大鼠骨髓间质干细胞的分离纯化与鉴定

采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞,差速贴壁法进行纯化,应用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等对纯化细胞进行鉴定,结果细胞表面抗原CD２９,CD４４,CD１０５,CD１６６表达呈阳性,而CD１４,CD３４,CD４５表达呈阴性。采用RT唱PCR鉴定了三个基因：nestin,NST,Oct唱４,前两者呈阳性表达,后者弱阳性表达。这些细胞特异抗原与基因表达综合起来,表明得到的细胞具备骨髓间质干细胞的特性。密度梯度分离与差速贴壁相结合,可获得较好均一性的骨髓间质干细胞,是一种简单可靠、易于推广的骨髓干细胞获取方法,可为细胞与组织工程研究提供种子细胞。     

大鼠骨髓间质干细胞的培养和生物学特征

为探索大鼠骨髓间充质干细胞的最佳培养条件及表型,用大鼠股骨抽取骨髓,密度梯度离心分离骨髓间充质干细胞。通过测定生长曲线和克隆形成能力,比较不同培养条件、不同融合度传代及不同生长基质对MsC的影响。免疫组化双标法检测增殖MSC的表型。结果Matrigel包被培养器皿,含10％胎牛血清、10ng／mLEGF的α-MEM培养基,50％融合时消化传代,是MSC保持低分化状态、体外大量扩增的较佳条件。绝大部分MSC表达CD44,部分MSC表达c-kit,MSC几乎不表达CD34。说明以上培养条件是MSC保持低分化状态又大量增殖的较好培养条件,为MSC用于细胞移植和组织工程打下了良好基础。     

自体骨髓干细胞移植研究进展

细胞移植作为一种新的治疗方法备受医学界关注，但细胞供应短缺和免疫排斥是阻碍这一疗法临床推广的主要难题。自体骨髓干细胞移植在一定程度上可缓解此矛盾。文章综述了自体骨髓干细胞移植治疗脑、肝、心等重要器官疾病的基础和临床研究现状，以及骨髓动员剂在骨髓干细胞移植中的作用。     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足22例

目的:观察自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的疗效.方法:2006年4月至2010年4月,选用自愿行自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足22例,手术抽取自体骨髓200mL,从中分离出干细胞悬液50mL,在患肢小腿肌肉间一次性按1.0cm×1.0cm间隔做干细胞混悬液注射.结果:移植后1周患肢冷感、麻木、疼痛、间歇跛行明显好转,2周显著好转.4周内愈合6例,8周内周愈合12例,24周愈合1例,40周愈合1例.22例患者中,治愈20例,死亡2例.结论:自体骨髓干细胞移植能有效促进糖尿病足患者患肢的侧枝循环的建立,改善下肢组织的血供,血流灌注明显增加,使症状得到快速而显著的改善,伤口愈合,降低了截肢平面和致残率,是治疗糖尿病足的有效方法.     

大鼠骨髓间充质干细胞视网膜下移植观察

观察了骨髓间充质干细胞(MSC)在视网膜下移植后的定位以及分化后的蛋白表达情况.将体外培养的雄性大鼠MSC移植于成年大鼠视网膜下,4周后取眼球做石蜡切片并用Y染色体鉴定;将MSC用重组腺相关病毒AAV-gfp感染后移植,4周后在荧光显微镜下观察眼球冰冻切片中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;并用4',6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记的MSC进行视网膜下移植,分别于10,20,35和50 d后观察DAPI荧光分布,并在阳性的连续切片上做神经元核(Ne-uN),神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和角蛋白(CK)免疫组化染色.结果显示,光学显微镜下Y染色体原位杂交观察,荧光显微镜下GFP观察及DAPI观察均发现来源于MSC的阳性细胞融入了原来的视网膜结构,这些细胞分布于视网膜色素上皮层、视细胞层、双极细胞层及节细胞层,细胞形态结构与周围视网膜相似;DAPI标记观察表明,移植后至50 d无细胞增生,50 d后阳性细胞数量和分布范围缩小.免疫组织化学染色发现阳性区域的细胞NeuN,NSE,GFAP和CK的表达与周围组织相同.3种标记方法检测到的视网膜结构完整,但某些区域的细胞排列不整齐.上述结果表明,MSC在视网膜下移植后可与原视网膜结构相融合,MSC具有分化为类视网膜结构的能力.     

