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酶解法制备方格星虫多肽及其抗氧化作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用木瓜蛋白酶酶解制备方格星虫多肽,通过单因素实验研究了加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值和料液比等因素对羟自由基清除率的影响。通过正交试验确定了木瓜蛋白酶对方格星虫最佳的酶解工艺条件为:加酶量300 U/g,酶解温度50℃,酶解时间60 min,酶解液pH值7.0,料水比1∶3。在此条件下酶解方格星虫获得多肽的羟自由基清除率为95.42%,表明方格星虫酶解物具有较明显的抗氧化能力。由高效体积排阻色谱(HPSEC)法测得方格星虫多肽的分子量为5868。 相似文献
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以小球藻藻种为原料,通过实验室培育得到藻粉,再通过碱性蛋白酶制备小球藻抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,通过单因素和响应面设计探究加酶量、pH、酶解时间和反应温度对抗氧化肽的抗氧化性的影响,通过超滤离心对多肽进行分离,测定了各组分的DPPH自由基清除率,再通过氨基酸分析仪和凝胶渗透色谱仪测定了DPPH自由基清除率最好的多肽组分的氨基酸组成和分子量,又测定了它的热稳定性和贮藏稳定性。结果表明:小球藻蛋白制备抗氧化肽的最佳条件为:pH为7,反应温度为40℃,反应时间为30 min,加酶量为4 000 U·g-1,此时DPPH自由基的清除率是58.03%。超滤分离得到五个组分,其中分子质量为5 KD-10 KD的DPPH自由基清除率最佳,多肽中的抗氧化氨基酸含量为49.9%,它的相对分子量为474,抗氧化肽有着良好的热稳定性以及贮藏稳定性。 相似文献
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采用水酶法制备虹鳟鱼骨油,单因素分析法优化虹鳟鱼骨酶解的工艺条件,考察了料液比、pH值、酶解时间、酶解温度、加酶量5个因素对鱼油提取率的影响,采用气相色谱-质谱联用 (GC-MS) 技术对鱼骨油的脂肪酸组成和含量进行了分析鉴定.结果表明,在55℃、pH 7.5、酶解时间为3 h、料液比为1∶1、加酶量为2000 U/g的条件下,利用碱性蛋白酶提取的虹鳟鱼骨油中的油脂含量最高.GC-MS分析结果表明,虹鳟鱼骨油中主要成分是不饱和脂肪酸,含量为脂肪酸总量的80.4% (w/w),其中单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸分别约占不饱和脂肪酸的76.9%和23.1% (w/w), DHA和EPA的总量为3.4% (w/w).本研究优化了虹鳟鱼油的提取技术,对虹鳟鱼油的主要挥发性物质进行了分析鉴定,初步确定了其中对鱼油风味起主要贡献的物质,对鱼油产品的分析与鉴别具有参考价值. 相似文献
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多孔硅球固定化木瓜蛋白酶的制备和性质 总被引:11,自引:0,他引:11
用载体交联法制备了多孔硅球固定化木瓜蛋白酶。考察了固定化时间、温度、pH值、给酶量和成二醛浓度对固定化木瓜蛋白酶活力的影响。研究了固定化木瓜蛋白酶的性质,并同溶液酶进行了比较。着重考察了固定化木瓜蛋白酶的热稳定性。所制得的固定化木瓜蛋白酶最适温育温度达到80℃,对底物酪蛋白的水解活力随温度的升高而增加,在90℃达到最高值;在70℃温育12小时后酶活力仍能保持高水平。 相似文献
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用不同酸酐对木瓜蛋白酶进行化学修饰, 以三硝基苯磺酸法(TNBS)测定修饰酶的平均氨基修饰度, 对修饰前后的木瓜蛋白酶分别纯化并通过UV-vis和IR对其结构进行了表征. 考察了温度、pH值和表面活性剂SDS对化学修饰的木瓜蛋白酶活力的影响, 并与天然木瓜蛋白酶进行了比较, 对天然酶和修饰酶进行了动力学研究. 结果表明, 化学修饰木瓜蛋白酶的最适反应温度为80 ℃; 最适pH值为9.0; 在SDS浓度为5 mg•mL-1时修饰酶酶活仍能保持在50%左右; 在所有酶中, 均苯四甲酸酐修饰木瓜蛋白酶的催化效率最高, 为2.442×102. 与天然木瓜蛋白酶相比, 化学修饰木瓜蛋白酶的热稳定性、耐碱性和耐洗涤性得到了显著提高. 相似文献
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毛细管电泳法测定过氧化氢酶与天然抗氧化剂协同清除羟自由基作用 总被引:1,自引:0,他引:1
在抗坏血酸/Fe2+羟自由基产生体系中,以苯甲酸为羟自由基捕获剂,建立了羟自由基的毛细管电泳分析方法。优化了背景缓冲液的pH值、电解质浓度、表面活性剂浓度及分离电压。在最优的电泳条件下,研究了羟自由基产生体系中各底物浓度和反应时间对产物生成量的影响。本方法可在15 min内实现体系中的各物质的分离;产物间羟基苯甲酸的线性范围是5×10!6~1×10!3mol/L,检出限为2.8×10!7mol/L。将本方法用于血清基质中过氧化氢酶、原花青素和绿原酸对羟自由基IC50的测定,并研究了过氧化氢酶与原花青素及与绿原酸的协同清除羟自由基作用。结果表明,过氧化氢酶与原花青素及与绿原酸均存在协同清除羟自由基作用,在过氧化氢酶与原花青素的协同作用间还存在量效关系。 相似文献
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本文研究了复合酶酶解前后假酸浆提取物的抗氧化活性能力,并采用薄层色谱法(TLC)对酶解产物中总黄酮进行了分离,利用高效液相色谱-质谱联用技术对其鉴定分析。通过对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除能力实验,酶解液抗氧化性能显著高于假酸浆提取液;酶解液的薄层及HPLC-MS法初步鉴定出假酸浆中含有桑色素、二氢槲皮素和儿茶素三种黄酮。 相似文献
