漆树漆酶催化氧化对苯二胺反应的微量热法研究

在厌氧条件下，０．１ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝７．４）中，用微量热法测定了２９８．１５Ｋ时漆树漆酶与对苯二胺反应的摩尔反应焓ΔｒＨｍ＝－１６３．３６±０．３６ｋＪ／ｍｏｌ，米氏常数Ｋｍ＝５．５８×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和表观一级反应速率常数ｋ１＝８．６３×１０－３ｓ－１，及此条件下用对苯二胺作底物时的漆酶活性值ＥＡ＝０．０４５ＩＵ．还利用阿伦尼乌斯经验公式计算了该反应的表观活化能，并讨论了酶－底复合过程的结合能ΔＧ０的计算．     

漆酶催化二氰基氢醌类化合物反应的微量热研究

用微量热法测量了30℃、pH为4.0时漆酶与底物2,3-二氰基-5,6-二氯-1,4-苯二酚、2,3-二氰基5,6-二溴-1,4-苯二酚、2,3-二氰基-5,6-二碘-1,4-苯二酚催化反应的米氏常数K_M,速率常数k,结合能△G_0和活化自由能。同时计算了漆酶与2,3-二氰基-5,6-二氯-1,4-苯二酚在30℃、pH=4.0时的反应活性。对实验结果进行了讨论。     

NaN3抑制过氧化氢酶反应的微量热法研究

利用微量热法研究了过氧化氢酶反应及NaN3 对该反应的抑制动力学 .在 310 .15K、0 .1mol·L-1的Na2 HPO4 NaH2 PO4缓冲体系中 ,用初始速率法测定过氧化氢酶反应的表观二级反应速率常数kcat为 7.32× 10 6L·mol-1·s-1,与文献结果相符 .NaN3 对过氧化氢酶的抑制是非竞争性可逆作用于原酶和活性中间体———化合物Ⅰ的综合结果 ,抑制剂的半抑制浓度I50 为 8.5 1× 10 -6mol·L-1.     

漆酶的活性测定及催化单取代Fc—R氧化反应

在二乙二醇单丁醚（ＤＧＢＥ）／磷酸盐缓冲液体系中，以二茂铁（Ｆｃ—Ｈ）为底物，用分光光度法测定湖北毛坝漆树漆酶的活性无副产物干扰．该方法简便、准确、易行．考察了漆树漆酶对２９个单取代二茂铁衍生物（Ｆｃ—Ｒ）和左旋多巴的催化氧化反应，发现了漆酶１４个新的底物，并讨论了它们的构效关系     

微量热法研究Na+,K+-ATPase酶促反应

首次用微量热方法研究了Na^ ,K^ -ATPase催化ATP水解的酶促反应，在310．15K，PH＝7．4的100mmol.L^-1Tris-HCl,100mmol.L^-1NaCl,10mmol.L^-1KCl,3mmol.L^-1MgCl2缓冲溶液环境下，用对比进度法得出了Na^ ,K^ -ATPase酶促反应的米氏常数Km值和最大反应速率Vm值，所得常数值与文献给出的相符，并用比色法得出了一致的Km和Vm值，同时初步研究了酶预稀释对酶促反应的影响。     

漆树漆酶的催化氧化作用——Ⅷ.四卤代氢醌的漆酶催化氧化

在静止条件下,对四卤代氢醌(TXQH_2,X=Cl、Br、I)的漆酶催化氧化行为进行了考察。结果证明,四卤代氢醌的酶反应具有几个明显特征:1)一级离解种是底物参与反应的必要形式;2)半醌自由基阴离子是反应的产物;3)半醌自由基经歧化转变成相应的对醌;4)整个反应过程呈现出连串反应属性。这些特征反映了漆酶催化氧化反应的共性。结果还表明,由于卤原子的吸电子作用不强,不能使自由电子有效地离域,生成的半醌自由基寿命短,衰减快;但在二甘醇存在下,可以有效地延缓半醌自由基的衰减,实现提高半醌自由基动力学稳定性的目的。     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅸ．含叔丁基的儿茶酚类底物的漆酶催化氧化

用分光光度法对６个含叔丁基的儿茶酚类底物在不同ＰＨ条件下的离解和漆酶催化氧化行为进行了考察，测定了它们在ＰＨ８．０时的反应速度常数．结果表明，叔丁基的疏水性较好地适应了漆酶对底物疏水程度的要求，使这类底物更容易为漆酶所包结；漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子所提供的ｐＨ环境和质子转移作用，促进了这类底物的离解，使这类底物能在远低于其一级离解所需ｐＨ的环境中进行反应．速度常数数据显示，取代基的疏水作用和取代基参与双齿配位的能力是影响这类底物反应速度的主要因素；在叔丁基的存在下，取代基的电子效应对这类底物的反应速度的影响变得不明显．     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅵ．漆酶的催化氧化反应机理研究

