小鼠卵透明带3(mZP3)cDNA的克隆、测序及mZP3 DNA疫苗的构建

卵透明带3（ZP3）蛋白是透明带中的一种主要蛋白，在精卵结合过程中作为精子的初级受体起重要的作用，抗ZP3抗体可以阻断精卵的相互作用，ZP3被认为是一种潜在的避孕疫苗的靶抗原，本文根据小鼠卵透明带（mZP3)cDNA序列（1317bp）设计了上游和下游引物，从小鼠卵巢中提取总RNA，经RT－PCR克隆了鼠卵透明带3基因的cDNA，将其亚克隆至pUCm-T载体后利用蓝白斑特性筛选出阳性克隆，酶切鉴定后测序比较，与Gene Bank小鼠ZP3 cDNA序列完全相同，证明克隆出正确的小鼠ZP3 cDNA。将mZP3克隆至真核表达质粒pCMV4上，构建完成了DNA避孕疫苗的载体pCMV4-mZP3，为应用DNA疫苗免疫小鼠达到控制鼠害的研究奠定了基础。     

小鼠单抗R5基因的克隆和基于CDR相似性的人源化质粒构建

抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA,逆转录成cDNA,扩增出R5单抗的轻重链基因．分析克隆到的轻重链基因的序列信息,得到互补决定区（cDR）序列信息．构建真核表达质粒并在真核细胞中表达．采用互补决定区移植（CDR-grafting）的方法人源化鼠源单抗R5基因．先从人种系（germline）抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型（CDR canonical structure class）的片段,合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸（overlap extension）的方法得到人源化的VL和VH,并采用双酶切方法分别克隆入昆虫杆状病毒表达载体pAc-k-CH3中,经测序确定序列正确．大抽后的质粒和线性杆状病毒DNA共转Sf9昆虫细胞,表达得到的抗体用ELISA能检测到和抗原的结合活性．轻重链基因的成功克隆和人源化表达质粒的构建及表达为下一步改善人源化R5单抗的特性打下了基础,并向R5单抗的抗肿瘤临床应用迈进了一步,具有重要的意义．     

小鼠B7-1cDNA克隆、测序、表达及其抗瘤效应的初步探讨

用反转录ＰＣＲ的方法,从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞中扩增出Ｂ７－１ｃＤＮＡ后,插入ｐｃＤＮＡ３质粒中构建成小鼠Ｂ７－１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤ－ｍＢ７．１,经酶切鉴定和序列分析证实此表达载体中插入的Ｂ７－１ｃＤＮＡ的序列与文献报道一致．通过脂质体介导将ｐＣＤ－ｍＢ７．１导入Ｂ７－１的小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６（Ｆ０）中,经ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交初步证实Ｂ７－１在肿瘤细胞中获得了稳定有效的表达．同源小鼠脾淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养后采用ＬＤＨ释放改良法测定淋巴细胞特异杀伤活性,结果显示,与野生型和模拟转染的Ｂ１６细胞相比,Ｂ７－１基因转染的Ｂ１６细胞能较有效诱导淋巴细胞产生针对野生型Ｂ１６细胞的特异杀伤活性（ｐ＜０．０２）．这说明,将Ｂ７－１基因导入肿瘤细胞表达能提高其免疫原性,诱导有效的抗肿瘤免疫反应     

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化E.coli BL21-codonPlus (DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原 ;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.     

猪瘟病毒石门株E2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了猪瘟病毒石门株的Ｅ２基因．扩增片段大小为１１８４ｂｐ，与预期大小一致．经ＳａｃＩ酶切和巢式ＰＣＲ证实了Ｅ２基因的特异性．将Ｅ２基因扩增片段首先克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，进行全序列测定，将该基因再克隆到表达载体ｐＢＶ２２１．采用温控诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示Ｅ２基因获得表达．ＥＬＩＳＡ表明Ｅ２基因表达产物可与猪瘟阳性血清起特异性反应．     