骨髓间质干细胞在心肌再生治疗中的应用

缺血性心脏病是一种严重危害人类健康的疾病，干细胞移植为缺血性心脏病尤其是心肌梗死的治疗提供了一种新的思路，因而成为近年来研究的热点。骨髓间质干细胞因为不涉及伦理道德问题，而且取材方便，听以具有较好的临床应用前景。     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床研究(附2例报告)

目的:观察自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足的临床疗效.方法:自2006年4月至2007年3月对确诊的2例自愿接受骨髓干细胞移植治疗的糖尿病足患者,在硬膜外麻醉下进行骨髓采集200ml,分离出干细胞,配成干细胞混悬液,按1.0cm×1.0cm距离移植于患肢小腿肌肉处,同时进行足部坏疽部伤口清创.结果:移植后1周患肢冷感、麻木、疼痛、间歇跛行明显好转,2周显著好转,1月后症状缓解,切除坏疽处伤口完全愈合,未出现并发症或不良反应.结论:自体骨髓干细胞移植是治疗糖尿病足的有效方法,且简便,安全,值得临床推广.     

自体骨髓干细胞移植治疗慢性肝衰竭护理与观察

我院自2009年1月至6月对11例慢性肝衰竭患者采用自体骨髓干细胞移植介入治疗，移植后多数患者临床症状和肝功能均有明显改善，文章对相关临床护理与观察情况做简要报告。     

骨髓间充质干细胞在异基因造血干细胞移植中的作用

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一，特别是其特有的免疫调节作用，为解决异基因造血干细胞的移植后的免疫排斥问题带来希望。虽然近几年来有关间充质干细胞减少免疫排斥的研究已取得了很大进展，但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的免疫性及其在异基因造血干细胞移植中的应用等问题进行了综述。     

骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能和结构修复的实验研究

观察骨髓间克质干细胞（MSC）移植对脊髓中度损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：20只成年Sprague—Dawley（SD）大鼠随机移植组（n=10）和对照组（n=10）两组,均采用改良的A11en’s打击法遣成脊髓中度损伤（致伤冲量10g×4cm）。伤后1周,移植组于伤处移植大鼠MSC,而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1天,1周,2周,3周、4周用BBB评分观测大鼠的运动功能,并于移植后4周进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：移植后1周两组动物运动功能恢复无明显差异。移植后2周、3周、4周,与对照组比较,移植组显著提高运动功能。移植后4周,移植组损伤脊髓的结构修复明显优于对照组。结论;脊髓损伤大鼠经MSC移植后能明显改善其运动功能和神经形态,MSC移植对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

骨髓间充质干细胞研究进展

干细胞移植是目前治疗器官损伤、神经退行性疾病研究的热点,国内外学者分别对神经干细胞、胚胎干细胞等进行了探索,渴望从中找出细胞移植领域的候选细胞,但是这些细胞大多面临着伦理、来源、免疫排斥等多方面的问题.然而,近年来发现的骨髓间充质干细胞在一定程度上弥补了这一不足.骨髓间充质干细胞凭借其多向分化潜能、强大的自我复制能力和可移植性,成为细胞移植、基因治疗中重要的候选细胞.骨髓间充质干细胞移植为器官损伤、神经退行性疾病的临床治疗带来了新的希望,本文对其生物学特性及临床应用方面做一综述.     

模拟微重力抑制间充质干细胞增殖机制的研究

研究微重力对间充质干细胞增殖影响的潜在机制.用随机定位仪模拟微重力(SMG),培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测SMG对BMSCs增殖,细胞骨架,以及对细胞的黏附和增殖重要信号分子表达的影响.结果显示,在SMG下,BMSCs增殖受到抑制;细胞微丝结构和分布异常;细胞形态改变;黏着斑激酶(FAK)表达下降;细胞生长信号分子ERK1/2和Akt的磷酸化水平以及p85β表达下降.结果表明,模拟微重力条件下的细胞骨架改变、细胞黏附性降低和细胞增殖的信号通路相互作用,导致对骨髓间充质干细胞增殖的抑制作用.     

