气相色谱测定蛋白氨基酸衍生化条件的实验研究

１引言蛋白氨基酸在水溶液中以两性离子存在，不具有挥发性，高温易分解，需先将其衍生化，生成挥发性好且热稳定的衍生物，才能进行气相色谱分析。通常采用的方法是羧基酯化和氨基酰化，反应的时间和温度都将影响氨基酸的衍生化程度，因此必须确定出最佳反应条件。有关上述四因素对氨基酸衍生化程度的影响，已有文献报道，但都是固定其中的三个因素而单一地改变另一因素，如此进行，工作量极大（至少需要ｓｌ次实验），并且缺乏准确性。为此我们对上述因素各取三水平，用正交表Ｌ９（３４）进行正交实验，优化了蛋白氨基酸的衍生化条件。２…     

柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用

介绍了目前柱前衍生法分析氨基酸常用的几类衍生试剂及相应的衍生方法,并且比较了各类柱前衍生试剂的优缺点,对近期氨基酸分离分析中的色谱检测方法做了系统综述。     

氨基酸柱前衍生化的3种新荧光试剂的光谱特性及高效液相色谱研究

合成了３种新的荧光标记试剂：吖啶－Ｎ－乙酰氯，咔唑－９－乙酰氯和咔唑－９－丙酰氯。它们的最大发射降激发波长分别为４３０ｎｍ，３６８ｎｍ，和３６５ｎｍ。３种衍生化试剂与氨基酸形成的衍生物在ｐＨ６．５的条件下结合梯度洗脱程序在Ｃ１８反相柱上对色谱条件进行了优化。     

醛类标志物的化学衍生化色谱-质谱分析方法进展

人体接触环境中的化学污染物会导致多种疾病,包括癌症、糖尿病、心血管疾病、神经退行性疾病(阿尔茨海默症、帕金森病等)等.作为一类具有高反应活性的亲电化合物,醛类(包括外源性醛类或环境污染物暴露后产生的内源性醛类)可与人体中多种重要生物分子形成共价修饰产物而产生毒害作用.暴露组研究自2005年被首次提出以来一直是一个前沿热...     

米根霉胞内氨基酸的高效液相色谱测定及其代谢途径分析

建立了米根霉胞内代谢物提取方法定量评价体系,用100％甲醇作为提取剂获得对米根霉胞内能荷物质最佳的提取效果.用HPLC法建立了米根霉产富马酸体系胞内18种氨基酸的含量测定方法.采用异硫氰酸苯酯( PITC)作为柱前衍生化试剂,所有氨基酸在28 min内洗脱完毕.以Sepax AA柱(250 nn×4.6 mm,5μm)为分析柱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,以0.1 mol/L醋酸钠(pH 6.5)-乙腈(93∶7,V/V)为流动相A,乙腈-水( 80∶ 20,V/V)为流动相B,梯度洗脱.18种氨基酸在1.87～45.3 mg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.991;加标回收率在96.3％～102.7％之间;相对标准偏差在1.6％～2.9％之间.运用本方法测定不同发酵时间米根霉胞内氨基酸的含量,得到其在发酵过程中的变化趋势,并结合氨基酸代谢途径分析了该发酵条件下富马酸产量偏低的原因.     

氨基酸分析技术研究的进展

本文回顾了３０多年氨基酸分析技术的研究与进展。着重介绍了样品前处理、分析手段及分析精密度、准确度方面的新进展、新结论与新动向。     

柱前衍生化-HPLC法测定恩施3种富硒蔬菜中硒氨基酸

采用HPLC与ICP-MS间隙联用的方法,以柱前衍生化-HPLC法进行定性定量分析,使用ICP-MS鉴定,建立一种富硒蔬菜中硒氨基酸的分离检测方法。结果表明:所测定的硒代氨基酸在其线性范围内呈现良好的线性关系(R2>0.999)。该方法中硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸的检出限分别为0.204 mg/L和0.680 mg/L,加标回收率分别为97.4%和94.0%,RSD分别为2.1%和0.69%。检测恩施富硒蔬菜样品,白菜、萝卜叶和苋菜含有硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸。此方法可用于富硒蔬菜中硒代氨基酸的含量检测。     