HBV X蛋白与宿主APOBEC3G蛋白之间的相互作用

将原核重组质粒双酶切后释放的χ基因与真核表达载体连接，构建真核重组质粒pcDNA3.1-X，然后与真核重组质粒pcDNA3.1-APOBEC3G共转染HepG2细胞，提取蛋白进行免疫共沉淀并用Western blot分析结果。免疫共沉淀后，HA-APOBEC3G融合蛋白能够在抗HBx的免疫沉淀物中检测出来，在抗HA标签的免疫沉淀物中也能检测到HBx。揭示了这两种蛋白能在受体细胞内形成复合物。结果表明乙肝病毒X蛋白与APOBEC3G蛋白在细胞内能发生相互作用，提示APOBEC3G抗HBV作用可能与乙肝病毒X蛋白有关。     

pEGFP-MEK1/Q56P重组质粒的构建及融合基因在293T细胞中的表达

构建第56位氨基酸发生突变的MEK1基因(MEK1／Q56P)与增强绿色荧光蛋白(EGFP)报道基因融合表达的真核重组质粒pEGFP-MEK1／Q56P，经限制性酶切及测序鉴定后，将其导入293T细胞中，用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，同时进行Western blot检测。酶切鉴定及测序结果表明构建的pEGFP-MEK1／Q56P与预期结果一致，荧光观察及Western blot结果表明MEK1／Q56P和EGFP在293T细胞中能以融合蛋白的形式表达，且MEK1／Q56P能特异性活化ERK1／2，本研究成功构建了含有MEK1／Q56P的绿色荧光蛋白真核表达质粒，便于对Raf／MEK1／ERK1／2信号传导通路做进一步研究。     

重组真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ的构建及其在胃癌细胞MGC80—3中的表达

目的构建新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因的真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ（pEGFP—cec），检测其在肿瘤细胞中的表达情况，探讨抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制和抗菌肽抑瘤作用效果．方法应用基因重组技术，将新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因克隆到真核表达载体pEGFP—C1，通过酶切和测序的方法鉴定重组质粒pEGFP—cec的正确性．将pEGFP—cec经脂质体法转染到胃癌细胞MGc80—3，48h后观察EGFP瞬时表达情况；72h后，应用RT—PCR，检测抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；96h后，消化细胞，经台盼蓝染色，检测重组质粒pEGFP—cec表达产物对肿瘤细胞的影响．结果细胞转染48h后，荧光显微镜下可观察到EGFP的表达，发出绿色荧光；转染72h后，RT—PCR检测到胞内有抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；表达产物能够抑制肿瘤细胞的生长．结论成功构建了真核表达载体pEGFP—cec，并在肿瘤细胞中可见抗菌肽cecropin—XJ和EGFP基因的有效表达以及表达产物具有显著的抗肿瘤活性．为深入开展抗菌肽抑制肿瘤的研究奠定基础．     

嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km~r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｏｈｉｌｉａＰ２）的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＸｂａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、及ＰｖｕⅡ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１、质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点；后３种依次为２、７、５个切点．通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱．将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因（ｋｍｒ）片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２是由ｐＧＰ１－２质粒上大小为２．９０ｋｂ的ＤＮＡ片段（含ｋｍｒ）和ｇｈＨ１经ＢａｍＨⅠ－ＰｓｔⅠ双酶切产生５．７０ｋｂ大片段组成，它能够重新转化到喀麦芽假单胞菌受体（ｋｍｒ）中，其ｋｍｒ标记能够得到稳定的表达．     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）．利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ＰＥＸ．ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表达具有明显的抑制作用，从而为在真核水平上利用反义ＲＮＡ对Ｘ基因进行调控的研究提供了有利的基础．     

SiO-2包覆超细CaCO-3的结构和机理分析

合成了表面包覆SiO2的超细CaCO3。通过XPS，XRD对包覆表面层结构的分析，证实了SiO2以无定形包覆于CaCO3表面，并在其表面形成了Si-O-Ca键。对SiO2包覆超细CaCO3的机理分析结果可知：Na2SiO3的加入量是影响包覆效率的重要因素，由于硅酸易自聚，控制SiO2与CaCO3的重量比约为4％－5％时为包覆的最佳点；CaCO3晶粒度大小影响分散性能，进而影响包覆效率，分散性能好的包覆效率较高。     

负催化吸光光度法测定锌

研究了在乙醇介质中Ｚｎ＾２＋对过氧化氢氧化甲基红褪色反应的负催化作用,提出了测定痕量Ｚｎ＾２＋的新方法,通过实验确定了最佳条件,方法简单,灵敏度高,用于水样中痕量Ｚｎ＾２＋的测定,结果满意。     

