酵母质粒的快速提取法

早期制备酵母2μm质粒的方法多是采用机械破碎细胞,所得到的质粒DNA中含染色体DNA碎片较多,得率也不高。Cameron和Devenish采取碱裂解法要求严格控制溶液pH值在12.45,因之不易操作,使此法运用受到限制。近年来,有人采用先提取酵母总DNA,再以酸酚法抽提质粒,仍然要求严格地保持提取液的pH值。用微量快速提     

一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法

依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.     

质粒DNA快速提取法

介绍了一种质粒ＤＮＡ的快速提取方法，所分离出的ＤＮＡ纯度较好，全部操作均在一只Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中进行，含质粒ＤＮＡ的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。此法操作简便，整个提取过程只需３０ｍｉｎ便可完成。     

基因重组质粒稳定性与苯丙氨酸发酵的研究

本研究应用具有苯丙氨酸生产基因 pheA~(FR)、aroF~(FR)、CI_(857) 的质粒 pSY130～14和质粒 pS Y16,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的新质粒 pSY200-14。然后,使其转化到大肠菌 AT2471中,育成了基因重组菌株 AT2471/pSY200-14。试验表明,新菌株质粒稳定性比原菌株有较大的提高。在2. 5升通气搅拌罐进行苯丙氨酸发酵试验,在搅拌转速850rpm、通气速率1. 0VVM,38. 5℃和 pH7. 0的条件下,发酵48小时苯丙氨酸生成量达14. 2g/L,比原菌株 AT2471/pSY130-14增产11. 8%。     

结合PCR扩增快速筛选鉴定重组质粒

针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆（重组质粒），本在实验室研究的基础上，创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法，用和Triton裂解液裂解菌落，离心后上清作为模板，再用特异引物进行PCR扩增，2h就可以得出结果，本方法具有节约省时，重复性好，结果直观，准确等优点，这为从事分子生物学研究的实验室快速筛选阳性克隆提供了方便。     

重组质粒pPAHD1的限制性内切酶图谱分析

本文对我们构建的含有青霉素酰化酶(Acylace)基因的重组质粒pPAHD1进行了限制性内切酶图谱的测绘。使用了限制酶14种,证明BglⅡ,SalⅠ,SmaⅠ和BamHⅠ在重组质粒上各有切点一个;EcoRⅠ有切点两个:HindlⅡ,AvaⅠ各有切点三个;PvuⅠ有切点四个;EcoRⅤ和XmnⅠ各有切点五个。     

一种快速简单的质粒DNA纯化方法

文中介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ的方法，这种称之为万能微量制备（ＴｈｃＭａｇｉｃＭｉｎｉｐｒｅｐｓ）ＤＮＡ纯化系统在质粒ＤＮＡ纯化过程中不用有机溶剂抽提和乙醇沉淀，而用一万能微柱吸附质粒ＤＮＡ，吸附上的质粒ＤＮＡ可用于水或ＴＥ缓冲液洗脱出来，且不含任何盐或主同分子杂质，纯化的质普ＤＮＡ不需进一步处理即可直接进行ＤＮＡ顺序测定和限制性内切酶消化，整个过程可在１５ｍｉｎ内完成，不失为一种简单可靠的     

质粒DNA提取方法的研究进展

目前质粒DNA的提取方法有很多,本文综合阐述及比较了几种方法的利弊,试验证明异丙醇提取法所得质粒DNA浓度和纯度都很高,简便、快速,重复性好,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要,适合大多数实验室使用。     

多糖的提取、分离纯化及分析鉴定方法研究

详细介绍了动植物多糖的常见提取、分离纯化方法的最新研究进展,并比较了各种方法的优缺点．每种方法都有各自的优缺点,在提取时应根据所选材料的性质选用不同的方法,有些方法在一定的条件下可与别的方法协同作用,并对糖的含量测定及分析鉴定方法的研究进展作了概述．     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化

