人胎盘的生殖内分泌学研究——Ⅰ.人细胞滋养层细胞的无血清培养与生长因子的作用

为了研究胎盘的激素分泌及其调节功能,作者发展了一种简便分离细胞滋养层细胞和用无血清培养的实验模型,研究了上皮生长因子、胰岛素、硒及转铁蛋白等生长因子对细胞滋养层细胞的生存和激素分泌的影响。结果显示在含生长因子的培养液中细胞可生存3周;上皮生长因子和胰岛素对hCG和孕酮的分泌都有刺激作用,硒只影响hCG的分泌,转铁蛋白的作用不明显,但是转铁蛋白与另外两种因子合用时呈现协同作用。本研究说明上述的4种因子和胶原是维持细胞滋养层细胞生存不可缺少的因素,同时也发现上皮生长因子、胰岛素和硒还参与了正常人胎盘激素分泌的调控。     

基于荧光素酶报告基因HeLa细胞雌激素检测方法的建立及其在水产品检测中的应用

利用荧光素酶(Luciferase)报告基因检测技术,构建稳定表达人雌激素受体α(hERα)或人雌激素受体β(hERβ)的重组HeLa细胞株(该细胞株无内源性激素受体).通过培养已转入并能成功表达的包含雌激素反应元件ERE的报告质粒pERE-Luc的HeLa细胞,用17β-雌二醇(E2)、己烯雌酚、孕酮处理后检测荧光素...     

人胎盘的生殖内分泌学研究——Ⅲ.妊娠早期人滋养层组织孕酮分泌的调节

在体外无血清培养条件下,低剂量的促黄体素释放激素(GnRH)(10~(10)—10~(-8)mol/L)可促进妊娠6—8周人胎盘绒毛的孕酮分泌,高剂量则抑制孕酮的分泌,抗hCG多克隆抗血清与单克隆IgG明显抑削孕酮的生成,而且抑制程度与抗体剂量及作用时间相关,然而不同浓度的TRH,PGE_2,PGF_(2a),睾酮、雌二醇等对胎盘绒毛的孕酮分泌则无显著影响,本研究结果表明,妊娠早期人胎盘绒毛的孕酮分泌是受GnRH与hCG调节的,这为证明胎盘中可能存在激素分泌的自我调节系统提供了重要的依据。     

细胞在单壁碳纳米管无纺膜支架上的生长行为

以具有纳米拓扑结构特征的单壁碳纳米管无纺膜材料为支架, 选择在促进组织修复和再生中起重要作用的成纤维细胞株作为实验细胞, 研究了该材料对细胞生长行为的影响. 通过X射线光电子能谱分析, 表征其在细胞培养液中浸泡后的表面化学组成; 通过细胞粘附、增殖实验以及细胞骨架发育观察, 探讨了材料的微观纳米拓扑结构对细胞的作用, 以及与碳纤维、聚氨酯浇铸膜和空白培养板材料对细胞作用的差异和可能的机理; 并采用双层细胞培养装置, 研究了该材料通过细胞通讯途径对在其它材料上生长的细胞增殖的影响. 实验结果表明, 单壁碳纳米管无纺膜材料为细胞提供了十分接近天然细胞外基质的人造微环境, 具有显著促进细胞粘附和长时间增殖的功能, 而且生长在该支架上的细胞可能通过旁分泌方式将某些化学介质分泌到细胞外液中, 经局部扩散作用于在其它材料上生长的细胞, 促进它们的增殖.     

幼猴和成年猴颗粒细胞离体下甾体形成的激素调节

本文用无血清培养技术研究幼龄和成年恒河猴颗粒细胞甾体形成的激素调节。实验结果表明:幼猴和成年猴颗粒细胞在离体下都能对人FSH、环-AMP,FK和GnRH类似物产生反应,明显增加孕酮和雌激素的产生;hCG能够促进FSH刺激幼猴和成年猴颗粒细胞增加孕酮的产生;在培液中加入DES明显增强FSH刺激孕酮和雌激素产生的效应;在缺少雌性激素底物的情况下,猴颗粒细胞也能合成可测量的雌激素。本文的发现对了解灵长类卵巢功能的激素调节机制有重要意义。     

镧,钐,铕及镱化合物对体外培养HeLa细胞的作用

应用细胞培养、扫描电子显微镜、放射自显影及细胞化学等技术研究了镧、钐、铕及镱的15种化合物对体外培养HeLa细胞分裂活性的影响,并对其氯化物的生物效应进行了较系统的研究。实验结果表明当其浓度为1mmol/L时,HeLa细胞有丝分裂指数下降,细胞表面结构紊乱,DAN及RNA合成、细胞内琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶及酸性磷酸酶活性等均发生了变化;浓度为0.01mmol/L时,HeLa细胞有丝分裂指数、细胞表面结构、DAN与RNA合成及细胞内上述三种酶活性均未发生明显变化。     

