金属硫蛋白的聚合反应动力学

金属硫蛋白(Metallothionein,简称MT)是一类低分子量(哺乳动物MT的分子量为6500)、富含半胱氨酸(一般占氨基酸残量的30％)且具有高度可诱导性的金属结合蛋白。关于其结构与功能的研究是当今化学、生物学和临床医学等领域的重要课题之一。但是,有关各种生物MTs水溶液的热力学稳定性的研究尚未见报道。本文通过对在pH 7.40、4℃下放置不同时间的家兔肝脏(Cd,zn)_7MT水溶液进行HPLC分离,首次观察到MT在水溶液中的缓慢聚合现象,得到聚合反应的表观二级反应速率常数,发现MT-2比MT-1更易聚合。     

金属硫蛋白的分离与纯化

金属硫蛋白(MT)是一类低分子量、高巯基含量,能大量结合重金属离子的蛋白质.本文从诱导剂的注射次数、家兔体重以及不同诱导剂等因素对家兔体内金属硫蛋白含量的影响进行了分析.金属硫蛋白氨基酸组分分析结果与文献报道一致.利用精品生产工艺对金属硫蛋白粗品进行纯化,结果令人满意.     

金属硫蛋白溶液聚合状态的研究

通过动态光散射实验首次证明了兔肝金属硫蛋白亚型 和 在不同的缓冲体系中不仅仅是以二聚体的形式 ,而且是以多种聚合形式存在[1] .深入考察金属硫蛋白在溶液中的聚合形式对于研究金属硫蛋白的结构和功能都具有非常重要的意义 .我们通过计算机模拟 [1] 比较系统地研究了各种因素对金属硫蛋白聚合的影响 .结果表明 ,在溶液聚合的分子识别过程中可由多种因素共同调控金属硫蛋白 ,这些因素主要包括静电相互作用、疏水性相互作用和溶液中阴阳离子等 .通过这些因素的综合分析 ,首次对兔肝金属硫蛋白在溶液中多种聚合形式的形成机制及相应的分子…     

兔金属硫蛋白的分离与纯化

兔皮下注射ＣｄＣｌ２诱导金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ），取肝脏匀浆，用乙醇─氯仿混合液萃取后经ＳｅｐｈｄｅｘＧ－５０柱分离，得到混合型ＭＴ．进一步用纤维素弱碱性阴离子交换树脂进行拆分，并在ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱上脱盐，得到ＭＴ－１和ＭＴ－２两种亚型．经氨基酸组咸、凝胶电泳及ＨＰＬＣ柱层析等分析表明，所得的两种亚型具有高度的均一性．     

三种金属硫蛋白聚合物静电效应的研究

考察了三种金属硫蛋白(大鼠金属硫蛋白亚型II,兔肝金属硫蛋白亚型I和兔肝金属硫蛋白亚型II)的单体、二聚体和三聚体在pH为5.6-8.5和10.6两种缓冲条件下的静电势分布。其中大鼠金属硫蛋白亚型II的结构直接来自于晶体数据,兔肝金属硫蛋白亚型I和II的结构则通过同源蛋白模型搭建。三种金属硫蛋白的静电势通过有限差分方法求解Poisson-Boltzmann方程得到。对于三种金属硫蛋白的二聚体,pH为5.6-8.5时,单体和单体之间的静电势分布具有明显的互补性;但pH≥10.6时,这种互补性会大大削弱。对于三种金属硫蛋白的三聚体,单体和二聚体之间主要表现为静电排斥,而且pH在10.6下的静电排斥力明显强于pH为5.6-8.5时的静电排斥。     

金属硫蛋白聚合中阳离子作用机制的研究

蛋白质数据库 (ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ,ＰＤＢ)中有大鼠及几个其它种属动物的金属硫蛋白的结构 ,但其中只有大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ的晶体结构是完整的单体［１］,核磁共振溶液构象均只是金属硫蛋白被蛋白酶降解后的单一α或 β结构域．从大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ的晶体结构的堆积形式上看 ,二聚体可能是晶体生长过程中最小的堆积单元 ,因此Ｒｏｂｂｉｎｓ和Ｓｔｏｕｔ等人认为 ,大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ分子在溶液中也是以二聚体形式存在［２］．在晶体生长过程中 ,蛋白质在溶液中的构象会直接影响晶体的堆积．因此 ,对于大鼠金属硫蛋白…     

银诱导大鼠肝脏金属硫蛋白的提纯与鉴定

Ｗｉｓｔａｒ公鼠经腹腔注射ＡｇＮＯ３后可诱导肝脏合成ＭＴ。经匀浆、乙醇沉降、Ｓｅｐｈａｄｅｘ－７５、ＤＥＡＥ－５２两次柱层析，可得到两个亚型。原子吸收测定结果表明：该蛋白分别含７份Ａｇ、２份Ｚｎ和２份Ｃｕ，具有与Ｃｄ５Ｚｎ２－ＭＴ并不相同的二级、三级结构。进一步研究表明，蛋白中伴随Ｃｕ和Ｚｎ的含量与所用诱发剂的种类、数量均有关，且Ｃｕ和Ｚｎ（通过ＭＴ）具有某种微妙的联系。     