采用肝素-sepharose亲和层析和SephadexG-100凝胶过滤层析法,从含haFGF基因重组体的大肠杆菌菌体中分离纯化得到人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)。SDS-PAGE,IEF电泳检测均为单一谱带。HPLC层析显示单一蛋白峰,SDS-PAGE测定rhaFGF分子质量为16.67ku,IEF测定等电点pI为4.8,并用Edman降解法测定了N-末端氨基酸序列,Balb/c3T3细胞培养法测定纯化的rhaFGF生物活性ED50为6μg/L,表明其对细胞分裂有明显促进作用。     

TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定

为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT—NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT—NEP1—40转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT—NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31．59％,纯化后目的蛋白纯度达95．6％,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT—NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT—NEP1—40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。     

鸭肝金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

以信阳华英鸭为材料,用ZnSO4诱导其肝脏合成金属硫蛋白(MT),将鸭肝材料经Sephadex G-50柱层析和DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱层析2次分离纯化,得到Zn-MT,该MT由61个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量约为28%,分子量6.5 KD.鸭肝Zn-MT产率为0.57 mg/kg鲜肝重,在220 nm有吸收峰.     

生物碱的提取与分离纯化技术

生物碱是广泛存在于自然界天然植物中的碱性含氮有机化合物。大多数生物碱具有显著的生理活性。是许多药用植物的有效成分。利用现代分离技术把生物碱从天然产物中分离出来并对其进行纯化,对于开发其药用价值,以满足天然药物和天然保健品日益高涨的社会需求,促进中药走向世界,提高天然产物的经济和社会效益均具有非常重要的意义。主要对生物碱的提取、分离纯化及分析检测技术研究进展进行综述。     

百日咳杆菌LPF和FHA的纯化及其特性的研究

采用羟基磷灰石、HP—Sepharose 4B和Sephadex G—200色层分析方法,精制出了单一的白细胞增多促进因子(LPF)和丝状血凝素(FHA)组分.经SDS—PAGE证明,精制LPF呈现四条带,其分子量分别为30,000、27,000、23,000和14,000;精制FHA呈现三条带,其分子量分别为185,000、130,000、105,000.ELISA检测证明,精制LPF为620EU/mL,精制FHA为402EU/mL;小鼠LP和HS活性测定结果证明,0.136μg的精制LPF可引起白细胞的明显增高,0.015μg可引起HS活性,0.29μg可引起组胺致敏小鼠50%的死亡;CHO细胞簇聚活性检测结果显示,3.3pg的精制LPF可引起CHO细胞明显的簇聚反应;免疫双扩散试验结果显示,精制LPF和FHA分别与其相应的抗LPF和抗FHA血清形成特异性的沉淀线;电镜结果显示,精制LPF呈直径约6nm的球形颗粒;精制FHA呈2×40—100nm的丝状结构.     

细菌视紫红质的分离提纯及鉴定

报道了在实验室进行大规模连续的嗜盐菌的培养方法和细菌视紫红质分离提纯技术。经表征证明，采用离心法即可制备细菌视紫红质纯品。     

玉米超氧化物歧化酶(SOD)的分离及纯化

用硫酸铵分级沉淀、葡萄糖凝胶过滤及离子交换柱层析从玉米中分离纯化SOD,并采用考马斯亮蓝G-250法测蛋白含量,NBT光还原法测定SOD酶活性,得到酶比活力为115.522U/mg.Pr,回收率为1.02%,提纯倍数7.77的SOD.同时进行了蛋白染色、SOD酶活性染色及非变性凝胶电泳(PAGE)研究,得到了电泳均一的SOD酶.     

狗脑抗吗啡镇痛肽“60a”的分离纯化及部分一级结构

本实验室从正常狗脑中又分离获得一个暂称这为“６０ａ”的肽。冻干粉经ＳｅｐｈａｄｅｒＧ－５０和羧甲基纤维素ＣＭ２２柱层析，再经反相高效液相层析纯化得最后样品，经ＳＤＳ电泳和等电聚焦电泳鉴定均为一条带，分子量约８０００，等电点在ｐＨ７．８左右；Ｎ－末端氨基酸为Ｍｅｔ；自Ｎ－末端的部分氨基酸序列为：Ｈ２Ｎ－Ｎｅｔ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｌｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｔ