一株氨氧化菌的分离鉴定及其活性影响因子分析

从浙江舟山南美白对虾养殖池塘底泥样品中筛选到一株具有氨氧化功能的细菌,命名为AOB-1.菌株AOB-1好氧,革兰氏阴性,球状至短杆状;菌落呈淡黄色、干燥、针尖状.16S rDNA序列分析表明,该菌株与Nitrosomonas eutropha C91T的相似性为100%.氨氧化的关键酶--氨单加氧酶的基因（amoA）序列比对表明,该菌株与N.eutropha C91T的相似性为98%.在30℃,100r·min-1时,25～200mL培养基装量范围内装液量越少氨氧化率越高,最适pH值为8.氨氮浓度在1～200mg·L-1范围内,氨氧化速率随氨浓度的升高而加快;在200～1200mg·L-1范围内,氨氧化速率基本保持不变;但当氨氮浓度高达2000mg·L-1时,氨氧化活性受到明显抑制.菌株AOB-1不仅对养殖水体,而且对高浓度氨氮废水的处理也具有潜在的应用价值.     

龙须菜的无菌处理及其典型附生菌的分离鉴定

采用不同浓度的氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素以及放线菌酮单独及组合处理龙须菜, 利用16S rRNA基因序列和ITS序列对分离到的细菌和真菌进行分子鉴定, 比较获得无菌龙须菜的最佳抗生素处理方法. 结果表明: 100μg?mL-1氯霉素、100μg?mL-1氨苄青霉素及50μg?mL-1放线菌酮组合使用抑菌效果最好. 并从龙须菜的培养液中分离鉴定出4株细菌, 分别为鲁杰氏菌属(Ruegeria)、单胞菌属(Alteromonas)、Maribacter属和Fluviimonas属, 1株真菌为Urocystales或Fereydounia属, 其中鲁杰氏菌为龙须菜附生细菌的优势菌群.     

棉浆黑液生物处理系统中嗜碱细菌的多样性

以棉浆黑液为细菌分离培养基,从某化纤厂黑液生物处理系统中分离到16株嗜碱细菌,对其形态及生理生化等特征的研究结果表明,所分离的嗜碱细菌以产芽孢的革兰氏阴性细菌占优势,在个体形态和生理生化特性方面具有丰富的多样性.扩增rDNA限制性分析(ARDRA)结果表明,棉浆黑液中的嗜碱细菌分为2大类群,不同菌株之间的酶切图谱具有较大的差异.测定黑液生物处理系统中6株占优势的嗜碱细菌的16S rDNA序列,与国际上已报道的细菌的16S rDNA序列进行比较,结果表明:它们的序列与芽孢杆菌属(Bacillus)或副球菌属(Paracoccus)中的参比菌株的同源性达到98%以上.以16S rDNA序列为基础的Bacillus属嗜细菌的系统发育分析结果显示,其中3个菌株与B.halodurans和B.wakoensis的相似性大于99%.     

宁波陆源入海排污口优势菌群的数量、组成分析与研究

研究了宁波地区海域2011年3月、5月、8月、10月的排污口污水水体中可培养细菌的数量、组成及其分布, 探讨了优势菌群与当地环境的相关关系. 结果表明: 各地区细菌分布各月份性差异明显, 5月份、8月份细菌数量明显高于3月与10月, 其均值数量级能达到106 cfu?mL-1; 象山、余姚地区排污口细菌数量高于奉化、宁海、北仑地区, 细菌数量最高均值为8月份象山地区排污口(4.7×106cfu?mL-1). 优势菌群分布具有季节性分布特征: 3月份特有优势菌群为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)与海单胞菌属(Marinomonas sp.); 5月份为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、海单胞菌属(Marinomonas sp.)与弧菌属(Vibrio sp.); 8月份为泛菌属(Pantoea sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、肠杆菌属(Enterobacter sp.); 10月份为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、希瓦氏菌属(Shewanella sp.). 多维尺度分析表明: 临近海域类型与排污口类型为排污口细菌群落变化的两个关键因素.     