反相高效液相色谱用于寄生虫中氨基酸含量的测定

 为了对寄生虫病进行有效的防治 ,采用柱前衍生、反相高效液相色谱分离、紫外吸收定量法对中国 7个地区马来丝虫及马来丝虫幼虫氨基酸的组成和含量进行了测定。结果表明 :不同地区的马来丝虫中各氨基酸的含量存在着一定的差别 ,幼虫的氨基酸含量明显低于成虫的相应氨基酸含量。此方法简便、准确 ,在研究寄生虫的种内分化、种下分类和生长、发育、代谢等生命活动方面具有重要的意义。     

新型衍生试剂柱前衍生氨基酸的高效液相色谱分析

以邻硝基苯磺酰氯为标记试剂,RP-HPLC为分析模式,建立了一种新的氨基酸衍生化方法.通过液质联用对产物进行定性,研究并确定了最佳衍生化条件:衍生温度25 ℃,缓冲液pH9.0,衍生时间10 min.实验建立了20种氨基酸的HPLC分离方法:选用Kromasil C18柱,流动相A为30 mmol/L的NH4Ac溶液(pH 7.5),B相为乙腈;采用梯度洗脱,检测波长275 nm,室温.20种氨基酸在0.025 ～6.4 mmol/L范围内线性关系良好,相关系数在0.998 0 ～0.999 8之间,检出限为0.01 ～0.113 nmol.     

氨基酸分析方法的研究进展

对目前应用于氨基酸分析的主要方法作了较详细评述。这些方法包括柱后衍生高效阳离子交换色谱法、柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法等。引用文献73篇。     

反相高效液相色谱测定依替巴肽注射液中氨基酸的含量

采用异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱技术,建立了定量分析依替巴肽注射液中氨基酸组分的检测方法。优化色谱条件,选用Agilent XDB-C18色谱柱(5μm,150 mm×4.6 mm),以0.1 mol/L醋酸钠(冰醋酸调至pH 6.0)-乙腈(90∶10)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱方式,检测波长为254 nm,流速为1.0 mL/min,进样体积为5μL,柱温为30℃。结果表明,在优化条件下,各氨基酸能实现有效分离,且在1.23～3.68 mmol/L浓度范围内,各氨基酸的线性关系良好,相关系数(r)为0.999 1～0.999 6。该方法显示了良好的准确性、重复性、稳定性及选择性,能对依替巴肽注射液中的氨基酸实现准确定量分析。     

Fluorimetric Analysis of Five Amino Acids in Chocolate: Development and Validation

Amino acids present ergogenic action, helping to increase, protect, and restore the muscular system of young athletes. Moreover, the encapsulation of five relevant amino acids in chocolate pellet form will appeal to them, facilitating their daily consumption. A reliable HPLC fluorimetric method was developed to detect and quantitatively determine L-Leucine, L-Isoleucine, L-Histidine, L-Valine, and β-Alanine in chocolate using aniline as an internal standard. Experimental design methodology was used to investigate and optimize the clean-up procedure of the samples. Therefore, three extraction techniques (solid-phase extraction (by two different SPE cartridges) and liquid–solid extraction (LSE)) were compared and evaluated. The LOQ values in chocolate varied from 24 to 118 ng/g (recovery 89.7–95.6%, %RSD < 2.5). Amino acids were pre-column derivatized with o-phthalaldehyde (OPA), while derivatization parameters were thoroughly investigated by experimental design methodology. The analysis was performed by HPLC-fluorescence (emission: λ = 455 nm, excitation: λ = 340 nm) method using a C₁₈ column and a mixture of phosphate buffer (pH = 2.8; 20 mM)-methanol as a mobile phase in gradient elution. The method was validated (r² > 0.999, %RSD < 2, LOD: 10 ng mL⁻¹ for histidine and leucine, 2 ng mL⁻¹ for alanine and valine, and 4 ng mL⁻¹ for Isoleucine) according to the International Conference on Harmonization guidelines.     

