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辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性 总被引:15,自引:0,他引:15
研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系,检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为:辣根过氧化物酶(HRP)7000 U/L,4-氨基安替比林(AAP)1 mmol/L,苯酚(PA)6 mmol/L,黄嘌呤(XAN)1 mmol/L溶于50 mmol/L Tris-CL缓冲液(pH 8.4);反应温度为37℃,保温时间为20 m in;检测波长为508 nm。本方法测定XOD酶活的线性范围为5.0~100.0 U/L,线性关系良好(r=0.9992),检出限为1.3 U/L。该方法操作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。 相似文献
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基于血清白蛋白对辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化邻苯二酚紫的反应具有强烈的抑制作用,建立了一种测定血清白蛋白的新方法。在优化的实验条件下:pH4.0NaAc-HAc缓冲介质,(30±0.2)℃恒温反应10min,以430nm为测定波长,本方法测定牛血清白蛋白(BSA)线性范围为(0.4~5.0)×10-7mol/L;检出限为8.6×10-9mol/L。以稳态速率法测定了米氏常数(Km)和米氏速率(Vm),确定其抑制类型为竞争性抑制。方法用于人血清样品中蛋白质的测定,操作简便,灵敏度高,选择性好,结果满意。 相似文献
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利用对辣根过氧化物酶催化体系的干扰测定左旋多巴 总被引:3,自引:2,他引:3
提出辣根过氧化物酶法分析左旋多巴,方法基于一定条件下左旋多巴对辣根过氧化物酶催化对氯苯酚-4-AAP偶联发色体系有干扰,干扰程度与左旋多巴的有浓度有相关性。 相似文献
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催化荧光光度法测定辣根过氧化物酶及甲胎蛋白 总被引:5,自引:0,他引:5
建立了催化动力学荧光光度法测定辣根过氧化物酶(HRP)及人甲胎蛋白(AFP)的新方法。在含TritorX-100的磷酸盐缓冲溶液中,辣根过氧化氢氧化邻苯二胺的产物2,3-二氨基吩嗪的荧光强度有明显的增强。在一定的实验条件下,该产物的荧光强度与HRP的量成正比,方法对HRP的线性范围为10~200pg,线性相关系数为0.9956,最低检出下限可达8pg,其相对标准偏差为3.2%(n=10)。应用此测定体 相似文献
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过氧化氢能够氧化茜素红使之褪色,而模拟酶-血红蛋白对其具有催化作用.建立了一种以茜素红为指示剂的过氧化氢一茜素红一血红蛋白酶催化反应体系测定痕量过氧化氢的方法.确定了反应的最佳条件,体系的酸度为pH 9.8的氨水-氯化铵缓冲溶液,最大吸收波长为525 nm.线性范围为3.0×10-7~8.0×10-5mol·L-1,检出限(3s/k)为5.2×10<'-8>mol·L-1,表观摩尔吸光率为1.1×104mol-1·cm-1.该方法可用于雨水及消毒水中过氧化氢含量的测定.并以此样品为基体,测定了方法的平均回收率和相对标准偏差(n=5)依次为100.3%及3.26%. 相似文献
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建立了基于二胺氧化酶-辣根过氧化物酶双酶显色的紫外-可见分光光度法测定牛奶中组胺与腐胺含量的方法。取10 mL牛奶样品,加入10 mL 2%(质量分数)硝酸铅标准溶液,混匀,再加入20 mL 0.1%(质量分数)三氯乙酸标准溶液,混匀,离心,取上清液,将溶液pH调至7.2,得到待测样品溶液。移取1.0 g·L-1二胺氧化酶标准溶液100μL,加入100μL待测样品溶液,于50℃水浴中反应15 min。反应结束后,依次加入1.0 g·L-1辣根过氧化物酶标准溶液50μL,0.5 g·L-1四甲基联苯胺标准溶液200μL和2 mol·L-1盐酸溶液50μL,采用紫外-可见分光光度计测定体系的吸光度。结果显示:样品溶液由无色变为蓝色又变为黄色;组胺、腐胺的浓度分别在2.5~150μmol·L-1和5~200μmol·L-1内与其对应的吸光度呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.652 2μmol·L-1和1.134 1μmol·L 相似文献
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1 引言 砷的比色测定,其经典方法是以AgDDC吡啶为吸收液,此方法具有灵敏度高、重现性好等优点,由于吡啶的恶臭和毒性的原因,其吸收液一般改为三乙醇胺氯仿为吸收液,此吸收液与吡啶吸收液相比有毒性低这一优点,但灵敏度不如吡啶高。本文在砷斑法的基础上通过试验,发现在酸性条件下,用溴化汞的乙醇溶液为 相似文献
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试验发现血红蛋白(Hb)对酸性铬蓝K与过氧化氢的氧化褪色反应的催化作用因甲氧氯普胺的存在而受到抑制。此反应系在pH 9.5的氨性缓冲介质中进行,并根据在551 nm波长(为酸性铬蓝K在此条件下的吸收峰)处测得的吸光度A0(试剂空白溶液)、A1(加Hb溶液)及A2(加Hb和甲氧氯普胺溶液),按所给公式计算反应的抑制率(I%)。甲氧氯普胺的浓度在3.0×10-6~1.2×10-4mol·L-1范围内与所算得的抑制率呈线性关系。上述反应的检出限(3s/k)为2.8×10-8mol·L-1。浓度水平在4.0×10-5mol·L-1时,测得其相对标准偏差(n=11)为4.6%。根据以上方法,测定了药物针剂中甲氧氯普胺含量,测得结果与其标示值相符。 相似文献
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通过采用邻苯二甲酸酐(PA)对辣根过氧化物酶(HRP)的蛋白链进行修饰, 研究了PA化学修饰对HRP的稳定性、催化活性、活性中心结构、酶对底物的亲合性和专一性等催化性质的影响. 结果显示: 酸性条件下(pH=3), 4小时后PA-HRP的催化活性比天然HRP提高了7.5%;碱性条件下(pH=10), 4小时后PA-HRP的催化活性比天然HRP提高了27%. PA-HRP的K_m值为8.16 (mmol/L), 小于天然HRP的K_m值12.99 (mmol/L), 而PA-HRP的k_(cat)/K_m值为7.86(10~4(L/ mmol· min)大于天然HRP的k_(cat)/K_m的6.70(10~4(L/ mmol· min). 这些催化活性和动力学数据表明了PA-HRP与天然HRP相比其稳定性、酶对底物的亲和性和专一性得到了提高. 紫外-可见光谱、拉曼光谱数据显示: 修饰剂PA 改变了天然HRP血红素周围的微环境, 对酶蛋白分子的活性中心结构并没有影响. 差示光谱显示PA修饰剂可以提高酶对底物的亲和力. 相似文献
