微流控芯片毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光检测氨基酸

建立了微流控芯片毛细管柱后扩散衍生激光诱导荧光检测氨基酸的方法。利用微流控芯片的二维平面结构特征,在分离通道末端增加支通道,通过扩散法引入柱后衍生试剂,避免了电压引入法对分离通道流型的影响,因而提高了分离效率。考察了支通道长度、衍生试剂液面高度、检测点位置对衍生结果的最优条件,考察了衍生试剂引入方法、催化剂种类、缓冲溶液种类对检测结果的影响。用20 mmol/L硼砂-NaOH(pH=10)溶液作为电泳缓冲溶液,与柱后衍生试剂1.0 mmol/L NDA+8.0 mmol/L 2-ME+35 mmol/L硼砂(pH 10.0)的30%(V/V)甲醇溶液反应,精氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸在不加任何添加剂的情况下可达到基线分离。本法用于板蓝根药材中主要游离氨基酸的分离检测,相对标准偏差小于4.4%(n=5),回收率为92.3%~98.6%。所测板蓝根药材中精氨酸和脯氨酸含量分别为14.97,8.02 mg/g。     

微流控芯片测定盐酸地芬尼多片中盐酸地芬尼多

利用微流控芯片非接触电导检测法测定片剂中盐酸地芬尼多的含量.采用1 mmol/L HAc+2 mmol/L NaAc(pH 4.5)为缓冲溶液,0.2 mmol/L 十二烷基硫酸钠(SDS)为添加剂,在分离电压为2.20 kV,进样时间为10 s下,1 min内实现组分快速分离和检测.盐酸地芬尼多线性范围为5～160 ...     

毛细管电泳法分析西维因等农药

 采用毛细管电泳法对西维因和 4种三嗪类农药进行了分离研究 ,考察了溶液的 pH值、胶束浓度和有机改性剂对分离的影响。以 2 0mmol/L硼砂 5 0mmol/L十二烷基硫酸钠 10 % (体积分数 )甲醇溶液 (pH 9 2 )为电泳缓冲液 ,采用压力进样方式 ,在 2 5kV恒压下进行分离 ,并在波长 2 2 5nm处检测 ,各组分可达到基线分离。在质量浓度为 30mg/L～ 2 0 0mg/L时 ,西维因标样的线性关系良好。该方法应用于西维因原药实际样品的测定 ,结果令人满意 ,西维因的加标回收率为 93 4 %～10 1 3% ,其峰面积的RSD为 2 5 9%。     

微流控芯片测定滴鼻液中的盐酸萘甲唑啉

建立了微流控芯片非接触电导检测法测定盐酸萘甲唑啉的分析方法。探讨了缓冲液种类、浓度,添加剂种类、浓度以及分离电压等因素对分离检测的影响。优化选择20 mmol/L H3BO3 10 mmol/L Tris(pH 7.5)缓冲溶液,2mmol/L-βCD添加剂,分离电压2.70 kV时,3 min内可实现盐酸萘甲唑啉的快速分离检测。在优化条件下,盐酸萘甲唑啉的线性范围为20~1.0×103μg/mL(r=0.995),检出限为5.0μg/mL(S/N=3),RSD为2.5%,加标回收率为98.3%~101%。     

离子液体作为添加剂的反向微乳毛细管电动色谱分析化妆品中的糖皮质激素

建立了以离子液体为添加剂的反向微乳毛细管电泳(IL-MEEKC)法分离测定化妆品中氢化可的松、泼尼松和醋酸氢化可的松3种糖皮质激素的方法.微乳毛细管电泳的最佳缓冲体系组成为:2.4% SDS+6.6%正丁醇+0.5%正辛烷+35 mmol/L BMIM-BF4+20 mmol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH 2.2);运行电...     

