赭曲霉甾体11α–羟化酶基因AOH在毕赤酵母中的表达及功能分析

11α–羟基左旋乙基甾烯双酮(11α-OH-GD)是生产高效避孕药去氧孕烯的关键中间体.丝状真菌赭曲霉(Aspergillus ochraceus)TCCC41060可以转化左旋乙基甾烯双酮(GD)形成11α-OH-GD,但该转化反应特异性低,副产物偏高,限制了其工业应用.为了研究赭曲霉转化GD特异性偏低的机理,本文克隆了赭曲霉11α–羟化酶基因AOH并构建了表达载体p PIC3.5,K-AOH,获得了重组毕赤酵母菌株.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹实验(Western blot)分析表明,AOH重组蛋白相对分子质量为6.12×104,与预测结果一致.对转化产物进行薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析结果显示,AOH重组菌株能够转化GD,形成目标产物11α-OH-GD以及3种副产物.以上结果表明:AOH基因编码的甾体11α–羟化酶对底物GD转化反应的特异性较差.     

雷斯青霉转化左旋乙基甾烯双酮15α-羟基化反应工艺研究

对雷斯青霉（Penicillium raistrickii）微生物转化左旋乙基甾烯双酮15α-羟基化反应的培养基组成和转化条件进行优化．结果表明：优化后最佳培养基组分为葡萄糖30g／L,玉米浆20g／L,NaNO3 2g／L,KH2PI4 1g／L,K2HPO4 2g／L,MgSO4 0．5g／L,FeSO4 0．02g／L,KCl 0．5g／L;最适转化条件为接种量10％,初始pH7．5,摇瓶装量50mL,转化温度28℃,投料量0．2％,投料时间30h,转化时间60h,底物添加方式为底物超声粉碎后加4％V醇和1．5％吐温80溶解．在此条件下。摇瓶转化率可达70％以上。     

雷斯青霉转化左旋乙基甾烯双酮150α-羟基化反应工艺研究

对雷斯青霉(Penicillium raistrickii)微生物转化左旋乙基甾烯双酮15α-羟基化反应的培养基组成和转化条件进行优化.结果表明:优化后最佳培养基组分为葡萄糖30g/L,玉米浆20g/L,NaNO3 2g/L,KH2P O41g/L,K2HP O42g/L,MgSO40.5g/L,FeSO4 0.02 g/L,KCl 0.5 g/L;最适转化条件为接种量10%,初始pH7.5,摇瓶装量50 mL,转化温度28℃,投料量0.2%,投料时间30h,转化时间60h,底物添加方式为底物超声粉碎后加4%甲醇和1.5%吐温80溶解.在此条件下,摇瓶转化率可达70%以上.     

雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆及生物信息学分析

工业上利用丝状真菌雷斯青霉(Penicillium raistrickii)转化生产高效避孕药孕二烯酮的关键中间体15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.已知参与雷斯青霉甾体转化反应的关键酶为P450羟化酶,该羟化酶体系由细胞色素P450羟化酶和NADPH–细胞色素P450还原酶(CPR)组成,但有关其15α–羟基化反应的分子基础尚不清楚.根据转录组测序数据库,通过RT-PCR扩增克隆了一个雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因.该基因的开放阅读框为2,082,bp,编码694个氨基酸的多肽链,预测的蛋白相对分子质量为7.63×104,具有CPR蛋白的典型结构域(FMN结合域、FAD和NADPH结合域).NCBI BLAST结果显示雷斯青霉CPR与意大利青霉(P.,italicum)NADPH–细胞色素P450还原酶具有较高的同源性,一致性为93%.     

雷斯青霉的复壮及水溶性离子液体对其15α-羟基化的影响

针对真菌培养过程中出现的退化问题,对雷斯青霉采用灭菌胡萝卜作为斜面培养基进行了复壮处理,并通过添加水溶性离子液体的方式提高底物的溶解与传递.结果表明:在相同培养条件下,采用胡萝卜复壮后的雷斯青霉羟基化左旋乙基甾烯双酮产15α-羟基化左旋乙基甾烯双酮.选用离子液体[EMIm][EtOSO3]代替有机溶剂作为促溶剂,促溶剂添加量为4%,底物左旋乙基甾烯双酮投料量为5,g/L,投料时间为30,h,转化时间为72,h时的产物转化率最高可达68.1%.     

整合转化优势 提高帮教效率

帮教生问题一直以来困绕着学校的教育工作，它既是学校德育工作的重点又是难点。市场经济发展的复杂性造成青少年生活环境的复杂性，帮教生问题应更多地从学校、家庭和社会诸复杂的客观环境中寻找原因。在具体的帮教工作中。应加强针对性，提高实效性，讲究操作性，追求转化效率。帮教生问题的复杂性。需要帮教手段的多样性。     

整合转化优势提高帮教效率

帮教生问题一直以来困绕着学校的教育工作,它既是学校德育工作的重点又是难点.市场经济发展的复杂性造成青少年生活环境的复杂性,帮教生问题应更多地从学校、家庭和社会诸复杂的客观环境中寻找原因.在具体的帮教工作中,应加强针对性,提高实效性,讲究操作性,追求转化效率.帮教生问题的复杂性,需要帮教手段的多样性.     

