氨基酸氧化反应的动力学研究

利用紫外吸收光谱谱法研究了α－氨基酸与Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）进行氧化反应的动力学，结果表明：反应对ＮＢＳ为一级，对α－氨基酸为正分数级，准一级反应速率常数ｋｏｈａ随（ＯＨ＾－）增加而降低，离子强度及扩散效应对反应无影响，提出了反应的可能机理，导出的速率方程圆满地解释了实验现象，并且计算出了速控步的速率常数、前期平衡常数等动力学参数。     

微板式化学发光酶免疫分析法测定人血清中癌胚抗原

采用辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺(luminol)-H2O2化学发光体系,建立了一种测定人血清中癌胚抗原(CEA)的高灵敏度、高特异性、简便快速的微板式化学发光酶免疫分析方法。对免疫反应条件、酶结合物稀释度、发光反应时间、封闭液等进行了考察和优化。采用双抗体夹心法,室温静置1h,洗涤后加入100μL发光底物液,10min后检测。该方法的线性相关系数为0.9998;最低检出限为0.57μg/L;批内和批间变异均在10%之内;低、中、高3个不同浓度值样品的平均回收率分别为107.4%、93.3%和104.5%。使用本方法与进口发光试剂盒对40份人血清样品进行测定,结果表明,本方法显示了良好的相关性,其相关系数为0.9115。表明本分析体系稳定可靠,可用于商品化诊断试剂盒的开发和应用。     

人血清中cTnI的化学发光酶免疫分析研究——实验条件的优化

采用高效化学发光试剂3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-羟基)苯-1,2-二氧杂环丁烷磷酸(AMPPD)作为检测底物, 并将传统的ELISA两步双抗夹心法改为一步法, 得到了高灵敏测定人血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)的化学发光酶免疫分析优化条件. 采用单因素变化法和方阵滴定法得到的最佳实验条件为: 捕获抗体包被浓度为10.0 μg/mL, 以pH=7.0的PBS作为免疫反应缓冲底液, 以含质量分数为1.0%的BSA pH=9.6的碳酸盐溶液缓冲液, 于4 ℃封闭过夜, 生物素-检测抗体(Biotin-IgG2)以及碱性磷酸酶-亲和素(ALP-Avidin)结合物均采用1:2000稀释度, 免疫反应条件为37 ℃, 孵育时间60 min, 以去离子水作为洗涤剂, 以1:100稀释的AMPPD作为发光反应底物, 发光反应时间10 min(37 ℃). 检出限为0.02 ng/mL, 比现行ELISA法灵敏度提高一个数量级; 测定周期约75 min, 比两步法ELISA快得多; 线性范围(0.04~36.20 ng/mL)比ELISA法扩宽了两个数量级; 加标回收率97.5%~102.8%, 对标准样品的测定结果与用ELISA法的测定结果吻合; 重复性好, 3个样品批内变异系数均小于8.5%(n=12).     

含氨基酸单元的手性主体的合成及手性识别研究

以L-丙氨酸和2,7-二萘酚为原料通过简单的方法合成了二种带有荧光基团萘的手性阴离子主体(1和2), 用红外光谱、质谱、元素分析、核磁共振氢谱及碳谱表征了它们的结构. 用荧光光谱及核磁共振氢谱研究了主体与二苯甲酰酒石酸阴离子的相互作用, 结果表明1, 2与D-或L-二苯甲酰酒石酸阴离子均形成1∶1的配合物, 主体1展现出良好的对二苯甲酰酒石酸阴离子对映选择性识别能力.     

微板式化学发光酶免疫分析法临床测定人血清中孕酮

将抗兔IgG(即二抗)物理吸附于聚苯乙烯微孔板上作为通用固相,通过免疫反应制备固相抗体。采用辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,建立了一种高通量、简便、快速的化学发光酶免疫分析方法用于临床测定人血清中的孕酮。对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、发光底物选择、发光反应时间及温育条件等进行了考察和优化,最终选定的实验条件:孕酮抗体和HRP标记物的最佳稀释度分别为1∶100000和1∶15000;选用Ⅱ号发光底物,发光反应10min后测定;37℃水浴条件下温育1h。对建立的方法进行了评价。该方法的灵敏度为0.08μg/L;批内和批间相对标准偏差均在15%之内;低、中、高3个不同浓度值样品的平均回收率分别为101%、101%和94.4%(在87.8%～108%之间)。使用本方法和经典的放射免疫法同时对36份人血清样品进行测定,结果显示,本方法与放射免疫分析方法相关性良好,其相关系数为0.9502。     

人血清中脂肪酸的GC-MS分析

血清中的脂肪酸组成及其含量变化是评价机体脂肪酸摄入和能量代谢的重要指标.同时,随着生命科学技术的不断发展,各种脂肪酸与人体健康的关系也逐步明晰,尤其是多不饱和脂肪酸,已被证实与免疫、心脑血管、生殖、内分泌、消化等系统密切相关[1-2].     