对一种分离测定氨基酸方法的改进

 对Waters公司采用 6 氨基喹啉 N 羟基琥珀酰亚胺基 氨基甲酸酯 (AccQ Tag)柱前衍生化测定氨基酸的方法进行了改进。将流动相流速由原来的 1 0mL/min改变为 2 0mL/min ,用AccQ Tag专用柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm)在 17 5min(原为 35min) (运行周期为 2 2 5min ,原为 45min)内快速分离测定了 18种氨基酸和牛磺酸。用Nova PakC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm) ,Nova PakC18柱 (4 6mmi.d .× 15 0mm ,4μm) ,SymmetryC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,4μm)和WatersXterraRP 18柱等反相C18柱代替AccQ Tag专用柱 ,均可对氨基酸进行快速分离。     

高效液相色谱法测定氨基酸的研究进展

氨基酸是构成生物体的基础物质,氨基酸分析是生命科学研究中最重要的领域之一。高效液相色谱法因分析速度快、操作简便、检测灵敏、适用范围广等优点而广泛应用于食品工业、制药工业、生命科学研究等领域。该文综述了高效液相色谱分析氨基酸的方法,包括柱后衍生法、柱前衍生法、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法和高效液相色谱-蒸发光散射检测法。并对上述方法进行了比较,为日常的氨基酸分析提供了参考。     

OPA柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸含量

建立了邻苯二甲醛（ＯＰＡ）手动柱前衍生反相高效液相色谱法测定样品中氨基酸含量的方法。以邻苯二甲醛（ＯＰＡ）／３－巯基丙酸（３－ＭＰＡ）为衍生试剂进行衍生,ＯＤＳ柱分离,３４０ｎｍ检测,在４０ｍｉｎ内１８种氨基酸全部得到基线分离。测定牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的氨基酸组成和小鼠血清中的游离氨基酸,取得满意的结果。     

含硅路易斯酸的发展及其在有机合成中的应用

综述了含硅路易斯酸R₃SiX [X＝I, OTf, NTf₂, C(C₆F₅)Tf₂等]和(R₃SiX＋ML_n)的发展、合成以及它们在有机合成中的应用. 它们主要被用来催化Aldol, 烯丙基化, Diels-Alder, Ene和Friedel-Crafts等反应. 催化剂的用量一般为0.5～20 mol%, 并随着催化剂的活性不同, 反应产率从一般到良好不等. 催化剂活性顺序为R₃SiNTf₂＞R₃SiOTf, (R₃SiX＋ML_n)＞R₃SiX. 也对近年出现的手性含硅路易斯酸的发展和应用进行了概述, 当手性双-(多氟甲磺酰)-亚胺基硅烷用于催化环戊二烯和丙烯酸甲酯的Diels-Alder反应时, ee值高达54%.     

烟草及烟用香精香料中氨基酸检测方法研究进展

烟草及烟用香精香料中氨基酸的含量对烟草品质有着直接而重要的影响,因此有必要进行准确定性定量分析.氨基酸检测方法可分为直接检测法和间接检测法两大类,间接检测法又可分为柱前衍生法和柱后衍生法.分析了每种方法的优缺点以及常用的衍生化试剂,以期为进行氨基酸分析的研究者提供参考.     

Bis-Thiourea Bearing Aryl and Amino Acids Side Chains and Their Antibacterial Activities

Abstract

A series of symmetrical 1,3-bis thiourea 1a–e and 1,4-bis thiourea derivatives 2a–e have been successfully synthesized from the reactions of amines with 3-acetylbenzoyl isothiocyanate and 4-acetylbenzoyl isothiocyanate, respectively. All the synthesized compounds were characterized by FT-IR spectroscopy and ¹H and ¹³C NMR spectroscopy. The compounds were screened for their antibacterial activity by turbidimetric method using gram-negative bacteria (E. coli ATCC 8739) using turbidimetric method. The newly synthesized bis-thiourea derivatives bearing aryl side chains showed good antibacterial activity against E. coli. The effect of the molecular structure of the synthesized compounds on the antibacterial activity is discussed.