基于高通量测序的鄱阳湖浮游细菌多样性分析——以康山、梅溪、星子、南矶乡和吴城为例

湖泊生态系统在区域和全球生物化学循环中起着至关重要的作用。细菌是生物地球化学循环的主要贡献者,参与淡水中大部分有机物质的分解,对维持生物多样性和湖泊生态系统的稳定性也十分重要。鄱阳湖是中国最大的淡水湖,为了解鄱阳湖浮游细菌群落的多样性,我们以2014年6至9月期间,在鄱阳湖周围5个地方:康山、梅溪、星子、南矶乡和吴城采集水样,提取了浮游细菌的DNA,采用16SrRNA基因高通量测序的方法,然后使用Illumina MiSeq系统对其进行测序。以97%的一致性将序列聚类成为OTUs(Operational Taxonomic Units),总共分配得到22884OTUs。我们结合GreenGene数据库对OTUs进行物种注释,在门的水平上我们获得排名前10的菌门分别为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、绿菌门(Chlorobi)、浮霉菌门(Planctomycetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、蓝细菌门(Cyanobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、蓝菌门(Thermi)、绿弯菌门(Chloroflexi)。绿弯菌门和绿菌门一般存在于湖泊底泥的生境中,目前它们已经在湖泊细菌群落中占据一定的优势了。在相对丰度前10的菌门中存在三种光合自养菌门,分别是绿弯菌门,绿菌门和蓝菌门。同时我们对数据的进一步处理还获得相对丰度10前的菌属它们分别为浮霉菌属(Planctomycs)、黄杆菌属(Flavobacterium)、原绿球藻菌属(Prochlorococcus)、新鞘脂菌属(Novosphingobium)、Hydrocarboniphaga属、气氨微菌属(Aeromicrobium)、红长命菌属(Rubrivivax)、多核菌属(Polynucleobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、草酸杆菌属(Oxalobacter)。意料之外的是原绿球藻菌属,它一般处于海洋生境中,在淡水湖泊中很少被发现。另外还注意到新鞘脂菌属和Hydrocarboniphaga属,也被发现在前10的菌属中,这表明鄱阳湖也许面临着烃类污染的威胁。这些结果对进一步了解鄱阳湖水生生态环境具有非常重要的意义。     

微生物对造纸循环水中DCS的控制作用研究

通过涂布分离法从造纸废水中分离并筛选出4株对造纸废水中溶解和胶体物质(Dissolved and colloidal substance,DCS)具有较好去除效果的微生物.经16SrDNA序列比对及系统发育分析鉴定,1,3和4号菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus),2号菌株属于假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas).通过SBR反应器的连续运行发现,4株复合菌株能在反应器中稳定存活,且对造纸废水中的CODCr、DCS、DS去除率分别保持在60%,42%和40%左右,表现出良好的协同作用.实验表明,该4株菌株是去除造纸废水中DCS物质的良好菌种.     

中华鳖温和气单胞菌病的病原研究

从表现为背腹甲及四肢出现疖疮、裙边糜烂的患病鳖的心血、肝脏及腹腔液中分离到 NL、Nb1和Nb2 三株细菌 .经菌体形态特征、培养特性和生理生化特性测定 ,均鉴定为温和气单胞菌 ( Aeromonassobria) .小白鼠感染试验显示三株菌均有毒力 ,用 9× 10 8CFU/m LNL 菌株进行人工感染 30～ 4 0 g健康鳖 ,发病率为 10 0 % .从感染鳖的肝脏中分离到与原分离株形态及生理生化特性相同的菌株 .用 NL 菌株制备的抗血清分别与 Nb1和 Nb2 菌株进行玻板凝集试验 ,能发生明显的凝集反应 .药敏试验结果表明 :三株细菌对菌必治、头孢氨噻肟、头孢羧甲噻肟均呈高度敏感     

池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)血淋巴的抗菌力、溶菌酶和酚氧化酶活力

通过分光光度法对池蝶蚌的抗菌力,溶菌酶和酚氧化酶活性进行了分析.结果表明,经嗜水气单胞菌感染后,池蝶蚌对这两种细菌的抗菌力分别为0.61±0.01 U和0.14±0.02U;所有实验组对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均无抑制效果.随着年龄的增长,溶菌酶活性也显著增加,第4龄蚌的溶菌酶活力可达0.93±0.05U,比1龄蚌的酶活力高一倍左右;十二烷基磺酸钠(SDS)能够激活酚氧化酶(PO)酶原系统,2龄前,酚氧化酶活力逐渐增强,3龄和4龄逐渐减弱,2龄蚌的PO活性最高,为22.70±4.39 U.研究表明,池蝶蚌血淋巴中免疫因子的种类和表达活性在个体不同发育阶段中呈现出差异,推测可能与水体环境对蚌的作用有关.     

嗜盐古菌Haloterrigena thermotolerans JCM 11050Tbop基因序列研究

对标准菌株Haloterrigena thermotolerans JCM 11050^T，其编码螺旋C至螺旋G的细菌视紫红质（bacteriorhodopsin，BR）蛋白基因（bop基因）片断采用PCR方法进行了扩增，TA克隆并测定了其核苷酸序列．对翻译出的氨基酸序列进行亲水性分析，表明该菌株的BR蛋白与已报道相应序列具有类似的二级结构．蛋白序列聚合比对结果表明，该菌株BR蛋白与Natrinema属的BR蛋白具有一定相似性．在这一Haloterrigena属的标准菌株中证实bop基因，进一步丰富了bop基因资源．     

液相氨氧化法一步合成间甲苯甲腈

在非溶剂系统中采用液相氨氧化法，对一步合成间甲苯腈进行了研究．结果表明，催化剂的组成n(Co)：n(Mn)：n(Ni)=1：1．397：0．016，催化剂用量为5g，原料摩尔比n(空)：n(氨)=6：1，反应温度为190℃，反应压力为0．5MPa为较适宜的反应条件．在该条件下反应10h，产率为16．5％，选择性可达100％。     

一株光合细菌的分离及其硫化物的处理效果

从宁海东坝养殖场底泥中分离获得一株光合细菌,通过纯化和初步鉴定,得知该菌株是一株隶属于外硫红螺菌属的紫色硫细菌（Ectothiorhodospira sp.）.该菌株能以S、Na2S2O3和Na2S等多种含硫化合物作为无机电子供体.不同废水中硫化物处理效果的研究显示,该菌株处理高浓度硫化物的效果较为明显,其对畜禽废水和鱼粉废水中硫化物的去除率可分别达到68.55%和56.15%.     