手性识别及氨基酸类手性固定相的研究进展

近年来, 手性识别更加凸现出极其重要的现实意义, 而作为分离手性分子应用的手性固定相自然引起了大家的关注．立足于国内外手性固定相的研究成果, 介绍了手性固定相及其分类, 并重点综述了基于氨基酸的手性固定相的发展及其制备方法. 同时, 简要介绍了作为手性固定相对不同异构体的识别机理.     

Kalman滤波用于酶反应动力学的研究

采用卡尔曼滤波研究酶反应动力学及分析，依据酶存在下过氧化氢放出氧的反应建立了扩展Ｋａｌｍａｎ滤波模型，用滤波处理确定了反应速率与起始速率浓度的关系，并估算出酶反应动力学参数Ｋｍ。     

RP-HPLC测定人血清中黄连素浓度

运用反相高效液相色谱法测定了人血清中黄连素浓度。以改性甲醇为流动相,检测波长为３４７ｎｍ,外标法定量,线性范围为０．２～２．０ｍｇ／Ｌ（ｒ＝０．９９９６）,平均回收率为９０．７３％,最低检测限２．５５ｎｇ,日内、日间误差均小于８％。方法灵敏、准确、快速,可用于药代动力学和药效学的研究     

反应萃取手性分离苯基琥珀酸对映体动力学研究

通过恒界面池研究了羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)萃取苯基琥珀酸对映体(PSA)动力学.采用伴随化学反应的萃取理论获得萃取动力学.实验分别考察了搅拌速率、界面面积、对映体浓度和萃取剂浓度等条件对PSA对映体萃取动力学的影响.实验结果表明:HP-β-CD萃取PSA对映体的反应为快反应;对对映体反应是一级反应,对萃取剂反应是二级反应;R-PSA,S-PSA反应速率常数分别为3.4×10-2m6mol-2s-1,9.96×103m6mol-2s-1.这些数据对萃取过程的设计是很重要的.     

人血清中雌三醇的磁性微粒子放射免疫分析法研究

在传统的放射免疫分析的基础上,以磁性微粒子为二抗分离剂和固相一抗为结合反应剂,建立了两种快速、超灵敏、简便的血清及其它样品中雌三醇含量的分析方法。雌三醇测定的曲线范围0.3~30μg/L;磁性微粒子二抗分离法批内和批间相对标准偏差分别为4.3%和8.7%;回收率为104%~114%;健全性为0.9989。磁性微粒子固相一抗法批内和批间相对标准偏差分别为4.4%和7.6%;回收率为96%~115%;健全性为0.9986。两种方法相比,磁性微粒子固相一抗法具有更为简便、快捷的优点。两种磁性微粒子的放射免疫分析不仅缩短了反应时间,其准确性和精密度也均满足临床及环境研究中的检验要求,且灵敏度较现有方法提高了一个数量级。     

手性氨基酸的制备及生物活性研究进展

综述了近年来手性氨基酸的制备方法及其生物活性，包括化学拆分法、不对称合成法、结晶法、微生物法、酶法、配位萃取法、膜拆分法以及色谱法等制备方法，还介绍了手性氨基酸作为手性药物的生物活性作用，并对其研究的前景进行了展望。参考文献42篇。     

表面等离子体共振技术用于蛋白对氨基酸手性识别的动力学研究

利用SPR技术,以牛血清白蛋白和溶菌酶为探针构筑手性识别传感膜,开展了对L-和D-苯丙氨酸以及L-和D-色氨酸手性识别的动力学研究。实验结果表明,两种蛋白在与每种氨基酸分子的L-和D-型异构体相互作用过程都存在明显的动力学差异。动力学数据进一步显示两种蛋白与每种氨基酸L-型异构体的亲和力均大于D-型。     

基于链状氨基酸N-手性季铵盐合成中的取代反应研究

手性季铵盐作为相转移催化剂(Phase-transfer catalysts ,PTC) 能使非均相反应在温和条件下进行,操作简单,反应速率加快,产率明显提高,因此这一技术在有机合成中具有广泛的应用.这些季铵盐主要是以金鸡钠生物碱衍生的[1,2],近年来出现了一些其它类型的季铵盐[3],但是它们的制备一般比较困难,大多数催化效果不是很理想;并且这些季铵盐的结构有一定局限,改造比较困难.同时这些季铵盐大都是 C-手性的,很少有N-手性的[4,5];在以前的不对称反应中,有意识地构建N-手性季铵盐及N-手性在不对称反应中的作用鲜有报道[6].     