高效毛细管电泳法同时分离测定化妆品中7种防腐剂

建立了毛细管电泳(CE)法同时分离测定化妆品中7种防腐剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氯苯甘醚、辛酰羟戊酸、脱氢乙酸钠)的方法。考察了添加剂种类及浓度,磷酸盐缓冲液pH值及分离电压对分离的影响。结果表明:在pH 8.0的20 mmol/L磷酸盐缓冲液中添加10 mmol/L磺丁基-β-环糊精,以及20 kV分离电压下,7种防腐剂可在5 min内实现基线分离。在5～200 mg/L质量浓度范围内,7种防腐剂呈良好线性,且相关系数(r)为0.990 7～0.998 9,检出限为1.23～4.30 mg/L,迁移时间的相对标准偏差(RSD)不大于1.3%,样品回收率为95.4%～103%。该方法准确、简单、高效、实用,可用于实际样品中防腐剂的测定。     

微流控芯片对盐酸利多卡因注射液中盐酸利多卡因的测定

建立了微流控芯片非接触电导检测法测定盐酸利多卡因注射液中盐酸利多卡因含量的方法。探讨了缓冲液种类和浓度、添加剂种类和浓度、分离电压和进样时间等因素对分离检测的影响。优化并选择1.0mmol/L HAc-2.0 mmol/L NaAc(pH 4.5)为缓冲溶液,1%乙醇为添加剂,分离电压为2.4 kV,进样时间为10 s,2 min内可实现盐酸利多卡因的快速检测。在优化实验条件下,盐酸利多卡因的线性范围为20~250mg/L(r=0.996),检出限(S/N=3)可达5.0 mg/L,RSD为1.7%,加标回收率为97%~99%。方法简便快速、重复性好,适用于药品生产的质量控制。     

胶束毛细管电泳同时分离测定葛根及其制剂中的5种异黄酮

建立了一种新的胶束毛细管电泳方法,用于同时分离检测葛根素、大豆苷、 3’-甲氧基葛根素、 3’-羟基葛根素和4’-甲氧基葛根素5种异黄酮。优化的实验条件为：以40 mmol/LNa₂B₄O₇+4 mmol/L NaOH(pH 9.62)为运行缓冲溶液,5%(V/V)甲醇和14 mmol/L的十二烷基磺酸钠(SDS)为添加剂,分离电压22 kV,检测波长250 nm,进样时间5 s。在优化条件下,葛根素、大豆苷、 3’-甲氧基葛根素、 3’-羟基葛根素和4’-甲氧基葛根素5种异黄酮可在14 min内完成分离检测,各目标组分的峰面积与其浓度之间的线性关系良好。该方法用于葛根及其制剂中5种异黄酮的定量分析,加标回收率范围为95.6%～104.8%,相对标准偏差不超过4.0%。     

高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分氯噻酮对映体

应用反向高效液相色谱,以羟丙基-β-环糊精(HP--βCD)作为手性流动相添加剂,拆分了氯噻酮(Chlorthalidone)对映体。对主要的影响因素如羟丙基-β-环糊精浓度、流动相pH值、三乙胺(TEA)、甲醇、柱温、流速等进行了系统研究,建立了羟丙基-β-环糊精流动相添加剂法拆分氯噻酮对映体的方法。使用HarbonLichrospher-C18色谱柱(5μm,150 mm×4.6 mm),流动相为V(甲醇)∶V(水相)=20∶80(水相含30 mmol/L HP--βCD0、.1 mol/L Na2HPO4、体积分数2%的TEA、pH5),流速为0.8 mL/min,室温下拆分,氯噻酮对映体可得到良好分离。     

毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光测定动物组织中卡那霉素类抗生素

采用毛细管电泳柱后衍生激光诱导荧光测定3种卡那霉素类抗生素。研究了在反向电渗流条件下HAc-NaAc缓冲液酸度和浓度对卡那霉素类抗生素分离的影响,研究了Na2B4O7缓冲体系和柱后衍生试剂萘二醛/2-巯基乙醇浓度对检测信号的影响。采用50 mmol/L HAc-NaAc(pH5.0) 0.5 mmol/L CTMAB溶液为分离缓冲液,样品在-15 kV下分离,与柱后衍生试剂1.0 mmol/L NDA 8.0 mmol/L 2-ME 35 mmol/LNa2B4O7(pH10.0)的30%(V/V)甲醇溶液反应,激发诱导荧光检测卡那霉素类抗生素检出限为3.6×10-5~5.2×10-5g/L;本方法用于动物组织中卡那霉素类抗生素残留检测,相对标准偏差小于7.2%;回收率为90.2%~95.3%(n=4)。     

1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生试剂的制备及其在高效液相色谱-质谱法测定糖类化合物中的应用

