径向离子交换色谱柱在生物工程产品下游纯化中的应用

 ]本文利用我们自行研制的径向离子交换色谱柱，对人血浆成分、登革病毒单克隆抗体及基因工程产物A蛋白及人白介素-2进行了分离纯化结果表明，以上目标产品均可得到有效的分离，它在流速、处理量方面均优于传统的色谱方法。由于其体积小，易于放大，不失为一种理想的生物工程产品中试至生产规模的初级分离纯化方法。     

混合抗体的亲和色谱分离策略

乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体,但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似,分离难度很大。本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析,并在此基础上制定了新型分离策略,采取Protein A亲和色谱和免疫亲和色谱来解决混合抗体的分离问题,并讨论了色谱洗脱模式对分离效果的影响。结果表明,Protein A亲和色谱结合梯度洗脱可以有效地纯化得到混合抗体,但是难以彻底分离重组人抗体和牛抗体;相比之下,使用Protein A亲和色谱结合置换色谱模式可以更加高效地分离混合抗体,最终可以得到纯度高达95%以上的重组人抗体,回收率可达95%以上。免疫亲和色谱同样可以有效地分离纯化重组单克隆抗体,且其通用性更强,可以应用于任何动物乳腺表达重组人抗体的分离纯化中。     

生物化学中应用的离子交换介质简介

一、前言以间歇操作及色谱操作的离子交换技术是生物化学中重要的分离方法之一。与凝胶渗透法、分配色层法、亲和层析及电泳柱等方法相比,离子交换技术最主要的优点是具有较高的交换吸附容量及分离容量。自八十年代以来离子交换色谱得到高速发展,已工业规模用于分离、纯化产品~([1,2])。     

专利

二维色谱多通道分离纯化装置及方法属于化工领域,本发明为解决传统色谱分离纯化技术中上样量少、柱填充物消耗大、洗脱时间长、洗脱剂用量多以及分离纯化的单体目标产物低的问题。本发明装置包括中央分配器、物料罐、流动相罐、固定相罐、压力泵、检测器和n个色谱柱。方法步     

胰岛素反相制备色谱的方法开发

以胰岛素反相制备色谱方法的开发和优化为目标,通过考察色谱保留参数、峰展宽及样品流出曲线的浓度分布等色谱参数,对流动相梯度、色谱填料、载样量等色谱条件进行了优化,并建立了胰岛素制备色谱峰参数的描述方法。结果表明,所建立的方法可快速筛选出最适于胰岛素分离的色谱条件(包括流动相梯度及分离填料),即流动相中的强洗脱溶剂(有机相)需采取缓梯度窄区间的变化条件,筛选出的分离填料需具备峰向两侧展宽且展宽程度较小、样品最高浓度居中分布的特点。将方法用于实际胰岛素粗品的纯化制备,获得了杂质去除效果好、胰岛素纯度高的产品。该法为胰岛素反相色谱纯化制备方法的快速建立提供了指导,具有较强的实用价值,同时为发展大分子化合物的制备色谱方法提供了参考。     

高效液相色谱在生物医药研究中的应用第三讲蛋白质的反相高效液相色谱分离

近十年来,高效液相色谱(HPLC)在蛋白质分离纯化方面取得了很大的进展,并得到了广泛的应用。HPLC包括排阻色谱、离子交换色谱、亲和色谱、疏水反应色谱以及反相色谱等,几乎已在蛋白质分离各种传统方法中得到应用。这些方法在蛋白质分离中各有其地位,但到目前为止人们普遍认为反相高效液相色谱(RP-HPLC是分离纯化蛋白质的最有效的方法     

分析型色谱饼对人血清白蛋白的快速纯化

采用分析型色谱饼对标准蛋白混合物进行了分离,结果表明装填有小颗粒填料的色谱饼在高流速条件下仍然具有良好的分离能力。在较大流速(5 mL/min)条件下,在10 min内对人血清白蛋白样品进行了快速纯化,其纯化后的人血清白蛋白的纯度大于85%,回收率为65%,说明分析型色谱饼可以用于快速分离纯化生物大分子。     

亲和色谱纯化超螺旋质粒DNA的研究进展

非病毒载体质粒DNA已被广泛应用于基因治疗和DNA疫苗,目前迫切需要开发其大规模制备和分离纯化方法。亲和色谱是一种高分辨率、高选择性的分离技术,在蛋白质、抗体、核酸等生物大分子的分离纯化方面显示了良好的应用前景。本文综述了亲和色谱技术在超螺旋质粒DNA分离纯化中的研究进展,总结了各种亲和色谱方法分离超螺旋质粒DNA的机理和优缺点,并展望了亲和纯化技术在质粒DNA生产和制备中的应用前景。     

超大孔离子交换制备色谱分离纯化高活性凝血因子VIII

建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子VIII(FVIII)的纯化工艺。基于FVIII和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺。分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳)。结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FVIII产品。FVIII在超大孔制备色谱过程中的回收率(85%)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg。此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1 mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性。本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产。     

微波辅助提取-高速逆流色谱联用方法及其装置

本发明公开了一种微波辅助提取一高速逆流色谱联用方法及其装置,首先采用微波辅助提取模式提取物料;然后提取液浓缩预分离;最后通过高速逆流色谱纯化制备得到目标组分或分析天然产物提取液中的目标组分;上述步骤通过接口及转换控制实现微波辅助提取、分离、纯化、高速逆流色谱制备或分析的集成在线。本发明集提取、分离、纯化、制备或分析于一体,具有快速高效、高选择性的特点,实现天然产物快速高效的在线提取分离、纯化制备或分析,在食品、医药以及生物等领域有广泛的应用前景。     