Ce4+对不同培养时期红豆杉细胞p-ERK-like的影响

为了探究培养生长不同时期的红豆杉细胞对Ce4 应答差异的机制,采用West-Blot免疫印迹法考察了1 mmol.L-1Ce4 对培养不同时期的红豆杉细胞的细胞外信号调节蛋白激酶磷酸化(p-ERK-like)的表达变化。结果发现,悬浮培养的红豆杉细胞基础p-ERK-like的表达在整个培养周期中呈"M"型变化,分别在培养第五天和第二十一天出现两个高峰,而培养第十一天达到低谷,仅为参比值的77%。在培养的不同时间点应用Ce4 诱导后,细胞的最大p-ERK-like表达量以及到达最大量所需的时间表现出显著的差异,培养第十一天的细胞经Ce4 诱导后其p-ERK-like表达速率达高峰。结果表明,处于不同培养时期的红豆杉细胞其p-ERK-like表达存在显著差异,这可能是导致不同培养时期细胞对Ce4 产生不同应答效应的一个因素。     

幼鼠Sertoli细胞分泌一种刺激Leydig细胞合成雄激素的因子

本文利用幼鼠Sertoli和Leydig细胞单独或一起培养的方法研究了Sertoli细胞对Leydig细胞的局部影响。结果发现:(1)FSH和LH都能刺激胚胎和幼鼠的睾丸细胞雄激素的生物合成,最大的刺激作用是在生后3—5天;(2)幼鼠Sertoli细胞在FSH作用下分泌一种(些)物质,它能直接(只在幼龄期)或与LH协同刺激Leydig细胞雄激素的合成;(3)Sertoli刺激因子不是类固醇或其他小分子化合物,可能是一种热不稳定的多肽。这种因子可能对幼鼠Leydig细胞向成鼠Leydig细胞的分化和激素合成能力的转化过程中起重要作用。     

雄烯二酮单克隆抗体的制备及其被动免疫新疆细毛羊的效应

本文应用人工合成的雄烯二酮11α-半琥珀酰-牛血清白蛋白为抗原,建立了5株稳定分泌抗雄烯二酮特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。McAb与睾酮、雌酮交叉反应分别为8.1—12.3％和0.8—2.5％,抗体亲和力为2.0 x10~7—2.8×10~8L/M之间。它们均为IgG_1亚类。使用该McAb被动免疫新疆细毛羊,两个情期中孕酮(P)和促黄体激素(LH)的含量皆高于对照组,绵羊排双卵和产双羔都有所提高。     

人肝癌Bel-7402细胞及Bel-7402/5-FU细胞的N-连接聚糖的差异分析

以培养的人肝癌细胞Bel-7402及其5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞(Bel-7402/5-FU)为研究对象,通过使用快速PNGase F酶切,结合TMPP-Ac-OSu和甲胺化共衍生方法,对两者的总蛋白和分泌蛋白的N-连接聚糖进行了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析。从两种细胞总蛋白中共鉴定到56种N-连接聚糖,分泌蛋白中鉴定到38种N-连接聚糖。5-FU与Bel-7402相比,耐药细胞岩藻糖化唾液酸糖型在总蛋白和分泌蛋白中都显著升高;高甘露糖型N-聚糖在总蛋白中下降,而在分泌蛋白中显著增加。本研究为进一步探索肿瘤耐药提前诊断提供糖链标志物起到一定的参考作用,并为后续解决癌症治疗的耐药提供理论依据。     

端粒酶活性在氯化镧诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用

探讨端粒酶活性在LaCl_3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中细胞中的作用.肿瘤细胞常规培养于RPMI1640培养液中,加入终浓度为3 mmol·L~(-1)的LaCl_3,继续培养12,24,36,48 h后,应用琼脂糖凝胶电泳和AO/EB双荧光染色检测细胞凋亡,以FITC-(C_3TA_2)_3 PNA为荧光探针检测细胞内端粒长度.以TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性.LaCl_3浓度为3 mmol·L~(-1),作用0～48 h,细胞的琼脂精凝胶电泳和AO/EB双荧光染色法均观察到明显的细胞凋亡变化,细胞内端粒长度缩短,端粒酶活性下降,并呈时间-效应关系.LaCl_3可通过抑制MDCC-MSB1细胞端粒酶活性而诱导其发生凋亡.     