在静止条件下，用分光光度法研究了底物２，３－二氰基－５，６－二卤氢醌（ＤＤＸＱＨ２，Ｘ＝Ｃｌ，Ｂｒ．Ｉ）的漆酶催化氧化反应，考察了底物离解与反应的关系，考察了半醌自由基的形成和衰减动力学，测定了不同ｐＨ条件下的表现反应速度常数（ｋｏｂｓｄ）、米氏常数（ｋｍ）、半醌自由基的形成速度常数（ｋｆ）和半醌自由基的衰减速度常数（ｋ２ｄ），探讨了环境对半醌自由基形成与衰减的影响，鉴定了反应最终产物的结构．结果证明：１）、底物的一级离解种是底物参与反应的必要形式；２）、半醌自由基阴离子是酶反应的直接产物；３）、半醌自由基的衰减是非酶的歧化反应，４）、由酶反应和非酶反应两部分构成的反应全过程是通过半醌自由基的形成和衰减作纽带联系着的，两个反应部分既独立又偶联，表现为一种特殊的连串反应属性．在此基础上，提出了邻、对苯二酚的漆酶催化氧化反应机理．     

漆树漆酶的催化氧化作用 Ⅶ．稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用

以５，６－溴－２，３－二氰基氢醌为底物，在ｐＨ４．０～６．０条件下，用分光光度法考察了稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用，探讨了抑制特征、抑制位点和作用方式．结果证明，稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制属竞争性抑制过程．稀土金属离子的抑制作用是通过它与漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子的配位相互作用实现的；在这种作用下，ω－羧基阴离子对废物酚羟基的氢键或碱催化作用被削弱，使田羟基中的氢以Ｈ＋方式离去的速度受到阻碍．在ｐＨ４．５条件下，Ｌａ３＋离子与ω－羧基阴离子配合反应的解离常数（Ｋｉ）经测定为２．４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１．研究表明，漆酶分子中的酸性氨基酸残基对于酶－底物复合物的形成及进一步反应，尤其是酚羟基中氢的离去起着十分重要的作用．     

细胞动力学研究Ⅴ.细胞连续增长热动力学

用微量热法测定了布鲁氏菌Ｍ５（５５０１０）和８３－９８１在２７℃和４０℃时的生长发热功率曲线．由这些生长发热功率曲线，建立了细胞有限条件下连续增长热动力学方程：ｌｎ（Ｐｍ／Ｐｔ－１）＝ｌｎ（Ｐｍ／Ｐ０－１）－ｋｔ从而求出了细菌的生长常数ｋ．这个方程非常适合“Ｓ”型的生长发热功率曲线     

生物热化学系统的微量热方法研究 Ⅱ.微量热法研究稻种萌发过程

用自行研制的微量热装置测定了稻种萌发的全热谱,由此得到了稻种萌发各产热阶段的热数据,并对不同谱线作了比较和讨论。     

外显子拼接法合成真菌灵芝漆酶基因cDNA

为真菌漆酶基因cDNA的克隆提供了一种简便快速的新方法．从含有内含子的灵芝漆酶基因出发，采用外显子拼接PCR方法，合成了灵芝漆酶的cDNA．设计了10对引物分别经PCR扩增该基因的10个外显子，引物设计使前一个外显子的下游引物与下一个外显子的上游引物都有一段同源匹配序列，然后通过两两片段混合作为模板PCR扩增得到两两拼接的外显子片段，再将得到的5个片段前两个混合，后3个混合分别作为模板扩增获得拼接好的外显子1～4大片段和外显子5～10大片段，最后将这两个大片段混合作为模板扩增得到拼接好的全长cDNA序列．与常规方法相比，该方法既避免了RNA的操作，又不用摸索酶表达的条件，可以和基因组步行技术结合快速获得真菌漆酶基因的cDNA．     

F-对小白鼠红血细胞代谢影响的微量热法研究

用LKB2277生物活性检测系统研究了用含不同量NaF饮水喂养的小白鼠红血细胞的代谢.实验结果表明,其代谢产热曲线形状相似,单个细胞发热功率和平均产热150×10-6g@mL-1组＞正常组＞50×10-6g@mL-1组;产热曲线测定完毕后的样品ATP浓度分析表明,系统中的ATP浓度随饮水中NaF浓度增加而减小,以正常组为最大.从理论上对上述实验结果进行了探讨.     

