朱鹮RAPD反应体系优化研究

目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件。方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变。结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD反应体系。结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2 (25 mM)2.5μL,10×Buffer2.5μL,dNTPs(10mM)0.5μL,引物(8μmol/L)1.0μL,Tag酶(3 U/μL)0.4μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0μL;PCR循环中复性温度为37℃。     

Idaho Rapidcycler PCR仪上用薄壁管进行RAPD扩增的程序优化

以尾叶桉DNA为材料,对IdahoRapidcycler扩增仪上用薄壁管进行RAPD扩增的程序进行了优化研究。通过逐步对退火、延伸和变性的温度和时间及总的循环次数设置不同梯度和亚梯度,比较不同梯度和亚梯度的扩增结果,确定优化程序为:93℃预变性1min;再40次循环:93℃变性20s,38℃退火21s,72℃延伸1min;最后72℃延伸7min。该程序的扩增时间较短,具有较好的特异性和重复性。另外,薄壁管反应架在反应室的内位比同时扩增的外位效果差,扩增时只能利用外位。     

濒危植物刺桫椤RAPD反应体系的优化

以高盐SDS法提取濒危植物刺桫椤(Alsophila spinulosa)嫩叶总DNA，进行RAPD分析，分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg^2 和Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响．筛选并建立了适合于利桫椤RAPD扩增的反应体系：反应体积10μL，内含2ng/μL模板DNA，2．0mmo1/L MgCl2,0．3μmo1／L引物，300μmo1／L dNTP，0．5u Taq DNA聚合酶．     

大白菜RAPD扩增体系的优化研究

以大白菜3411－7自交系为材料，使用PE公司生产的Thermal Cycler480型PCR仪，对影响大白菜RAPD扩增的因素进行了研究，确定了模板，Mg^2 ,dNTPs，引物和Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数。实验结果表明，在25μL反应体系中使用20－60mg的模板DNA，1.5-2.0mmol/L的Mg^2 ,0.15-0.25mmol/L dNTPs,0.8-1.0μmol/L随机引物，1.0-1.5U Taq DNA聚合酶，在94℃下预变性5min后执行94℃ 1min,37℃ 1min,72℃ 2min，35个循环，最后72℃再延伸5min的条件下，大白菜的RAPD扩增效果较好。     

RAPD法研究穗花杉遗传多样性的反应条件优化

以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,PCR反应体积为20μL.最佳扩增程序为94℃5min,1个循环;94℃1min、37℃1min、72℃2min,40个循环;72℃10min,1个循环.     

栉孔扇贝RAPD反应体系的优化

在研究栉孔扇贝不同地理野生种群的遗传多样性时 ,对RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在此基础上 ,建立了栉孔扇贝RAPD实验室研究的最佳反应体系 :2 5 μl反应体系中 ,模板浓度为 2 5ng ,引物浓度为 2 5ng,dNTPs为 10 0 μM ,TaqDNA酶 1个单位 ,10×Buffer 2 5 μl,镁离子浓度 2mM .PCR循环参数为 :94℃预变性 5min ,然后 94℃变性 0 5min ,36℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,共进行 45个循环 ,最后 72℃延伸 10min .     

乌头基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

采用改进方法提取乌头基因组DNA,建立乌头RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出乌头RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括dNTPs 0.06 mmol·L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA40 ng,Taq酶1U,Mg2+ 4 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5μl,其余部分为无菌超纯水。PCR扩增循环为95℃3 min,38 ℃1 min,72 ℃2min 1次循环;94 ℃=1 min,38℃1 min,72 ℃2 min,45次循环,最后72℃延伸10 min。     

用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．     

Idaho Rapidcycler PCR仪上用薄壁管进行RAPD扩增的程序优化

以地桉ＤＮＡ为材料,对Idaho Rapidcycler扩增仪上用薄壁管进行ＲＡＰＤ扩增的程序进行了优化研究,通过逐步对退火、延伸和变性的温度和时间及总的循环次数设置不同梯度和亚梯度,比较不同梯度和亚梯度的扩增结果,确定优化程序为：９３℃预变性１min;再４０次循环：９３℃变性２０s,38℃退火２１s, 7２℃延伸７min。该程序的扩增时间较短,具有较好的特异性和重复性。另外,薄壁管反应架在反应室的内位比同时扩增的外位效果差,扩增时只能利用外位。     

欧洲甜樱桃RAPD反应体系的建立与优化

以欧洲甜樱桃萨米托品种为研究对象,利用改进的CTAB法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了模板、Mg2＋、TaqE、dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立了欧洲甜樱桃RAPD技术扩增体系．研究结果表明,在25出反应体系中,各组分最佳的浓度分别为：10×Buffer2．5μl,2．5mmol·L^-1Mg2＋2．5μl,Taq E0．06U·μl^-1,0．2mmol·L^-1dNTPs,0．2μmol·L^-1Primer,模板DNAl．2ng·μl^-1．PCR循环程序为：94℃预变性4min。94℃变性40s,36℃退火45s,72℃延伸1min,共36个循环,最后72℃延伸7min．     