锌金属硫蛋白预防甲基汞对细胞膜损伤作用的实验研究

不同剂量的Ｚｎ可以诱导小鼠肝脏产生ＺｎＭＴ,随着实验组Ｚｎ剂量的增加,肝脏内ＺｎＭＴ的含量也相应增加,呈剂量效应增加（ｒ＝０．９９６）。ＺｎＭＴ具有保护膜构象、膜ＳＨ基、拮抗ＭｅＨｇ对膜流动性及膜通透性的损伤作用。本实验结果为ＺｎＭＴ预防甲基汞中毒提供了科学依据,同时显示了诱导ＺｎＭＴ的锌剂量要适当,过高则有毒性作用。     

钴(Ⅱ)与金属硫蛋白的反应

研究了Ｃｏ（Ⅱ）和金属硫蛋白反应的动力学，发现反应分三段进行，由此得到了不同条件下各段对应的假一级反应速率常数。假设金属硫蛋白中每个金属结合２０／７个ＳＨ基团，用盐酸滴定ＣｏＴｈ（ｔｈｉｏｎｃｉｎ）和Ｃｏ７Ｔｈ，根据它们的紫外光谱特征波长处吸收值降至５０％时的ＰＨ，分别又得到它们的表观平均稳定常数。     

线扫极谱法快速测定金属硫蛋白

本文报道了用线扫极谱法快速测定动物组织（肝，肾等）中金属硫蛋白方法。动物组织经匀浆，加热，离心后浆上清液直接加入钴氨缓冲液中，记录扫描图谱，由－１．４６Ｖ（ｖｓ．ＳＣＥ）左右处峰高求得金属硫蛋白浓度，并与常用的镉／血红蛋白饱和法进行了比较，本法显示了可靠，快速，和适用范围广之特点。     

锌,镉及金属硫蛋白在大鼠前列腺的定位研究

测定了Wister大鼠前列腺不同部位锌、镉含量，发现背侧叶、背前叶及腹叶含锌量依次为890．0±80．2、294.0±32.5和35.8±6．7μg／g干组织，含镉量依次为0.257±0．030、0.128±0．012和0．060±0．009μg／g干组织。各叶之间锌含量有显著性差异（P＜0.01），镉含量的差异具有统计学意义（P＜0．05），而且各叶中锌的含量明显高于镉。免疫组化测定将金属硫蛋白定位于腺体上细胞核和细胞液中，各叶均为阳性，其强度依次为背侧叶最强，背前叶其次，腹叶最弱，与锌、镉分布一致。     

金属硫蛋白对铅的细胞毒性和免疫毒性的保护作用

金属硫蛋白（ＭＴ）是一类低分子量富含巯基的非酶蛋白，其结构特殊。ＭＴ具有重金属解毒作用和对生物体所必需的微量元素储存、运输、调节作用，还具有增强机体应激能力，拮抗电离辐射，清除自由基等重要生物学功能。本文主要论证ＭＴ与重金属铅对机体的细胞毒性和免疫毒性的保护作用。     

The Glutathione/Metallothionein System Challenges the Design of Efficient O2-Activating Copper Complexes

Copper complexes are of medicinal and biological interest, including as anticancer drugs designed to cleave intracellular biomolecules by O₂ activation. To exhibit such activity, the copper complex must be redox active and resistant to dissociation. Metallothioneins (MTs) and glutathione (GSH) are abundant in the cytosol and nucleus. Because they are thiol-rich reducing molecules with high Cu^I affinity, they are potential competitors for a copper ion bound in a copper drug. Herein, we report the investigation of a panel of Cu^I/Cu^II complexes often used as drugs, with diverse coordination chemistries and redox potentials. We evaluated their catalytic activity in ascorbate oxidation based on redox cycling between Cu^I and Cu^II, as well as their resistance to dissociation or inactivation under cytosolically relevant concentrations of GSH and MT. O₂-activating Cu^I/Cu^II complexes for cytosolic/nuclear targets are generally not stable against the GSH/MT system, which creates a challenge for their future design.     

Kinetic Studies on Ligand Substitution Reactions of Metallothioneins with DTPA and EDTA

Cd, Zn-thionelns were isolated from the rat liver by improved Winge method and purified further. The composition was determined. The mobilization of Cd ions from the Cd, Zn-metallothioneins was studied with spectrophotometric method. The results show that the reaction of DTP A or EDTA with Cd, Zn-thioneins occurs through three steps. The first step follows pseudo-first order reaction with association mechanism. The formation constants and the dissociation rate constants of the relevant intermediate ternary complexes and apparent rate constants, Kapp were determined. The properties and structure of Cd, Zn-thioneins and ligands with low molecular weights affect the values of Kapp.