稻瘟菌产孢和生长基因的鉴定

利用稻瘟菌131株系的一个突变体H6鉴定出一个控制产孢和生长的基因,突变表型测定结果表明H6为产孢缺陷兼生长缓慢型突变体。Southern 分析表明,此突变是由转化质粒单拷贝插入的结果。将H6与相反交配型蓖株1528有性杂交,分离出21个子囊孢子,突变表型与野生表型比例为1：1,表明此突变表型由单基因控制,潮霉素,抗性与突变表型共分离表明外源质粒手稿到基因的编码区,通过质粒拯求获得插入位点侧翼基因组序列,部分测序和同源性比较显示其与其他已经报道的基因没有同源性。     

稻瘟菌REMI突变体库的构建

以稻瘟病菌菌株P131和Y34为材料，利用REMI技术构建了含有8000个转化体的突变体库．对REMI转化的部分条件进行了优化，比较了不同限制性内切酶(XhoI、ApaI和EcoRV)之间REMI转化效率的差异．结果表明，稻瘟菌分生孢子在摇培32h和Drisdase消化菌丝2h或3h时较适宜REMI转化；XhoI和ApaI之间没有明显差异，而两者的转化率高于EcoRV．     

稻瘟菌侵染对水稻细胞骨架排列方式的影响

采用免疫荧光技术成功检测到水稻叶鞘内表皮细胞中微管和微丝的分布情况.稻瘟病菌的侵染使水稻叶鞘内表皮细胞中微管、微丝排列方式发生明显的改变,这种排列方式的改变非常灵敏,且在亲和性互作和非亲和性互作之间差异明显.非亲和性互作反应中,病菌侵染早期微管、微丝均放射状向病菌侵染点分布,至寄主细胞产生过敏性坏死时,逐渐受到破坏而降解.亲和性互作反应中,微管、微丝在病菌侵染的早期则已开始降解,形成短棒状或点状结构,比较均匀地分布于整个细胞,病原菌侵染菌丝在寄主细胞中扩展时,难以观察到完整的微管、微丝.     

贵州省稻瘟病菌对春雷霉素和稻瘟灵的抗药性监测

采用生长速率法分别测定2013年从贵州省不同3个稻区分离的30个稻瘟病菌株,并测定分离出的菌株对稻瘟灵与春雷霉素的敏感性及抗药性水平。实验结果表明:春雷霉素、稻瘟灵对供试30个稻瘟病菌株的EC50值范围分别为1.60⁶.42μg/mL,1.936.42μg/mL,1.93⁶.26μg/mL,其平均值分别为3.69μg/mL,3.54μg/mL,且敏感菌株都为30个,都没有抗性菌株,表明贵州省稻瘟病菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性均表现为较低水平。从菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性分析表明贵州省稻瘟病菌对春雷霉素与稻瘟灵未产生交互抗药性或多抗性。     

应用溴甲酚紫指示剂检测贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性

采用加溴甲酚紫生长速率抑制法测定采自于贵州省的63个稻瘟病菌株对稻瘟灵的敏感性.结果表明:稻瘟灵作用一定时间后,在含有指示剂和稻瘟灵的培养基中稻瘟病菌饼周围呈现的颜色跟稻瘟灵的浓度有一定的关系,在4μg·mL-1以下呈现出紫色且颜色的深浅随着稻瘟灵浓度的增加而逐渐变淡,4μg·mL-1处呈现橙红色,此浓度下稻瘟灵对稻瘟病菌的抑制率可达到80%左右.贵州省三地稻瘟病菌对稻瘟灵的EC50值为1.41~6.26μg·mL-1,稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感基线定为3.283 33μg·mL-1,大部分稻区的稻瘟病菌株均表现为敏感或低抗水平,同时三地稻瘟病菌对稻瘟灵的抗性水平存在一定程度上的时空差异.     