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Horseradish peroxidase (HRP) catalyzes the oxidation of a wide variety of compounds inthe presence of hydroperoxide. The products have been used as the important materialsin extensive fields because of the con juged bond. Many investigators have stUdied themechanism of HRP. When native HRP reacts with hydroperoxide, compound i, which istwo oxidizing equivalents of the ferric state of HRP, is formed. Compound I issubsequently reduced by one electron to form compound 11. Reduction of compo… 相似文献
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水相中辣根过氧化物酶的反应动力学和机理研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分光光度法 ,对水相中辣根过氧化物酶与底物反应的最适反应条件进行了研究 .同时 ,用停流法探讨了 2 5℃时辣根过氧化物酶反应过程中各种中间化合物的形成和消失速度 ;并用停流光谱法对稳态动力学的研究结果进行了验证 相似文献
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《Electroanalysis》2004,16(4):260-267
An electrochemical flow analysis system was optimized together with immobilized putrescine oxidase and horseradish peroxidase for putrescine measurement. Four coupling agents, suberic acid bis(N‐hydroxysuccinimide ester), γ‐maleimidobutyric N‐hydroxysuccinimide ester, 1‐ethyl‐3‐(3‐dimethylaminopropyl)carbodiimide and glutaraldehyde, were used for immobilizing the two enzymes on porous aminopropyl glass beads to form a bienzymic detection column. Although the glutaraldehyde crosslinking procedure offered the highest response, the immobilized bienzyme system was responsive to putrescine, spermidine (123% of the putrescine response at 250 μM) and cadaverine (98% of the putrescine response). In contrast, the enzymes immobilized on the glass beads using suberic acid bis(N‐hydroxysuccinimide ester) offered significantly better selectivity towards putrescine at the same concentration. For comparison, cadaverine and spermidine only provoked a response of 4.7% and 27.5% of the putrescine signal. The response to cadaverine and spermidine was further suppressed by lowering the detection pH from 8 to 7. At 250 μM, the response obtained for cadaverine and spermidine was only 1.5% and 3.9%, respectively, of the signal obtained for putrescine. A linear response to putrescine was obtained from 5 to 75 μM (0.629 μAs μM?1, R2=0.997) with a detection limit of 5 μM (S/N=3). The amperometric response retained 75% of its initial value after 600 repeated injections. The immobilized PUO/HRP (putrescine oxidase/horseradish peroxidase) was successfully demonstrated for measuring putrescine in fish extracts as an indicator of fish spoilage. 相似文献
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LI Ying-xiu ZHU Lian-de ZHU Guo-yi State Key Lab of Electroanalytical Chemistry Changchun Institute of Applied Chemistry Chinese Academy of Sciences Changchun P.R. ChinaZHAO Chun College of Chemistry Jilin University Changchun P 《高等学校化学研究》2002,18(1):12-15
IntroductionIn recent years chemiluminescence (CL)biosensor prepared by immobilization of a sensitivereagent such as peroxidase or oxidase onto a solidmatrix has attracted much attention due to the highsensitivity of the chemiluminescent reaction of thesensitive reagent even with a simple instrument.Generally,CL biosensors can be divided into twocategories.One consists of hydrogen peroxide sen-sors prepared by immobilizing a kind of peroxidaseonto a suitable solid support[1,2 ] ,and the immo… 相似文献