表达KstD重组大肠杆菌转化甾体化合物的条件优化

3-甾酮-Δ1脱氢酶是胆固醇降解的关键酶之一,能脱去甾酮C1,2位上的氢原子,形成双键,在甾体药物的合成过程中具有重要的作用.以异源表达3-甾酮-Δ1脱氢酶的重组大肠杆菌为材料,对其培养条件以及黄体酮转化条件进行了优化,实现了甾体化合物的高效转化.首先,对表达3-甾酮-Δ1脱氢酶基因的重组大肠杆菌的培养条件对黄体酮脱氢的影响进行了研究,结果表明,IPTG浓度为0.05mmol/L,在28℃,pH值为7的条件下诱导培养5h,获得最高转化活性的细胞;其次,以优化条件下获得的菌体为催化剂,研究了各种转化条件对底物转化的影响,结果表明,以甲基-β-环糊精为助溶剂,转化温度为37℃,底物质量浓度为6g/L,菌体量为100g/L,pH为7.0,黄体酮的转化率达到99%以上,比优化前的产量提高了2倍,转化率提高近1倍.     

葡萄的基因转化效率及其影响因素

经农杆菌介导转化葡萄的胚性愈伤组织,研究了影响转化效率的几个因素。结果表明,愈伤组织经１４天预培养,菌液经６－８倍稀释,共培养时保持ＰＨ６．０以及在农杆菌对数期之前８小时加入乙酰丁香酮都显著提高了转化效率。     

以龙头企业为主体提高成果转化效率

全党重视的“三农”问题突破口在何处．硕果累累的专家与近在咫尺渴望先进技术的农民如何拉上手，研究院所在大量成果如何寻求合适的转化平台，广大农民又如何提升自己的产业与产品的附加值，科技部，财政部从2001年开始实施农业科技成果转化资金（以下简称“农转资金”）项目，     

加压介质对蓝色犁头霉孢子存活率及甾体转化的影响

分别以N2、高纯空气[V（O2）：V（N2）=21：79]和CO2为加压介质，研究高压条件下蓝色犁头霉孢子存活率的变化情况。在3种不同加压介质下，蓝色犁头霉孢子存活率显示出相同的变化规律，随压力升高，孢子存活率逐步降低；压力一定时，蓝色犁头霉孢子存活率随保压时间的延长而降低；在相同压力和保压时间下，蓝色犁头霉孢子在高纯空气中的存活率明显高于在N2和CO2中的孢子存活率，其中蓝色犁头霉孢子在CO2中的存活率始终低于其他两种加压介质；在适宜的压力和加压介质条件下，压力可显著提高蓝色犁头霉氢化可的松产量。     

提高木质纤维素降解转化效率的初步探究

以农作物秸秆,包括水稻秸秆、玉米秸秆和甘蔗渣为材料,采用分光光度法比较了烟曲霉、绿色木霉、枯草芽孢杆菌的处理效果.实验结果显示:总乙醇产量最高的是甘蔗渣,其乙醇体积分数为6.285％;而玉米秸秆和水稻秸秆相差甚微,分别是6.200％和6.195％.用2％(体积分数)氢氧化钠溶液预处理甘蔗渣,再用烟曲霉在28℃下降解甘蔗...     

优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究

通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法.结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L MgCl2 + 80 mmol/L CaCl2)处理,-85℃放置12～14 h,42℃热激处理90 s,转化效率最高,可达5.5×105～6×105 cfu/μg DNA(pSilencer2.1-U6-neo),随着质粒放置时间增加,转化效率下降.     

新材料首次将热电转化效率提高到14%

[科技日报]据美国物理学家组织网1月19日(北京时间)报道,美国西北大学的化学家、物理学家和材料学家携手研发出一种新材料,这种新材料展示出了高性能的热电特性,能更有效地将机动车的排气系统、工业生产过程和设备、太阳光等发热系统产生的废热转化为电力,其     

辣椒的离体再生及抗虫基因转化的研究

研究建立起一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导带柄子叶,将豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI)基因转入辣椒栽培品种“益都羊角椒”中。对获得的33株卡那霉素（Km)抗性植物进行PCR检测,证明有6株为转CpTI基因植株。通过对转基因植株进行抗虫性研究,发现R1代植株对棉铃虫表达出一定的抗性,但不同转化体之间其抗性存在着差异。     

提高根癌农杆菌介导黑曲霉转化效率的研究

为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导黑曲霉(Aspergillus niger)转化(ATMT)效率,本文对影响转化效率的分生孢子与农杆菌的比例、转化媒介、诱导溶氧、诱导时间、诱导时乙酰丁香酮(AS)浓度这5个因素进行单因素实验,最终确定提高其转化效率的最优条件为:根癌农杆菌诱导过程在400,μmol/L乙酰丁香酮终浓度条件下,100,m L三角瓶中28,℃、100,r/min振荡培养5,h,分生孢子与根癌农杆菌的比例为1﹕100,在硝酸纤维膜媒介上24,℃共培养48,h.在此优化条件下,黑曲霉的转化效率达到35个/107分生孢子.相比于优化前,转化效率提升了78%,,并且整合至黑曲霉基因组的外源潮霉素B抗性基因在转接15代以后仍能稳定遗传.     

PRESTO搜寻脉冲星中候选体识别效率的提高

随着大型射电望远镜及配套超宽带接收机设备的建设和使用,脉冲星巡天数据进入PB时代,由此产生的脉冲星候选体数量将是千万量级。这其中,零色散量信号(干扰信号)占比高达70%,候选体识别和筛选已成为制约脉冲星科学研究的主要因素之一。基于脉冲星搜寻开源软件套件PRESTO,针对FAST特定参数空间,优化了PRESTO脉冲星候选体图像输出,新增零色散比对子图像和判读曲线,并将参数值记录至数据库中。实验表明本方法强化了脉冲星候选体的特征。     

论提高我国技术成果转化效率的市场与非市场途径

目前我国技术成果转化市场的运行效率较低 ,这里有体制原因、政策原因、也有对市场交易技术利用水平低的因素 ,因而需从多个角度 ,推进我国技术转化工作。本文认为当前需要推行科学的技术定价策略、积极培育科研机构的市场声誉、加速科技资源导入企业的步伐