色谱法测定愈伤组织中黄芩苷的含量,色谱条件为:色谱柱为ODS-C18柱,流动相:水-甲醇-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1 mL/m in,检测波长为280 nm,室温.结果表明:黄芩苷在2.6μg/mL~120μg/mL范围内线形关系良好(r=0.9994),平均回收率为99.74%,RSD为0.85%,该方法具有简便、快速、稳定性好,可用于愈伤组织中黄芩苷的含量测定.     

怀地黄85-5叶片愈伤组织快速诱导和植株再生的研究

以怀地黄85-5无菌苗的叶片为外植体,接种到含有不同浓度植物生长物质的MS培养基上,可诱导愈伤组织,进而可分化出芽和根,从而实现了由叶片到完整植株的快速繁殖.本实验着重研究了不同浓度的6-BA对怀地黄叶片愈伤组织芽的分化的影响,及在何种浓度诱导愈伤组织和芽的分化时间最短.结果表明培养基中加入1.0 mg.L-1的6-BA最有利于怀地黄愈伤组织芽的分化,同时,在该浓度芽的分化所需时间最短.这种经快速诱导形成的不定芽经生根培养后可进行移栽,移栽后成活率可达90%.     

何首乌根和茎愈伤组织的二苯乙烯苷含量

为了获得何首乌悬浮细胞系、研究何首乌细胞的液体培养和二苯乙烯苷的代谢路径,首先要获得何首乌愈伤组织.文中以何首乌根和茎为外植体,通过正交试验筛选根和茎诱导愈伤组织的适宜培养基,结果表明,在26℃和暗培养条件下,MS培养基中添加1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸和0.4mg/L萘乙酸最适宜诱导出愈伤组织,诱导率可以达到96.7%.通过HPLC测定了根和茎愈伤组织的二苯乙烯苷含量,分别为1.5mg/g和0.4mg/g.     

小麦叶基切段愈伤组织的诱导和植株再生

从3～5d龄小麦籽苗幼叶基部切段诱导出大量愈伤组织。诱导可再生的愈伤组织的培养基为MS 1．5mg／L 2，4-D 0．2mg／L，激动素(KT) 500mg／L，水解酪蛋白(CH) 120mg／L，天冬酰胺 100mg／L，肌醇 3％蔗糖 0．7％琼脂粉。当愈伤组织转移到生长调节物质改变为2mg／L KT，1mg／L NAA和0．1mg／L 2，4-D的MS培养基上培养后，出现了苗的分化。当分化苗在无机盐分减半的MS培养基上培养后，产生了根。愈伤组织的形成和植株再生的频率与外植体的位置和籽苗的发育阶段密切相关，3～4d龄苗叶基1cm处的切段效果最好。叶基愈伤组织的分化能力可保持3～4个月。     

迎春花无菌体系的建立以及茎段和叶片愈伤组织的诱导

本文对迎春花无菌体系的建立和茎段、叶片愈伤组织的诱导进行了研究。结果表明：（1）在建立迎春花的无菌体系时,应该选择晴天去采集外植体为好;（2）带芽茎段和叶片的污染率最大,而不带芽茎段的污染率最小;（3）在超净工作台外消毒应先用饱和洗衣粉溶液浸泡10 min,然后用自来水冲洗2-3次,最后再用蒸馏水冲洗2-3次;在进行超净工作台内消毒时,叶片应该先用84消毒液（1%）浸泡5min,无菌水冲洗3次,75%酒精浸泡20s,无菌水冲洗3次,0.1%升汞浸泡8 min,无菌水冲洗3次,而茎段应该先用84消毒液（1%）浸泡10 min,无菌水冲洗3次,75%酒精浸泡30s,无菌水冲洗3次,0.1%升汞浸泡10min,无菌水冲洗3次;（4）在NAA为0.2 mg/L时,高浓度的6-BA有利于不定根的再生,而低浓度的6-BA则更利于愈伤组织的诱导;在NAA为0.2 mg/L时,高浓度的KT有利于愈伤组织的诱导,而低浓度的KT则有利于不定根的再生;（5）NAA更利于不定根诱导,也可诱导愈伤组织。而2,4-D只利于愈伤组织的诱导,不利于诱导不定根。     

何首乌根和茎愈伤组织的诱导和二苯乙烯苷含量的检测

以何首乌根和茎为外植体,通过正交试验筛选根和茎诱导的最佳培养基,结果表明在26℃和暗培养条件下,MS培养基中添加1 mg•L-1 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和0.4 mg•L-1萘乙酸（NAA）最容易诱导出愈伤组织,诱导率可以达到96.7 %。通过HPLC测定了根和茎愈伤组织的二苯乙烯苷含量,分别为1.5mg/g和0.4mg/g。     

红豆杉愈伤组织生长与PPO,POD比活性和多酚质量分数变化的研究

以墨西哥红豆杉(Taxus globosa)和短叶红豆杉(Taxus brerifolia)愈伤组织为材料,在愈伤组织生长的不同时期取样分析生物产量、多酚质量分数、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)酶活性.发现墨西哥红豆杉愈伤组织比短叶红豆杉愈伤组织生长快的原因是:多酚质量分数低,POD活性高和PPO活性低.研究表明,通过提高细胞POD活性和降低PPO活性有助于提高红豆杉愈伤组织的生物产量.     

Ce(NO_3)_3对盾叶薯蓣茎段愈伤组织生长和不定根诱导影响的研究

为研究硝酸铈对盾叶薯蓣快速繁殖的影响,采用以盾叶薯蓣茎段为外植体,在其愈伤诱导培养基、丛生芽培养基及生根培养基中添加不同浓度的Ce3+.结果表明,含Ce3+为5 mg/L的培养基可显著提高愈伤组织诱导率,含Ce3+1 mg/L的培养基丛生芽诱导率最高;1~15 mg/L的Ce3+对盾叶薯蓣组培苗生根有明显的促进作用,5 mg/L的Ce3+显示出最强的促进效应.可以认为,一定浓度Ce3+对诱导愈伤组织生长、丛生芽萌发及不定根生长有促进作用,但高浓度的Ce3+均对其呈现抑制效应.