微量热法研究富勒烯衍生物对HL-60细胞代谢

用微量热法研究了两种水溶性富勒烯衍生物对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系的作用,发现除０．５ ｍ ｇ／ Ｌ富勒烯衍生物（ Ｉ）对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系有抑制作用以外,其它富勒烯衍生物对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系的生长代谢有促进作用     

主曲线法研究亮氨酸热失重动力学

在不同升温速率条件下采用热重法(TG)研究了亮氨酸的热失重过程,得到了动力学三因子;用等转化率法求得了表观活化能Ea=(137.95±2.66)kJ.mol-1;用主曲线法确定了亮氨酸热失重过程的最可几机理函数G(α)为一维相边界反应函数,G(α)=α;再由Ea和G(α)求得指前因子ln(A/s-1)=23.81±0.10.经红外光谱分析和对比观察实验证明,该失重过程实际上是亮氨酸的升华过程.     

微量热法研究D－氨基葡萄糖西佛碱及其配合物对细菌的作用

用微量热法研究了Ｄ－氨基葡萄糖西佛碱ＳＧ及其配合物对金黄色葡萄球菌的作用．发现不同化合物对金黄色葡萄球菌的作用效果不同，其效果为：Ｚｎ（Ⅱ）－ＳＧ＞Ｃｕ（Ⅱ）－ＳＧ＞Ｃｏ（Ⅲ）－ＳＧ＞ＳＧ（配体），半抑制浓度Ｃ１／２依次增大．不同化合物作用下其代谢热谱有所不同，说明与细菌作用的方式也不同．     

微量热法研究石英粉尘对肺泡巨噬细胞的损伤作用

利用ＬＫＢ２２７７生物活性检测仪测量了豚鼠肺泡巨噬细胞的离体代谢情况，并且研究了石英粉尘对肺泡巨噬细胞的损伤作用．结果表明，微量热法可以有效地应用于毒理学的研究     

等温滴定量热法测定脲酶催化尿素水解反应动力学

采用等温滴定量热法研究脲酶催化尿素的水解反应（尿素浓度147mmol·L^-1,脲酶浓度3．0×10^-7mmol·L^-7,pH=7．0磷酸缓冲溶液）动力学,测定了该反应在298．15～318．15K温度范围内的反应速率常数kcat和米氏常数Km等动力学参数．结果表明：在实验条件下,脲酶催化尿素的水解反应符合Michaelis-Menten机理;温度对kcat的影响遵循阿累尼乌斯方程,袁观活化能为16．6kJ·mol^-1;等温滴定量热法可有效地用于酶催化反应动力学参数的测定,是具有应用前景的研究酶活性的方法．     

产漆酶真菌筛选、鉴定及酶促去除苯酚的条件优化

以愈创木酚为底物,从自然环境中成功筛选到一株高产漆酶的粗毛革孔菌(Coriolopsis gallica)NCULAC F1。对其漆酶诱导表达条件进行探究,结果表明,9种芳香化合物对NCULAC F1表达漆酶均无显著诱导作用(P>0.05);而硫酸铜具有显著诱导作用(P<0.05),且硫酸铜与2,6-二甲基苯酚具有显著的协同诱导作用(P<0.05);最佳协同诱导条件下,摇瓶发酵5 d漆酶活力达11.29 U·mL-1,比未添加任何诱导剂的对照组显著提高了138.69%(P<0.05)。提取纯化漆酶,进一步探究漆酶对苯酚的去除效果,结果表明,酶促去除苯酚的过程遵循Michaelis-Menten动力学模型,R2为0.984 3,km为52.45 mg·L-1,Vmax为181.82 mg·L-1·h-1;最佳催化条件为温度70℃,pH 6.0,加酶量5 U·mL-1,介体2’2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)浓度0.6 mmol·L-1,在此条件下,10 min内苯酚去除率达100%。研究结果为粗毛革孔菌漆酶的高效生产和在酚类污染物控制方面的应用提供了理论参考。     

限制酶Bsp63 I的化学修饰与抑制动力学研究

经亲和层析得到Ｂｓｐ６３Ｉ．用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶的巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明：这些基团均与该酶活性有关．动力学研究表明磷酸吡哆醛对酶的抑制是一种类反竟争性抑制．