以1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)作为柱前衍生试剂,建立了简单、灵敏的糖类组分的反相高效液相色谱测定方法。NMP与糖在氨为催化剂的条件下,于70 ℃下反应可获得稳定的衍生产物。在Hypersil ODS 2反相色谱柱上,实现了8种单糖的基线分离。衍生物线性相关系数均大于0.9985,检出限为0.58～1.1 pmol。利用柱后在线串联质谱的电喷雾电离正离子模式监测,获得了各组分的质谱定性及裂解规律,特别是m/z 473的特征碎片离子可作为单糖NMP衍生物的判定依据。与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)相比,NMP对糖的衍生化具有灵敏、简单、质谱裂解规律性强、重现性好等优点。该方法用于测定油菜花粉多糖中的单糖组成,结果令人满意。     

高效液相色谱法同时测定生物质乳酸发酵液中有机酸及糖类化合物

建立了高效液相色谱(HPLC)同时测定生物质乳酸发酵液中有机酸及糖类的分析方法。使用Bio-Rad Aminex HPX-87H色谱柱,以5 mmol/L的H2SO4为流动相,在柱温55 ℃,流速0.6 mL/min条件下,采用示差折光检测器进行检测。结果表明,该方法可在17 min内实现发酵液中各种有机酸和糖类化合物等的完全分离与定量,6种有机酸和3种糖类化合物在0.15～5.19 g/L范围内的线性关系良好,回归方程的线性相关系数在0.9998以上。将该法用于米根霉发酵液的检测,两个水平的加标回收率为96.91%～103.11%,相对标准偏差(n=6)为0.81%～4.61%。该法适用于微生物发酵液中多种有机酸和糖类的快速、高效分离和定量测定。     

天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用

建立了一种快速、高效测定天冬酰胺合成酶B(AS-B)酶活性的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。酶反应体系中的氨基酸经2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,通过RP-HPLC测定酶反应体系前后底物及产物的变化来分析酶的活性。采用的色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 6.2)-乙腈(体积比为15:85)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长365 nm,于6 min内实现了各组分的基线分离。通过该方法测定反应动力学参数进行AS-B的抑制定量分析。将已知AS-B抑制剂L-谷氨酸-γ-甲酯作用于酶反应体系,测得的抑制剂的抑制常数与文献值相接近,证明该方法可用于AS-B抑制剂的筛选。     

葡萄糖及其衍生物的直接紫外检测毛细管区带电泳研究

 发展了在 195nm波长下直接检测葡萄糖及其衍生物的毛细管区带电泳方法。在未涂渍石英毛细管中 ,以 5 0mmol/LNa2 HPO4 5 0mmol/LNaH2 PO4 为缓冲液体系 (接近生理条件 pH 7 4) ,分离了葡萄糖及其衍生物 (葡萄糖胺、N 乙酰葡萄糖胺和葡萄糖酸钠 )。在各自相应的浓度范围内 ,峰面积与样品浓度之间呈现良好的线性关系。方法简单、快速、重复性好 ,为研究葡萄糖及其衍生物与凝集素的相互作用奠定了分离检测的基础。     

Protein-bound glutathione measurement in cultured cells by CZE with LIF detection

Protein modification due to S-glutathio(ny)lation, usually a reversible process in intact cells, arises interest as a possible mode of regulatory events that may potentially modify a large number of cellular processes. However, since less than 1% of the total protein is S-thiolated in resting cells, high sensitivity methods are required for its evaluation. We set up a new method by CE with LIF detection that allows to measure all forms of intracellular GSH involved in the process. For total and reduced glutathione, cell lysates were rapidly derivatized by 5-iodoacetoamidofluorescein (5-IAF), a selective reagent which traps thiol groups, thus minimizing auto-oxidation. Derivatized samples were separated in a 47 cmx75 microm id capillary by using 7 mmol/L sodium phosphate at pH 11.6. For the evaluation of S-glutathio(ny)lation, intracellular proteins from cell lysates were precipitated and washed to eliminate free GSH. After protein resuspension with NaOH and reduction treatment with tri-n-butylphosphine (TBP), the freed GSH was dried in a vacuum concentrator and directly dissolved in the derivatization mixture. GSH-IAF adduct was detected in a 6 mmol/L sodium phosphate, 3 mmol/L boric acid, and 75 mmol/L N-methylglucamine run buffer in less than 5 min. The high sensitivity ensured by 5-IAF use and sample concentration, allowed to quantify GSH at levels as low as 5 nmol/L, value suitable for the evaluation of protein S-glutathio(ny)lation. The method suitability was checked both in HUVEC and ECV304 cultured cells.     