hCG和GnRHa诱发去垂体大鼠排卵及卵巢PA活性变化的比较研究

促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)能诱导去垂体大鼠排卵,与hCG相比,所诱导出的排卵时间提前2-4h.GnRH拮抗物能完全阻断GnRHa和hCG不是作用在同一受体部位上.GnRHa也同hCG一样,只增加卵巢中组织型纤蛋白溶酶原激活因子(tPA)活性,而对尿激酶型PA(uPA)无明显影响.由hCG和GnRHa所诱导的卵巢tPA活性皆在排卵前达到高峰;GnRHa也能刺激卵丘-卵母细胞复合体中tPA活性;注射hCG明显增加血清孕酮水平,而GnRHa对血清孕酮含量没有明显影响.实验说明,GnRHa和hCG诱导排卵可能都是通过增加卵巢中tPA的活性这一共同途径而实现的.     

带肝细胞受体结合区的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白性质的研究——形成表面抗原颗粒和在不同细胞中的分泌

我们用定向缺失突变和体外重组法构建了含有肝细胞受体结合区的乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原主蛋白(S蛋白)基因。该基因在猴肾细胞COS-M6中的表达产物(S309蛋白)能形成表面抗原(HBsAg)颗粒并分泌出细胞。它在细胞和培养液中稳定,并能分别被抗HBsAg和抗preSl区的抗血清所沉淀。CsCl密度梯度分析显示S309蛋白形成颗粒的密度比S蛋白略大(1.25g/ml)。S309蛋白在肝癌细胞株中容易分泌,分泌量和S蛋白相近。但它在COS-M6细胞中的分泌和肝细胞株相差悬殊,分泌量只有10％左右,而且在培养液中出现较迟。和S蛋白的同时表达则能明显地提高它的分泌效率。     

N-苄基十六碳酰胺促小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的1H NMR代谢组学研究

采用基于核磁共振氢谱(¹H NMR)的细胞代谢组学技术探讨了玛咖有效成分N-苄基十六碳酰胺(NBH)促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的作用机制. 测定了小鼠Leydig细胞在给药前后的细胞增殖率和细胞培养液中的睾酮含量, 采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析, 研究了小鼠Leydig细胞在给药前后细胞破碎液中的代谢物差异, 并进行了代谢通路分析. 实验结果表明, NBH能提高小鼠Leydig细胞增殖率和睾酮分泌量, 给药后小鼠Leydig细胞破碎液中的代谢轮廓明显改变, 共鉴定亮氨酸、 赖氨酸、 鲨肌醇、 缬氨酸和丙氨酸等24种差异代谢物. 经Metaboanalyst分析发现, 差异代谢物主要涉及丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、 甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、 谷胱甘肽代谢及丙酮酸代谢等10条新陈代谢和遗传信息处理代谢通路, 初步阐明了NBH通过调节上述代谢通路的相关节点发挥促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮作用.     

基于阵列微流控细胞芯片的植物组分抗氧化活性分析

设计并制作了一种集成有8个重复6×6细胞培养单元的阵列微流控细胞芯片,以实现细胞培养和系列植物组分的细胞抗氧化活性(Cellular antioxidant activity,CAA)分析.芯片主要包含聚二甲基硅烷盖片、288个圆形培养腔体,48个独立平行通道的玻璃基底层,一次可完成8个样本的6个浓度筛选,并可在酶标仪上实现测试.槲皮素、芦丁和山奈酚等植物组分与芯片上培养的细胞作用24 h,细胞存活率大于90％.以芯片上培养的人肝癌细胞HepG2为细胞载体,以2',7'-二氯荧光素-乙酰乙酸酯(2',7'-Dichlorofluorescin diace-tate,DCFH-DA)为荧光探针,采用2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2'-azobis(2-amidinopropane)dihydrochlo-ride,ABAP)为细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)引发剂,测得槲皮素、芦丁、山奈酚等植物组分的CAA unit分别为71.42±0.19、74.31 ±0.36和69.92±0.09((x)±s,n=3),IC50分别为(7.20±0.06) μmol/L,(52.06±0.14) μmol/L,(32.55±0.03) μmol/L((x)±s,n=3).     