从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白

为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶 排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高 效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定。经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99%,含量为1.328 g/L。     

牛胰腺中活性蛋白质的液相色谱分离纯化方法进展

牛胰腺中含有多种活性蛋白,其中许多蛋白已被开发为有利于人类健康的药物。从牛胰腺中分离纯化得到的蛋白药物是一种有高附加值的高技术产品。现代生物技术中所用的大多数有价值的活性蛋白产品的制备仍然依赖于不同的液相色谱法。本文综述了牛胰腺中活性蛋白质的提取方法以及以色谱分离为主的分离与纯化技术,为开展从天然产品中提取并应用蛋白质提供一定的参考。     

增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。     

生物碱的高效液相色谱分离分析与纯化制备研究进展

生物碱是天然产物中药用活性较好的一类化合物,在分离科学与技术领域,生物碱的分离一直是一个研究热点和难点问题。近年来,随着高效液相色谱填料和分离方法的发展,生物碱的分离分析和纯化制备有了长足的进步。该文主要针对碱性化合物的峰形拖尾问题,综述了高效液相色谱理论的发展和色谱分离技术的进步,以及近年来新型色谱填料和分离方法在生物碱分离分析和纯化制备中的应用,并对其前景进行了展望。     

大孔及涂敷硅球作基质的组氨酸拟亲和色谱纯化人免疫球蛋白G

研究用分子组氨酸和配体、大孔硅球为基质的拟亲和色谱分离纯化人免疫蛋白Ｇ（ＩｇＧ），认为键合组氨酸具有半抗原体质而与ＩｇＧ发生免疫亲和作用，以色谱组份重新进样验证了色谱柱对ＩｇＧ亲和专一性，并用包敷Ｄｅｘｔｒａｎ大孔硅球作基质的拟亲和色谱纯化人血清中的ＩｇＧ，减少了色谱峰拖尾，缩短了分离时间。     

制备性液相离心色谱

在有机合成及天然有机产物的结构鉴定中,分离纯化是一个经常遇到而必须解决的问题。各种色谱是进行分离纯化行之有效的方法。制备性液相离心色谱是近年来发展起来的一种新方法。由于仪器简单,使用方便,分离效果好,所以颇受欢迎。本文以Chromatotron7924型仪器(美国Harrison Research制造)为例,对制备性液相离心色谱作一简单介绍。一、原理和仪器装置。离心色谱除了吸附剂因素之外,主要是利用离心力来达到分离的目的。仪器主要由分离圆转盘,洗脱液装置和检测等部份组成。 1.分离圆转盘装置。固定薄层吸附相     

猪肝中单胺氧化酶B的分离纯化

依据单胺氧化酶B(monoamine oxidase B, MAOB)的疏水特性,建立了一种从猪肝中分离纯化MAOB的新方法。用含有1% Triton X-100的膜蛋白裂解液制备粗酶,以饱和度为20%～50%的硫酸铵反抽提进行粗提,再利用自制的配基密度为75.7 μmol/mL的苯基疏水色谱及Sepharose Q High Performance离子交换色谱进一步分离纯化,得到纯化倍数为18.2、酶比活为135 U/mg的MAOB。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示为相对分子质量约60 000的单一蛋白质带。采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱对该酶进行鉴定,证实为MAOB。本研究所用分离纯化方法可以有效纯化MAOB, 为MAOB的深入研究提供技术支撑。     

分离蛋白质的高效离子交换色谱填料的研究(Ⅳ)──强阴离子交换色谱填料的合成及应用

含环氧基的硅胶与二乙胺或聚乙烯亚胺反应,其产物再与碘甲烷或氯化苄反应,得到含季铵离子的强阴离子交换色谱填料。该填料可用于蛋白质和生物工程产品(如基因重组人干扰素γ、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和人绒毛膜促性腺素等)的分离纯化。其中,环氧基硅胶与二乙胺加成后再用氯化苄季铵化的产物是较好的强阴离子交换色谱填料。     

基于高压制备液相的多维色谱技术在中药分离纯化中的应用

中药物质基础复杂,对其活性成分的分离一直是中药研究的难题.基于高压制备液相的多维色谱系统在高压制备液相色谱的基础上,结合了多种分离技术,极大地提高了色谱系统的分离性能和分离效率,更有利于对物质基础复杂的中药样品进行分离纯化.本文介绍了基于高压制备液相系统的多维色谱系统的基本原理、分离模式以及关键技术,并综述了其在中药分离纯化中的应用.     

低压柱色谱法分离神经节苷脂

神经节甘脂(Gangliosides,简称GLS)是含有唾液酸的一类鞘氨醇糖脂。在开展GLS的研究中,首先遇到的一个课题是如何用简便有效的方法获得纯的单一的GLS。柱色谱用于制备分离和纯化GLS是非常有效的方法。Momoi等人首先应用DEAE-阴离子交换树脂和硅胶双柱色谱,并采用梯度洗脱的方法,用于分离纯化GLS混合物,得到了G_(Ml)、G_(Dla)、G_(Dlb)和G_(Tlb)等纯品,该方法已被广泛采用。Hirabayashi等