用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究

从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌DNA,以其为模板,针对其16Sr RNA基因及23Sr RNA基因而设计合成了两对引物并分别进行了PCR扩增,扩增产物的2%琼脂糖凝胶电泳结果显示,硝化细菌DNA模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Marker）的电泳结果,被扩增的DNA条带大小分别约为400bp和730bp．实验结果表明PCR 技术可用于污水中硝化细菌的快速检测．     

用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究

从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌ＤＮＡ,以其为模板,针对其１６ＳｒＲＮＡ基因及２３ＳｒＲＮＡ基因而设计合成了两对引物并分别进行了ＰＣＲ扩增,扩增产物的２％琼脂糖凝胶电泳结果显示,硝化细菌ＤＮＡ模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Ｍａｒｋｅｒ）的电泳结果,被扩增的ＤＮＡ条带大小分别约为４００ｂｐ和７３０ｂｐ．实验结果表明ＰＣＲ技术可用于污水中硝化细菌的快速检测     

江西7种蛇类基于16S rRNA基因的DNA条形码构建

采用新设计CO1、16S、CR3种线粒体基因(位点)的简并引物,对江西地区常见蛇类(2科6属7种)共20个个体样本进行了DNA条形码分析的初步尝试,将实验结果结合GenBank部分蛇类序列数据分析表明,在本实验涉及的蛇类个体及类群的识别上,16S rRNA基因片段合乎通用条码标记的序列的要求;且本实验设计的16S简并引物有适用性强、宽容度大的优势.其次,本研究结果支持"16S rRNA基因至少应该作为脊椎动物标准条码标记--线粒体COI基因不可缺少的补充"观点;提示当前对DNA条形码在不同生物类群的应用方面,尚待在更大的标本样品数量及更多不同基因片段序列数据的支撑.     

两栖类小鲵科不同属多个体DNA指纹图谱分析及其分类问题探讨

利用寡核苷酸探针LZF-1对小鲵科三个不同属12个标本和一个东方蝾螈标本进行了DNA指纹图谱分析,同时结合它们的形态性状从分子水平上研究这些物种的亲缘关系,并对巴鲵(Liua)的分类地位等问题进行探讨.结果表明,小鲵属(Hynobius)与北鲵属(Ranodon)亲缘关系更近,与山溪鲵属(Batrachuperus)则相距更远;山溪鲵属较小鲵属、北鲵属更进化.巴鲵与山溪鲵属亲缘关系较北鲵属更为接近,因此巴鲵不应归入北鲵属,巴鲵属为有效属称更为合理.     

酵母菌-SBR系统处理高含油废水中曝气时间优化

在酵母菌-SBR系统处理高含油废水过程中,研究了不同曝气时间与污染物降解效果、溶液pH、Zeta电位、氮磷利用率以及酵母絮体粒径的关系,确定了系统运行的适宜曝气时间为8～12h;在此条件下100d的连续废水处理实验获得了高效、稳定的运行;通过对表观、实际油去除率以及反应过程中酵母絮体粒径的变化分析,表明了酵母菌降解高含油废水过程包括快速吸附、降解及稳定化3个阶段．     

GC-MS分析印染废水处理中有机污染物的降解特性

印染废水水量大、成分复杂、污染物浓度高,属于难处理的工业废水之一.以浙江某污水处理厂各处理单元废水为研究对象,应用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析了印染废水处理中有机物的降解过程.结果表明,初沉池、二沉池、终沉池水样中分别含有50、40、30种有机物,其中三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷等8种有机物属于环境优先控制污染物;筛选出苯乙酮、三氯甲烷、2-氯-2-甲基丁烷等5种物质作为印染废水的特征污染物.该结果对印染废水的处理与回用具有重要的意义.     

甜菜糖蜜酒精废液生产菌体蛋白饲料初探

甜菜糖蜜酒精废液含有大量的有机物，pH值低，BOD、CDO值高，直接排和会造成环境的严重污染，又损失了一些有机物，在此废液中可直接接入酵母菌，使其大量繁殖，生产出的菌体粗蛋白含量达41．7％，CDO值降低了20％以上，减轻了环境污染。     

稻属核糖体DNA的限制性片段长度多态性

对稻属13个种和Porteresiacoaretata、Leersiaperrieri及Leersiatisseranti共42份材料进行了核糖体RNA基因（rDNA）的间隔序列长度多态性（RFLP）的分析．共发现20种的间隔序列长度变异类型,其中有些类型具有种的特异性．中国药用野生稻的rDNA变异程度很小,疣粒野生稻的rDNA有变异．Leersiaperrieri和Leersiatisseranti的BamHI酶切转录区片段长度为3．90kb,与稻属的3．80kb．不同．