大麦成熟胚细胞去分化和 再分化的组织学研究‘

大麦成熟胚细胞在诱导培养荃上首先形成水质、松软的初生愈伤组织.继代培养中，它能以一定的叔率产生几种次生愈伤组织:致密型胚性愈伤组织、易碎型胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织.胚性愈伤组织起源于一些初生愈伤组织细胞的体胚发生及其次级的胚胎发生.体胚发生的过程同于合子胚发育，它是犬麦成熟胚组培中早期再生植株的主要途径.体胚很容易提早萌发.本文对上述过程进行了组织学分析，同时对胚性悬浮细胞和继代培养中的胚性愈伤组织进行了观察.     

大麦花药培养及其胚性悬浮细胞系的高频快速建立

研究了（1）在低温预处理过程中，不同相对湿度对大麦花药出愈率的影响；（2）低温处理愈伤组织对植株分化的影响；（3）高频快速建立大麦胚性悬浮细胞系，结果表明，低温预处理的较大相对湿度能明显促进花药的出愈率，低温处理愈伤组织能提高绿苗率，以7周龄的花药胚性愈伤组织为起始材料高频快速建立了均质，分散性好的胚性悬浮细胞系，建立频率约为25%～50%，已8～9周龄的花药胚性愈伤组织作为起始材料，难以建立胚性悬浮细胞系。     

新疆紫草外植体诱导愈伤组织研究

以新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnston)幼叶、子叶和胚轴作为外植体,诱导产生了愈伤组织,幼叶和子叶在MSB+NAA0.4ppm+2.4—D0.2ppm+6—BA0.6ppm的琼脂培养基上脱分化效果好,愈伤组织为白色半透明状;胚轴在LS+NAA0.4ppm+IAA1.5ppm+KT2.0ppm的琼脂培养基上脱分化较合适,愈伤组织为红、白两种颜色,平均脱分化率为68.7%,这些愈伤组织有紧密型和松散型两种形态,扫描电镜观察了紧密型白色愈伤组织的表面结构,可看到愈伤组织表面有许多突起的胚性细胞团,在继代培养过程中,多数这种愈伤组织能够再分化,形成胚芽。     

彩色棉再生体系影响因子及抗病基因NP-1转化的研究

选用彩色棉优良品种(棕色)：新彩1号、新彩2号，以下胚轴和子叶作为外植体，确立了5～6日苗龄的彩色棉下胚轴是较好的愈伤组织诱导外植体，不同激素组合及浓度对愈伤组织的诱导有重要作用，2，4—D是愈伤组织诱导中重要的激素，在附加有0．1mol／L2，4—D 0．1mol／LKT的MSB培养基上，诱导形成的愈伤组织质地疏松、生长旺盛，有利于分化为胚性愈伤，比较了不同糖源在愈伤组织诱导中的效应，在蔗糖和葡萄糖为糖源的培养基中，愈伤组织诱导率均为100％，但葡萄糖更有利于愈伤组织的形成和生长，蔗糖的诱导效果次之；麦芽糖和乳糖对愈伤组织的诱导效应不及蔗糖和葡萄糖；甘露醇作为糖源则抑制了愈伤组织的诱导和生长，在胚性愈伤组织的诱导培养中，KNO3加倍和NH4NO3减半的组合利于胚性愈伤组织的发生，在根癌农杆菌介导的抗病基因兔防御素NP—1转化过程中。外植体经农杆菌浸染10min，共培养48h较为合适，在添加头孢霉素500mg／L、卡那霉素50mg／L的培养基中筛选抗性愈伤组织。     

陆地棉体细胞胚胎的发生和遗传转化条件初探

以陆地棉（冀棉20）下胚轴为外植体，在含KT0．3mg／L和2，4－D0．08mg／L的MS培养基上，诱导产生了胚性愈伤组织，继代培养不需要添加激素，胚性愈伤组织即分化为胚状体，并萌发出小芽，胚状体萌发过程与合子胚相似，但出现了一些畸形胚，解剖学方法观察发现，这些畸形胚的维管束系统不明显或形态异常，以农杆菌介导法对冀棉20胚状体及胚性愈伤组织进行了雪花莲凝集素（GNA）基因的遗传转化条件探索，并以GUS基域瞬间进行检测加以证实，得出农杆菌的浓度为O．D600＝0．8时，浸染时间为5min，共培养时间为3d，筛选培养基中卡那霉素浓度为75mg／L，对冀棉20胚状体及胚性愈伤组织转化是较为适合的。     