稻瘟灵防治稻叶瘟的试验

1987年春,我们于南滨农场进行不同剂量的稻瘟灵防治稻瘟病的田间试验,供试品系为不育系珍汕97A;试验结果:每次每亩100g 稻瘟灵防治效果较好,防效达66.84%.     

西藏地区牦牛源沙门菌分离鉴定、血清分型及致病性研究

本研究旨在了解西藏地区牦牛源沙门菌流行情况、分布情况和血清型种类.通过采集西藏全区七地市牦牛腹泻粪便,利用细菌培养特性、生化特性和分子生物学方法对样品中细菌进行分离鉴定,再根据血清特异性凝集对分离菌株进行血清分型,最后利用动物感染试验和动物组织HE染色法了解菌株致病性强弱.结果表明：西藏全区共分离出50株沙门菌,检出率为25.13%（50/199）.其中,拉萨、昌都和山南三地分离率相较于其他四地较高,阿里地区分离率最低;血清型分型结果显示,共分离出B群、C1群、C2群、D群4种血清群,包含都柏林沙门菌、伤寒沙门菌、阿邦尼沙门菌等血清型共18种血清型.按血清群统计结果显示,4种血清群中,以D群所占血清菌株最多,为常见血清群;50株沙门菌种以都柏林沙门菌为优势血清型,占所有菌株的20.00%（10/50）;从各地区沙门菌分型结果显示,各地区所占血清群、血清型数量均不相同.致病性试验结果显示：牦牛源都柏林沙门菌感染KM小鼠的LD₅₀为0.368×10⁸CFU/mL,属强致死性菌株;组织HE染色观察结果显示牦牛源都柏林沙门菌可引起宿主全身性损坏,其中...     

江西地区鼠源致病性钩端螺旋体菌的分离纯化与鉴定

目的对江西地区钩端螺旋体菌进行分离纯化与鉴定,为后期建立江西地区钩端螺旋体菌的发病模型提供菌源。方法通过捕捉钩端螺旋体疫源地的储存宿主——褐家鼠,无菌操作摘取肾脏,将肾脏接种到EMJH培养基中培养、纯化菌株。对纯化后的钩端螺旋体用钩体外膜脂蛋白LipL32基因引物进行PCR检测以鉴定菌株,并对分离菌对金黄地鼠的致病性进行了研究。结果分离纯化到一株钩端螺旋体菌,PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与钩端螺旋体菌FDAARGOS 2 03基因序列（Gen Bank登录号:CP020414. 2）同源性为100%。分离菌对金黄地鼠具有一定的致病性。结论我们成功从江西地区储存宿主褐家鼠肾脏中分离到一株具有致病性的钩端螺旋体菌株。本次研究为以后分离纯化钩端螺旋体菌累积了宝贵的经验,通过收集江西省内流行的钩端螺旋体菌型,为钩端螺旋体菌的发病模型提供菌源,并以此为基础,研发出可靠的临床早期诊断产品,以期达到有效控制江西省地区钩端螺旋体病的目的,降低公共卫生隐患。     

有机磷降解菌的分离筛选及初步鉴定

目的:从不同根系土壤分离筛选高效降解有机磷的细菌.方法:通过平板法进行初筛,根据水解圈直径和菌落直径比值大小筛选到水解圈直径和菌落直径比值较大的菌株,进一步通过液体摇瓶培养复筛,对其解磷能力进行了测定,并通过形态特征、生理生化特性和16 S rDNA序列测定等一系列试验时其进行鉴定.结果:分离纯化出10株解磷菌,经平板...     