微孔板化学发光酶免疫分析法分析人血清中游离前列腺特异性抗原

建立了一种定量分析人血清中游离前列腺特异性抗原(f-PSA)的高灵敏度微孔板化学发光酶免疫分析方法,以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为标记酶,4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基苯)-螺旋-(1,2-二氧杂环丁烷-3,2′-金刚烷)(4-methoxy-4-(3″-phosphate-phenyl)-spiro-(1,2-dioxetane-3,2′-adamantane),AMPPD)-ALP高灵敏的化学发光反应为检测体系,通过检测发光强度对人血清中f-PSA进行定量。对几种物理化学参数如温育时间、免疫反应步骤以及检测时间等进行了优化,采用了一步双抗体夹心法,37℃恒温静置温育2h,洗涤后加入50μL AMPPD,30~80min内检测。该方法线性范围为0.15~20μg/L,相关系数大于0.998;检出限可达0.01μg/L,批内和批间相对标准偏差(C.V.)均小于7%;回收率在88%~108%之间。对人体血清中共存的6种常见肿瘤标志物CA50、CA125、CA15-3、CA242、CEA和AFP的偶联反应进行考察,特异性良好。为了验证该方法用于商业试剂盒的可行性,在4℃和37℃条件下分别进行了3d,5d,7d的稳定性考察,其线性相关系数仍均大于0.998,相对标准偏差小于6%。对98例实际血样进行测定,并与进口试剂盒(Monobind.USA)作临床比对,相关性良好。这些结果均表明,该分析体系稳定,可靠,可以用于商业化试剂盒的开发,在临床分析人血清中f-PSA的辅助诊断前列腺癌方面具有很高的应用价值。     

手性氨基酸的毛细管电泳拆分研究

以咔唑-9-乙基氯甲酸酯（CEOC）作柱前荧光衍生试剂,在毛细管区带电泳和胶束电动色谱条件下,以不同配比的β-环糊精（β-CD）和脱氧胆酸钠（SDC）作手性选择剂,在两种不同分离模式下,对氨基酸衍生物进行了手性分离,同时对分离过程中的相关参数进行了优化,分别实现了8种和10种氨基酸的快速手性分离。     

流动注射化学发光分析法测定人血清中白蛋白的研究

本文对人血清中白蛋白的鲁米诺-K3Fe(CN)6化学发光反应体系进行了较系统的研究。考察了流速、发光试剂浓度、pH值以及增敏剂等对人血清白蛋白分析检测的影响。在优化的实验条件下,测定人血清中白蛋白的线性范围为1.2×10-11~4.4×10-8mol/L,R2=0.9942;方法的检出限(S/N=3)为1.2×10-11mol/L;回收率范围为90.75%~103.5%,本法对2.9×10-8mol/L的标准样品平行重复12次测定,其相对标准偏差为3.5%。     

固相萃取-离子色谱-积分脉冲安培法测定人血清中游离氨基酸

比较了磺基水杨酸和无水甲醇沉淀人血清中蛋白质的效果,优化了国产732型阳离子交换树脂进行固相萃取净化的条件和Dionex-600离子色谱分析系统的梯度淋洗条件。用该离子色谱仪检测了谷氨酰胺等14种氨基酸,结果表明,峰面积-浓度的校正曲线的相关系数为0.9900~0.9995,检出限为0.02~0.59mg/L;峰面积的相对标准偏差为1.9%~10.4%;回收率为80.6%~114.8%。     

动力学分析方法检测酶反应活性中间体的研究

提出了一种检测酶反应活性中间体的动力学新方法，利用中间体的反应活性，加入合适的竞争剂使中间体在转化产物的同时能与竞争剂反应，监测中间体与竞争剂反应的动力学过程的以获得中间体信息，该法既能研究自由基中间体，也能研究非自由基中间体，便于研究快反应和跟踪动态过程，用该法对辣根过氧化酶催经过氧化氢氧化去甲肾上腺素的中间过程进行了研究。     

ICP－MS分析人血清中微量元素

用ＩＣＰ－ＭＳ分析人血清中２２种元素。为克服基体抑制效应。采用内标元素Ｓｃ和Ｉｎ分别校正质量数８０以下和８０以上元素的测定，获得满意的结果。通过对牛血清标准物质的测定，检验分析结果的准确性和方法的可靠性。