骨髓间充质干细胞三维培养--构建工程组织

骨髓间充质干细胞因其可获得性、可扩增性和可多向分化性,是理想的组织工程种子细胞,用于构建工程组织。实现这一目标的主要障碍在于如何在体外模拟生理环境培养骨髓间充质干细胞,因此,研究并改进骨髓间充质干细胞体外三维培养至关重要。对近年来骨髓间充质干细胞作为组织工程种子细胞的培养方式、培养系统以及培养中的环境因素加以评述。     

兔骨髓间充质干细胞复合脱细胞牛松质骨体外相容性研究

探讨脱细胞牛松质骨（Acellular Bovince Cancellous Bone，ABcB）生物衍生材料与骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的生物相容性，为组织工程方法修复骨缺损提供依据。将兔骨髓间充质干细胞与ABCB复合并体外培养，然后进行形态学、细胞增殖、蛋白质含量测定。骨髓间充质干细胞能够贴附在ABCB孔隙内生长，细胞生长及蛋白合成功能不受ABCB的影响。ABCB生物相容性良好，可作为组织工程的支架材料应用于骨缺损的修复；BMSCs可以作为骨组织工程种子细胞。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定

目的:探讨体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞rMSCs的方法,检测传代细胞的细胞周期,并分析部分细胞表型,对rMSCs进行初步的鉴定。方法:密度梯度离心结合贴壁培养法分离培养rMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原,流式细胞仪检测细胞周期。结果:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化rMSCs,细胞呈均一的成纤维细胞样,细胞周期显示90.16%P1代细胞处于G0/G1期,免疫组化结果为:CD44、CD29阳性、CD34阴性,说明培养的细胞即非造血干细胞,也非成纤维细胞。结论:本实验分离培养的细胞群与间充质干细胞的生物学特性吻合,说明密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化rMSCs,细胞稳定表达CD44、CD29,是实用、可行的方法,所培养的细胞可用于细胞移植等研究。     

骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的研究进展

摘要: 由各种因素导致的重症肝病的终末治疗的最好手段一直是原位肝移植,但长期以来肝供体的缺乏和免疫排斥引起的一系列问题极大地限制了该手术的运用,同时,在肝脏相关药物的筛选中,原代肝细胞难于培养且易在培养过程中变异,而随着骨髓间充质干细胞研究的深入,越来越多的证据表明骨髓间充质干细胞具有向肝细胞分化的潜能。因此,骨髓间充质干细胞诱导分化而成的肝样细胞在再生医疗和药物筛选领域具有较好的运用前景,本文就间充质干细胞的分离培养及其生物学特性,肝样细胞的诱导培养条件,生物学特性及其运用前景加以综述。     

脊髓损伤患者骨髓间质干细胞形态学观察

目的骨髓间充质干细胞具有自我复制能力,可以经过不可逆的终末分化过程产生子代细胞,其潜在的多向分化潜力以及可作为细胞治疗这一特点,极有可能成为组织工程较为理想的种子细胞。本实验是对脊髓损伤患者骨髓间充质干细胞形态学观察。方法抽取脊髓损伤患者的骨髓,经密度梯度离心分离、纯化和培养,观察原代和传代细胞的细胞形态。结果原代培养的BMMSCs最佳的贴壁时间为3d,生长性状不一,呈散在圆形细胞群、克隆圆形细胞群、散在梭形细胞群、花带状细胞群、旋涡状细胞群,而传代培养的细胞,增殖速度较快,性状一致,排列规则,呈饱满的梭行。结论体外非诱导培养的BM—MSCs方法可能为临床治疗脊髓损伤患者提供种子细胞。     

染色体标本制备在骨髓MSCs核型鉴定中的研究

选取对数生长期人骨髓间充质干细胞，用秋水仙素阻断细胞分裂中期，控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间，比较染色体标本制备效果。结果显示，秋水仙素的终浓度0．2μg／ml和作用时间6h，低渗时间35min及胰酶消化时间20s时可制备适合的染色体标本，经核型鉴定为正常二倍体细胞。从而探索出骨髓间充质干细胞染色体制备的适合条件，为骨髓间充质干细胞的进一步研究提供了理论依据和实验基础。     

骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75Gy X 线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射+MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结...