A Gγ subunit promoter T-DNA insertion mutant――A1-412 of Magnaporthe grisea is defective in appressorium formation, penetration and pathogenicity

Heterotrimeric G-proteins consisting of α, β and γ-subunits are essential for the transduction of ex- tracellular signals to various downstream intracellular effectors in eukaryotes. Previous studies showed that Gα and Gβ were involved in regulating     

稻瘟病生防菌有效作用成分的分析

对稻瘟病桔抗细菌—短小芽孢杆菌(Bacillus Pumilus)的发酵液在260nm和280nm下进行吸光度测定，结果表明，发酵液中蛋白质含量明显高于对照中蛋白质含量；发酵液和对照液中分别加入1．71mol/L硫酸铵，经3000r／min离心30min后得沉淀，再经SDS—聚丙烯酰胺段胶垂直电泳分析，初步测定发酵液中新产生3种多肤物质；发酵液经胰蛋白酶和100℃高温处理后，对稻瘟病菌分生孢子的萌发率明显减弱，上述结果表明，稻瘟病桔抗细菌有效作用成分为多肽类物质。     

稻瘟病菌限制酶介导整合(REMI)转化的致病性诱变

应用提高直菌转化率的技术－限制酶介质整合（restriction enzyme mediated integration,REMI)技术转化稻瘟病菌株Magnaporthe grisea131原生质体，在限制酶HindIII,KpnI介质下转化效率化效率分别提高6.5,10,3.7倍，通过300μg/mL潮霉素筛选获得1000个以上转化子，用突变体接种水稻鉴别品种，发现其中M25和M36与M131比较其致病性发生了改变，另外还发现产孢缺陷型变体和培养性状发生改变的突变菌株，rep-RCR试验表明REMI突变菌株由于质粒插入而与M131指纹有差异。     

Magnaporthe oryzae MTP1 gene encodes a type III transmembrane protein involved in conidiation and conidial germination

In this study the MTP1 gene, encoding a type III integral transmembrane protein, was isolated from the rice blast fungus Magnaporthe oryzae. The Mtp 1 protein is 520 amino acids long and is comparable to the Ytp 1 protein of Saccharomyces cerevisiae with 46% sequence similarity. Prediction programs and MTP1-GFP （green fluorescent protein） fusion expression results indicate that Mtp 1 is a protein located at several membranes in the cytoplasm. The functions of the MTP1 gene in the growth and development of the fungus were studied using an MTP1 gene knockout mutant. The MTP1 gene was primarily expressed at the hyphal and conidial stages and is necessary for conidiation and conidial germination, but is not required for pathogenicity. The Amtpl mutant grew more efficiently than the wild type strain on non-fermentable carbon sources, implying that the MTP1 gene has a unique role in respiratory growth and carbon source use.     

氢气机循环的热力学分析及其变化特征

对氢发动机各过程进行了热力学分析,建立了氢气机循环的数学模型并进行了计算机模拟,结果表明,氢气机有良好的燃烧特性和散热条件,其热效率与常规燃料相当,当过量空气系数在合适的范围内变化时,发动机可以正常工作,正确地选择压缩比是发动机正常工作的必要保证。     

一个水稻抗纹枯病突变体的遗传分析及其基因的初步定位

高水平抗纹枯病突变体和高感纹枯病品种蜀恢881杂交构建分离群体,经F2分离世代的遗传分析,抗、感单株比例符合3 1(χc2=0.563,χ12,0.05=3.84),初步确定该突变体对纹枯病的抗性由一对显性主效基因所控制,命名为Rsb-2(t)。利用已合成的530对微卫星引物,对抗纹枯病突变体和蜀恢881进行多态性引物筛选,用多态性引物对上述F2分离群体的全部感病单株和部分抗病单株的DNA进行PCR分析,借助MAPERMAKER/EXP3.0软件,对其微卫星标记实验数据进行连锁分析,将Rsb-2(t)定位于第3染色体的p臂,发现RM218、RM251、RM4321和RM5748与Rsb-2(t)连锁,它们均位于着丝粒端,连锁距离分别为32.1 cM,41.1 cM,42.4 cM和49.7 cM。研究结果为进一步对该基因的精细定位奠定了基础。     