苜蓿胚状体的分离及其发育过程中几种酶活性的变化

通过组织培养技术获得了来源于苜蓿下胚轴愈伤组织的胚状体，并对胚状体的分离及发生和发育过程中过氧化物酶、酯酶和超氧化物歧化酶活性的变化进行了研究。结果表明，过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性变化表现出类似的规律性，即在球形胚时期二种酶的活性达到最大值，胚性愈伤组织时期次之，非胚性愈伤组织和子叶胚时期酶的活性较低。酯酶在球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚时期的活性明显高于非胚性愈伤组织时期，且按照胚状体发生和发育的进程，酶活性呈现出上升的趋势。     

玉帘的组织和原生质体培养

玉帘不同外植体培养，诱导出胚性、中间型和非胚性３种类型的愈伤组织，并再生植株．由胚性愈伤组织与叶肉细胞分离出原生质体，进行培养，启动了细胞分裂并形成了多细胞团．同时，还研究了影响玉帘组织培养以及原生质体分离和培养的诸因素．     

大麦幼胚培养的初步研究

大麦幼胚组织培养结果初步表明,两种培养基之间,两个品种之间总出愈率没有显著差异,而不同类型愈伤组织诱导率却存在差异。Ⅱ号培养基中,甲、乙两种类型愈伤组织产生比例多于Ⅰ号培养基,丙型愈伤组织正好相反。因此认为Ⅱ号培养基对大麦幼胚培养中诱导出愈及生长是较理想的。啤酒大麦品种“付8”的甲型愈伤组织比例大于高蛋白品种“Hiproly”。愈伤组织和胚芽的总过氧化物酶活性变化较大,但规律不明显,因此很难作大麦幼胚培养中愈伤组织诱导、生长及分化的指标。过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶的电泳分析,表明不同品种,培养基、组织器官之间存在一些差异。改进与扩大试验设计进一步探索提高出愈及分化率的研究正在进行中。     

龙牙百合体细胞胚的诱导及植株再生

以龙牙百合鳞片为外植体，以MS为基本培养，通过添加不同浓度的6-BA，2，4-D，研究了其体细胞胚发生的最佳培养条件，并对体细胞胚的发生过程进行了形态学观察。结果表明：影响龙牙百合体细胞胚发生方式的因素是2，4-D。当2，4-D浓度低于0．5mg／L时，体细胞胚以直接方式发生，起源于鳞片表皮下数层细胞或深层的细胞，依次经过多细胞原胚，球形胚，心形胚，成熟胚等阶段，其形态学发育过程与合子胚相似。当2，4-D浓度适中时，体细胞胚以间接方式发生，起源于愈伤组织内部的胚性细胞团，其形态学发育过程也与合子胚相似；诱导胚性愈伤组织的最适培养基为MS＋0．5mg／L6-BA＋2．0mg／L2，4-D，在分化形成体细胞胚时，需降低或去除2，4-D。     

新疆紫草外植体组织培养和植株再生

新疆紫草[Arnebia euchroma (Rovle) Johnston]嫩芽和幼叶切段在含有不同激素组合的琼脂培养基上产生了愈伤组织,其中在MSB+0.4mg/L NAA+0.2mg/L 2.4—D+1.0mg/L KT中愈伤组织诱导率较高,达82.2％.这些愈伤组织经过继代,生长很快。转入分化培养基后,愈伤组织表面产生了很多不定芽和少量胚状体。不定芽经扶壮,诱导生根,生长成完整植株并移栽成活。     