籼稻幼胚组织培养高频率植株再生及其基因转化的研究

以籼稻品种特青的幼胚作为外植体,研究了激素对愈伤组织诱导及植株再生的影响。ＭＳ＋２,４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ作培养基,愈伤组织诱导率达１００％;愈伤组织在ＭＳ＋ＫＴ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化频率为６７．３％,在此基础上利用基因枪转化技术,将外源的ｂａｒ基因导入了水稻基因组,转基因植株表现出对除草剂Ｂａｓｔａ很强的抗性。     

稀土掺杂二氧化钛的相变和光催化活性

通过 X RD 晶体结构分析 ,研究了 6种稀土元素离子 Gd 3+ , Y 3+ , La 3+ , Ce 4+ , Tb 3+ 和 Eu 3+ 掺杂 的二氧化钛样品的相变量、晶胞参数和金红石相的晶粒大小 ,并讨论了它们在催化降解 X-3B活性艳红 实验中光催化活性 . 发现离子半径和稀土离子的价态变化方式决定了它们的相变量和晶胞参数 ,进而对 二氧化钛母体的光催化活性产生重要影响 .     

白颈长尾雉栖息地小区利用度影响因子研究

1995年10月至1996年5月在浙江省开化县水坞山区采用无线电遥测技术和样方法对白颈长尾雄栖息地小区利用度影响因子进行研究，结果显示：（1）食物和水因子是决定白颈长尾雉栖息地利用度的最主要因子，随季节的变化，影响白颈长尾雉栖息地小区利用度的食物种类亦随之变化。（2）冬季，灌木层因子的作用大于草本层因子；春季，草本层因子的作用大于灌木层因子。（3）白颈长尾雉栖息地小区利用度多元回归模型：冬季：Y＝0．044438X1＋0．003519X2－0．001542X3＋0．074533；冬末春初：Y＝0．526660X1＋0．041444X2－0．005522X3－0．585041；春季：Y＝0．102324X1＋0．101763X2－0．002182X3＋0．120046。     

离子注入改良纤维分解细菌及其机理研究

对纤维分解细菌HY2进行不同剂量离子束注入诱变。通过研究离子注入对纤维素酶活性的影响。筛选出纤维素酶活性高的突变菌株HY2-3．通过聚合酶链式反应PCR技术扩增得到纤维素酶高产菌株Bacillus sp．HY2-3以及原始菌株Bacillus sp．HY2的纤维酶基因chy2-3和chy2．经过克隆和序列分析表明。所得到的突变型和野生型纤维素酶基因编码区均为1500bp．同时发现．经过离子束诱变得到的高产菌株和野生菌株的纤维素酶基因序列存在差别．这些碱基突变引起氨基酸序列的改变有可能导致两个菌株纤维素酶产量上的不同．     

HCVNS2基因表达载体的构建及在E.coli中表达

PCR人含有丙肝病毒全长非结构蛋白的载体pBlueBac25中扩增出全长的NS2基因DNA片段,分别克隆到表达载体pQE30和转座载体pFasBacHTb的多隆位点（MCS）,PFastNS2通过转座插入穿梭载体Bacmid的表达盒;pQENS2转化JM109菌株,诱导表达出N端含有6个His的全长His的全长NS2蛋白,用Ni-NTA-agarose柱层纯化,获得提纯的全长NS2蛋白。     

AB_2型储氢材料表面吸氢的光电子谱研究

AB2 型金属间化合物是新型的储氢材料 ,对 Zr V2 和 Zr Mn2 表面吸氢前后进行了紫外光电子谱( UPS)测量 .吸氢前后的差谱中 ,发现 Zr V2 吸氢后 ,结合能在 8e V左右出现较宽的吸附氢诱导的光电子谱峰 ;而 Zr Mn2 吸氢后 ,在 5e V左右有一个明显的峰 .实验结果表明 :氢在 Zr V2 表面的吸附所成M—H键的电子态的结合能比 Zr Mn2 表面上的要大 ,与 Zr V2 吸氢能力较强是一致的     

S-桥图的色惟一性

由连接两个项点的s条内部不交的路组成的图中s－桥图，记作F（k1,k2,…ks）本文讨论了此类图的色性，给出了此类图色借书证一的一个充分条件，并证明了s- 2－桥图Ft(2,2,…，2，a,b）是色惟一的。     

光催化剂TiO_2超细粒子的制备及改进评述

Ti O2 超细粒子作为常用的光催化剂 ,在环境净化中日益受到重视 .本文对 Ti O2 超细粒子的作用机理 ,催化剂的制备及改进等方面进行论述