安徽羽叶报春RAPD分析实验条件优化的研究

采用CTAB法^[1]从珍稀濒危植物安徽羽叶报春(Primula merrilliana)的幼叶中提取DNA，进行随机扩增多态DNA(RAPD)实验，通过Mg^2 、dNTP、Taq酶、模板浓度的优化，确立了RAPD反应的最佳体系(25μ1)范围为：Mg^2 浓度为2．0—2．5mmol／L，模板浓度为每个反应50—150ng，dNTP浓度为200—250μmol／L，Taq酶为1.5—2.0U，按照优化的RAPD条件进行的重复实验，重现性良好。     

粗壮女贞RAPD-PCR实验体系优化的研究

以粗壮女贞嫩芽为材料,对粗壮女贞RAPD分析中一些重要影响因素,包括模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg2 浓度、Taq酶用量、退火温度、延伸时间以及循环次数等因子进行了比较系统的摸索和优化.建立了适合粗壮女贞RAP-PCRD分析的优化反应体系:即25μl 反应体系中Mg2 浓度为2.5mM,dNTPs浓度为200μM,Taq酶用量为2.0U,引物浓度为10pmol,模板浓度为80ng.PCR扩增程序为:94℃预变性4min,然后按94℃变性30s,37℃退火45s,72℃延伸120s,进行40个循环,最后于72℃延伸10min.以该优化的RAPD条件进行重复实验,其实验结果重现性良好.     

RAPD在生物学研究中的应用

概述了RAPD的原理及优点 ,并介绍了RAPD在生物学研究中的几种应用 .     

RAPD技术在遗传多样性研究中的应用

近几年来，RAPD技术在遗传多样性研究中的应用取得很大进展，就其在收集种质资源、遗传育种物种进化及鉴定、基因组图谱构建和基因定位及分离等方面的应用进行了综合评述，并对RAPD的优点和缺点及对策进行详述。     

电力系统无功综合优化补偿的研究

合理地进行电力系统无功电源的配置,是保证电力系统电压质量、降低有功网损的重要措施.本文从规划角度出发提出了在保证电压质量的前提下,以最少无功设备投资为目标、综合考虑多种正常运行方式与多种事故运行方式的“无功最优规划”方法.本方法主要特点在于在优化补偿中,根据我国电力系统中存在大量固定分接头变压器的实际,充分利用了系统中各种现有调压手段的配合,同时考虑了事故运行方式下的负荷静态特性及补偿设备的无功出力与电压的关系,使所得出的无功补偿结果更为经济合理.为了克服初始潮流收敛的困难,本文提出了一种简单、省时的“PV”起步潮流计算方法.在以线性规划逐步逼近非线性规划的迭代过程中,采用了小步长调整手段,这不仅保证了优化迭代的收敛性,同时缩短了计算时间.通过试验系统的计算证实了本方法是有效的.     

环丙基体系溶剂解反应实质的讨论

本文对环丙基体系溶剂解反应形成环丙基体系产物的特点提出的三种可能机理进行讨论,并通过实例说明了机理三更为合理.     

SAS软件在微生物培养条件优化中的应用

多种实验优化方法已被成功地运用于微生物培养基和培养条件的优化工作中。根据Plackett-Burman设计法和响应面分析法的基本原理,对SAS软件在实验安排和数据分析中的应用进行较为详细的分析。     

网络优化技术在油田注水系统设计中的应用

从系统工程的角度出发,通过运用网络优化技术,对油田注水系统进行了计算机优化辅助设计．在综合考虑油田注水系统的投资费用与长期运行损耗费用均衡的基础上着重解决了油田注水系统的结构优化设计问题,并以此为线索建立了整个输水管网的优化设计数学模型．     

我国涉外专利纠纷中禁诉令制度的反思与优化

在知识经济时代中,各个国家对本国专利的保护采取了严格的措施.随着经济的全球化,本国专利的域外适用也在不断繁荣发展.专利的域外适用避免不了引起不同主体之间的纠纷.起源于英美法系的禁诉令制度在涉外专利纠纷中的适用往往侵害我国司法主权以及我国当事人对其专利享有的合法利益.我国现有的争议解决机制对于国外禁诉令制度的应对存在司法...     

RAPD分析在诸葛菜与太白诸葛菜种间正反交杂种中的应用

用２０个随机序列的寡聚核苷酸作为引物，对诸葛菜９５００２和太白诸葛菜９５－４９及其种间正反杂种进行ＲＡＰＤ分析，９个引物的扩增产物在９５００２和９５－４９间相似率为４８．１％，差异较大，在其正反交杂中相似率为９６．６％，差异不明显，ＲＡＰＤ产物在亲子间的传递符合孟德尔遗传，这一种间正反交系统可用于多态性引物的选择。