阵列微流控浓度梯度网络用于细胞-化学刺激反应研究

设计和制作了具有5组平行浓度梯度形成网络和30个细胞培养池的微流控芯片,该芯片集成了细胞接种、培养、梯度浓度化学刺激、标记和检测等功能单元。芯片为玻璃-PDMS杂合结构,微流控通道刻蚀于玻璃层。芯片细胞培养池设计了系列围堰结构以利于细胞贴壁。细胞接种、灌流培养和试剂引入通过外接微量注射泵控制完成。该芯片可以生成连续、稳定的平行浓度梯度。观察发现,围堰结构有利于细胞接种和生长,乳腺癌MCF-7细胞在芯片灌流培养条件下生长良好。利用该芯片检测了在接受As2O3和乙酰丝氨酸(NAC)梯度浓度刺激后乳腺癌MCF-7细胞内谷胱甘肽(GSH)水平以及细胞阿霉素敏感性的变化,分析乳腺癌细胞阿霉素敏感性与细胞内GSH水平的关系。MCF-7细胞内GSH水平的变化与刺激药物浓度呈剂量-效应依赖关系,在接受As2O3刺激后GSH水平有所下降;而在接受NAC刺激后GSH水平有所升高。MCF-7细胞阿霉素敏感性与GSH水平相关。在降低GSH水平后药物敏感性升高;而升高细胞内GSH水平后敏感性降低。这种阵列微流控浓度梯度网络可以用于高通量细胞-化学刺激反应研究,有潜力成为细胞水平大规模药物筛选的技术平台。     

铜对人体智力和性发育的影响

肾上腺皮质分泌的性激素 ,有雄性激素、雌性激素和孕酮。男性的肾上腺皮质既分泌雄性激素 ,也分泌雌性激素 ,只是后者量极小 ,其作用不明显 ;女性同样也分泌这两种性激素 ,只是雄性激素分泌量小 ,而雌性激素量大。反之 ,如果异性激素分泌过多 ,则会使妇女呈现男性性征或使男子女性化。铜可促进去甲肾上腺素释放。去甲肾上腺素的前体是多巴胺。由于缺铜降低了多巴胺 β-羟化酶的活性 ,而使多巴胺的合成减少 ,从而影响去甲肾上腺素的合成。肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺等又都是神经递质 (即把神经元的兴奋传递给另一种神经元或把传出纤维的…     

基于聚N-异丙基丙烯酰胺的细胞智能分离材料

聚 N -异丙基丙烯酰胺(PNIPAm)在水中是具有温度响应性的智能高分子材料,可用于细胞培养和自动脱附。本文从材料的制备方法出发,介绍了电子束照射接枝、等离子体处理接枝、表面活性自由基聚合、水凝胶等方法制备的材料对细胞培养及脱附的影响;阐述了细胞的脱附机理;讨论了加快细胞脱附的方法,包括共聚改性PNIPAm、PNIPAm接枝多孔膜、聚乙二醇(PEG)共聚PNIPAm接枝多孔膜、聚偏氟乙烯(PVDF)膜辅助细胞转移。从PNIPAm温敏性材料表面智能分离得到的细胞片因结构完整并保留了细胞外基质成分,在组织修复中得到了应用。     

α,β-聚[N-(丁二酸基)- L-天冬酰胺]的合成及其顺铂大分子药物的细胞毒性

L-天冬氨酸在H2O/三乙胺混合溶剂中直接均相开环聚(L-天冬酰亚胺)(PSI), 合成α,β-聚[N-(丁二酸基)-L-天冬酰胺](PSAA). 研究了H2O和三乙胺的混合体积比对反应物溶解性能的影响, 并用FTIR和1H NMR表征了PSAA的结构. 以PSAA和α,β-聚(L-天冬氨酸)(PAsp)为载体, 与顺式二氯二氨合铂(Ⅱ)(CDDP)络合, 合成了PSAA-CDDP和PAsp-CDDP大分子药物. 结果表明, 载体PSAA和PAsp对Bel7402细胞的毒性均低于同浓度的聚赖氨酸; PSAA-CDDP的水溶性良好, 载药量较高, 达到了14.6%, 其药物控制释放性能较好; PSAA-CDDP和PAsp-CDDP的细胞毒性随着其浓度的增大而增大, 且细胞毒性PAsp-CDDP相似文献   

聚二甲基硅氧烷-纸复合微流控芯片上的肝癌细胞三维培养

研发了一种聚二甲基硅氧烷-纸复合型微流控芯片用于肝癌细胞三维培养.芯片使用明胶处理硝酸纤维素薄膜作为细胞培养基底,以水凝胶网格作为三维培养支撑.结合微通道主动灌流与水凝胶中的被动扩散,模拟体内的流体运输形式实现细胞与外界物质交换.实验结果显示,芯片上的液滴生成以及细胞定位种植简便可靠.连续监测显示肝癌HcpG2细胞在水凝胶微球中增殖形成类似组织的三维结构.细胞增殖动力学分析以及生化检测结果显示了芯片三维培养与二维培养的差别.这种芯片三维细胞培养方法操作简便可靠,仿真度高,适合于肿瘤细胞研究.