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本研究制备了介孔二氧化硅纳米球(MSN),并用之吸附脱除水中的Mo(VI)。应用扫描电镜、介孔分析仪、红外光谱等对MSN进行了表征。考察了pH、吸附时间、MSN投加量和温度对水中Mo(VI)脱除率的影响,并在单因素试验基础上通过正交试验法确定了Mo(VI)的最佳脱除条件:pH=3,MSN投加量为 8.5g/L,吸附时间为36h。在优化吸附试验条件下MSN对加标水中Mo(VI)的脱除率为93.6% ~ 97.3%。 相似文献
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在海洋天然产物中,马鲛鱼是一种重要的高活性抗氧化肽生物源,具有极高的加工附加值。由于鱼体组织的复杂性,活性抗氧化肽成分的提取和筛选对样品制备和分离技术提出了挑战。使用不同蛋白酶对鱼体组织进行酶解时,所获得的活性肽结构及功能活性会有显著的差别。为了获得高活性的抗氧化肽,该研究分别考察了风味蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶5种蛋白酶的酶解效果。以二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)清除率和水解度(DH)为指标,筛选最优水解酶。结果表明,胰蛋白酶酶解液清除DPPH·和·OH能力最强,清除率分别达到88.93%±0.82%和53.09%±0.73%。在单因素试验的基础上,以DPPH·清除率为响应值,以加酶量、酶解温度和时间为函数,进行了三因素三水平响应面试验,获得水解度23.66%、DPPH·清除率93.78%以及·OH清除率62.59%的最优制备条件。纳流液相色谱具有低样品量、低溶剂消耗和高效等优势。为筛选出适合于马鲛鱼内脏抗氧化肽分离分析的固定相,该研究使用1∶1000分流比的纳流液相平台,分别使用反相C18柱(15 cm×100 μm, 5 μm, 30 nm)和强阳离子交换柱(15 cm×100 μm, 5 μm, 100 nm)进行分离,收集、冻干并评测了各组分的抗氧化能力。结果表明,强阳离子交换固定相更适合于马鲛鱼内脏抗氧化肽的分离纯化,并筛选出1个强活性抗氧化肽组分。该组分DPPH·清除力的半抑制浓度(IC50)为0.672±0.051 mg/mL,与纯化前相比提高了13.6倍。该研究报道了纳流液相色谱在海洋天然产物源抗氧化肽分离分析中的应用,并证明了其在活性抗氧化肽成分筛选中的有效性和良好的应用前景。 相似文献
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化学修饰木瓜蛋白酶的固定化及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在底物保护和无底物保护下,用丁二酸酐对木瓜蛋白酶进行化学修饰,以三硝基苯磺酸法测定修饰酶的平均氨基修饰度,以棉布为载体,戊二醛为交联剂,对修饰前后的木瓜蛋白酶分别进行固定化.考察了温度、pH和表面活性剂SDS对化学修饰的固定化木瓜蛋白酶活力的影响,并与固定化天然木瓜蛋白酶进行了比较.研究表明,化学修饰固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度为80℃;最适pH为9.0;在SDS浓度为20mg/mL时酶活也仍能保持在40%左右;米氏常数为187g/L.与天然的固定化酶相比,化学修饰的固定化木瓜蛋白酶的热稳定性、耐碱性和耐洗涤性得到了显著提高. 相似文献
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利用产多糖菌Enterobacter cloacae Z0206(E.cloacaeZ0206)的深层发酵法制备了E.cloacae Z0206细菌富硒多糖;测定了其还原能力和清除1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基、超氧阴离子及羟自由基的能力.结果表明,通过深层富硒发酵、醇沉离心等制备富硒多糖SEPS的产量为9.28g/L,富硒量为2.314mg/g;E.cloacae Z0206富硒多糖对DPPH自由基和羟自由基具有较好的清除作用,在浓度为5g/L时对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为80.35%和84.26%,并具有较强的还原能力,但其对超氧阴离子自由基的清除能力较差. 相似文献
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固定化木瓜蛋白酶的制备和性质研究 总被引:10,自引:0,他引:10
多孔硅球固定化木瓜蛋白酶具有热增活性 .本文在前文研究的基础上 ,用载体交联法制备了甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶 .考察了固定化pH值、戊二醛浓度和给酶量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 .研究了固定化木瓜蛋白酶的性质 ,特别是热稳定性和耐热性 ,并与溶液酶和多孔硅球固定化木瓜蛋白酶进行了比较 .所制得的甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度均达到了 80℃ ;90℃温育 1h后固定化酶的活力保持在 95 %以上 ;70℃温育处理 5h和 6h后固定化酶的活力也仍能保持在 90 %以上 .固定化木瓜蛋白酶的热稳定性和耐热性得到了显著提高 相似文献
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通过逐层自组装(Layer-By-Layer self-assembly)的方式在自制的经过磺化的聚苯乙烯微球上连接高分子电解质和磁性物质制备了磁性微球,并用此磁性微球固定化木瓜蛋白酶。研究了固定化酶的最优工艺条件(固定化率最高)为:0.5g液态分散磁球(固含量为7.9%),温度30℃,给酶量15mg,pH值为6.0,固定化时间1.0h,此时可达非常高的固定化率93.0%。并且研究了固定化酶的性质:最佳使用温度为50℃,最佳使用pH值8.0,使用3次或80℃保存1.5~2.0h活性大约降为一半。 相似文献