籼稻幼胚组织培养高频率植株再生及其基因转化的研究

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,研究了激素对愈伤组织诱导及植株再生的影响。ＭＳ＋２,４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ作培养基,愈伤组织诱导率达１００％;愈伤组织在ＭＳ＋ＫＴ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化频率为６７．３％,在此基础上利用基因枪转化技术,将外源的ｂａｒ基因导入了水稻基因组,转基因植株表现出对除草剂Ｂａｓｔａ很强的抗性。     

水稻花药特异表达基因启动子的扩增及克隆

采用ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术，以水稻黄化苗总ＤＮＡ为模板成功地扩增到水稻花药特异表达基因启动子Ｏｓｇ６Ｂ的７７０ｂｐ和９６０ｂｐ两个片段Ｏｓｇ６Ｂａ和Ｏｓｇ６Ｂｂ．并将其克隆到ｐＵＣ１８上形成完整的Ｏｓｇ６Ｂ，这为通过基因工程方法进行水稻杂种优势利用奠定了基础．     

一种水稻愈伤组织特异性启动子的克隆及其应用

筛选标记基因是一种用于植物遗传转化后阳性转化子筛选的有效手段,但目前介导标记基因表达均采用组成性启动子.这些启动子虽然在植物遗传转化得到了广泛应用,但由于是组成性表达,在转基因的生物安全性存在标记基因的安全性担忧.为了克服这一缺点,本文从水稻基因组内克隆了水稻半胱氨酸蛋白酶基因(Cyctein protease,CP)的启动子,通过gus转基因的验证,该启动子只在愈伤组织表达,不在水稻根、茎、叶等组织表达,为愈伤组织特异性表达启动子(Callus-specific Promoter,CSP).将该启动子用于介导筛选性标记基因的表达,通过对筛选性标记基因潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)的密码子优化,明显提高了CP启动子在水稻转基因选择的转化效率,质粒转化效率和阳性植株率均达到了pCAMBIA1301的35S启动子介导标记基因hpt的选择效果.     

瓜类疫霉菌毒素对哈密瓜愈伤组织的诱导作用

以瓜类疫霉菌素为诱导物，诱导处理哈密瓜愈伤组织，探明组织内与抗性相关的两种酶及膜透性的变化，哈密瓜愈伤组织经毒素处理后，苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）和多酚氧化酶（ＰＰＯ）的活性增强，且这种特性在愈伤组织继代培养４代后，仍然存在：愈伤组织的膜透性在继代培养初期显著减少，但随着培养代数的增加，膜透性变化趋于平稳。     

麻黄组织培养及诱导枝条生根条件初探

本文包括两方面的工作，一是麻黄组织培养，由愈伤组织诱生不定芽；二是诱导自然生长的麻黄枝条段生根，在第一部分工作中，木贼麻黄(Ephedra equisatina Bge)无菌苗子叶切段在M4(MS 2．4-D1．5mg／L KT0．5mg／L)上脱分化效果好，愈伤组织白色透明，生长快，在第二部分工作中。选用中麻黄(Ephedra，intermedia)自然生长的枝条段为材，经过多种处理发现，以20ppmNAA溶液浸泡枝条6h。扦插入粗沙中对生根有利．埋入沙中的结节处膨大。呈浅黄色，同时，灭菌麻黄枝条段在Ⅱ号培养基(1／2MS KT0．1mg／L NAA3．0mg／L)中生长良好，末端膨大，接触培养基的枝条韧皮部产生较多的愈伤组织。     

丁酸钠预培养对水稻花药绿苗形成的影响

对水稻花药进行了丁酸钠预培养的试验,结果表明:2mM丁酸钠24小时的预处理,可以促进小孢子的均等分裂,增加多核花粉的比例,并影响愈伤组织诱导率和愈伤组织的分化绿苗潜力,对愈伤组织分化绿苗的促进作用尤其显著。丁酸钠对愈伤组织诱导的作用,与介质的pH的值有关,pH7.0的培养基的诱导率低于pH5.8,但对分化有利。 文章讨论了丁酸钠促进愈防组织分化的可能原因,以及丁酸钠影响愈伤组织诱导和促进分化之间关系。