10株葡萄源丝状真菌分离鉴定及其致病力分析

采用组织分离法从京郊地区腐烂的葡萄果实及葡萄叶上分离到10株丝状真菌,其中从腐烂的葡萄果实中分离到3株丝状真菌,命名为814#、815#和880#;从葡萄叶上分离到7株丝状真菌,命名为794#、797#、798#、811#、902#、903#和1397#。结合形态学特征及真菌rDNA ITS区序列分析结果,菌株814#为茎点霉(Phoma sp.),菌株815#为刺孢曲霉(Aspergillus aculeatus),菌株880#为灰葡萄孢(Botrytis cinerea),菌株794#为日本曲霉(Aspergillus japonicus),菌株797#为粉红单端孢(Trichothecium roseum),菌株798#为大蒜盲种葡萄孢(Botrytis porri), 菌株811#为果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola),菌株902#为链格孢菌(Alternaria eichhorniae),菌株903#为芬芳镰孢菌(Fusarium redolens)和菌株1397#为脉孢菌(Neurospora terricola),其中A. aculeatus、A. japonicus、C. fructicola、A. eichhorniae、F. redolens和N. terricola未见在葡萄上分离到的报道。将10株丝状真菌分别接种到健康的葡萄、圣女果、苹果和梨果实上,B. cinerea、A. japonicus、A. aculeatus、T. roseum、B. porri、C. fructicola、A. eichhorniae和F. redolens均可使4种果实发病,其中B. cinerea、A. japonicus、B. porri和F. redolens致病力较强;而Phoma sp.和N. terricola只能使葡萄和圣女果发病。     

黑木耳激光诱变及营养缺陷型突变体筛选

利用 He- Ne激光和 YAG激光照射黑木耳担孢子诱发突变 ,共获得 14株营养缺陷型突变菌株 ,并用生长谱法和营养物逐个减少法对缺陷型类型进行了鉴定。实验结果表明 ,利用激光技术诱发黑木耳突变效果良好 ,其突变频率 (0 .0 5～ 0 .19)比传统的紫外线法明显提高。     

一株拟南芥镉敏感突变体的筛选及表型分析

利用不同浓度梯度的CdCl2对拟南芥Col-0生态型进行处理,确定了筛选镉敏感突变体的适合浓度为90μmol/L.以镉对幼苗根长生长抑制程度为指标,对拟南芥化学诱导激活标签(XVE)T-DNA插入突变体库种子进行筛选.首先在不含有雌激素的1/2MS培养基进行大规模筛选,挑选根长抑制明显的植株,单株收取种子.在T3代复筛过程中用含有浓度为90μmol/L CdCl2的1/2 MS固体培养基筛选到一株敏感突变体csr-2.并进行了雌二醇诱导过表达表型验证.运用TAIL-PCR技术确定该植株的T-DNA插入位点位于At2g36130,并对该基因的序列进行了初步的生物信息学分析.     

利用转录组测序分析大豆矮小突变体中差异表达基因

植株高度是影响农作物产量的重要性状,本实验以大豆矮小突变体为研究材料,发现GA3处理可以部分恢复其矮化表型。为了探究其至矮的分子机制,运用RNA-Seq技术测序分析了野生型和突变体的转录组差异,结果表明有多个与植物激素相关的基因差异表达,其中Glyma19g01590与植物激素GA调节有关,生物信息学分析表明差异表达基因Glyma19g01590的开放阅读框有594 bp,推测编码198个氨基酸,该蛋白具有GASA(Gibberellic Acid-Stimulated in Arabidopsis)保守区域,GASA保守区域与GA调节有关。半定量RT-PCR实验表明Glyma19g01590在突变体中的表达水平明显高于野生型,qRT-PCR实验表明Glyma19g01590在突变体的表达量大约是是野生型的24倍。根据以上结果推测Glyma19g01590基因是导致大豆矮小表型的因素之一。