高效液相色谱-电化学阵列检测器检测烟草中的绿原酸等六种次生代谢产物

建立了一种利用反相高效液相色谱-电化学阵列检测器同时检测烟草中主要次生代谢产物的方法。在Hypersil BDS C-18(4.6 mm×200 mm)色谱柱上,以30 mmol/L磷酸二氢钠（pH 3.5）-5%~70%(体积分数)乙腈(含0.25 mmol/L十二烷基磺酸钠)进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为30 ℃。电化学阵列检测器的检测电势依次为:-20,140,210,310,400,450,490,730,800,900 mV时,可以较好地分离和检测烟草中常见的次生代谢产物绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、莨菪葶、芦丁和烟碱。该方法的相对标准偏差为0.71%～15.31%,回收率为52.0%～85.2%,各种次生代谢产物的检测限为0.2~2 ng;进样量在20～500 ng范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.9910～0.9998;具有较高的准确度和精确度。方法简便,可应用于烟草中次生代谢产物的检测。     

离子色谱-柱切换技术同步测定饮料中的三氯蔗糖、葡萄糖、果糖和蔗糖

建立了一种离子色谱-柱切换-安培检测技术同步测定饮料中三氯蔗糖、葡萄糖、果糖和蔗糖的方法。以CarboPac PA10阴离子交换保护柱和分析柱进行分离,用水和250 mmol/L NaOH梯度淋洗,脉冲安培检测。弱保留糖类在25 mmol/L NaOH流动相淋洗下分离检测,通过柱切换将保护柱切换至分析柱后,同时切换至250 mmol/L NaOH淋洗,三氯蔗糖仅通过较短的保护柱分离,4种糖类能够得到同步检测。4种糖类在0.01~20 mg/L范围内有良好的线性关系和较低的检出限,重复性好,样品测定的回收率分别为90.38%~102.88%（三氯蔗糖）、95.56%~102.75%（葡萄糖）、101.66%~114.33%（果糖）和105.03%~106.49%（蔗糖）。该方法可广泛应用于食品中强保留物质的测定。     

Determination of Amino Acidsas Their N-Hydroxy-succinimidyl-3-indolylacetate Derivatives by Reversed-phase HPLC

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓａｓＴｈｅｉｒＮ┐Ｈｙｄｒｏｘｙ┐ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ┐３┐ｉｎｄｏｌｙｌａｃｅｔａｔｅＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｂｙＲｅｖｅｒｓｅｄ┐ｐｈａｓｅＨＰＬＣ＊ＱＩＵＰｅｉ－ｈｏｎｇ＊＊（Ｄｅｐａｒｔｍｅ...     

纳米纤维固相萃取-高效液相色谱法测定血浆中的5-羟色胺

基于纳米纤维的富集作用,建立了血浆中5-羟色胺(5-HT)的柱前衍生高效液相色谱-电化学检测(HPLC-ECD)分析方法.用10%(v/v)高氯酸溶液沉淀血浆蛋白,离心后取上清液,用0.1 mol/L 的四苯硼酸钠溶液调节pH值至8.5,加入衍生剂邻苯二甲醛溶液于30 ℃衍生4 min,经纳米纤维固相萃取柱净化富集后,...     

Thiol redox status evaluation in red blood cells by capillary electrophoresis-laser induced fluorescence detection

Thiols and in particular glutathione (GSH) play a central role in human metabolism, including the detoxification of xenobiotics, cell homeostasis, radioprotection, and antioxidant defence. Here, a new method is provided for the measurement of reduced and total forms of thiols in red blood cells. In order to minimize oxidation of reduced thiols, a water erythrocyte lysis (15 min at 4 degrees C) was performed followed by a protein precipitation step with acetonitrile. The supernatant was rapidly derivatized with 5-iodoacetoamidefluorescein that trapped thiol groups, thus minimizing auto-oxidation. Derivatized samples were separated in a 57 cm x 75 microm ID capillary by using 5 mmol/L sodium phosphate, 4 mmol/L boric acid as electrolyte solution with 75 mmol/L N-methyl-D-glucamine at pH 11.0. Under these conditions, cysteinylglycine (CysGly), cysteine (Cys), glutathione, and gamma-glutamylcysteine (GluCys) were baseline-resolved in approximately 4 min. Precision tests showed a good repeatability of our method both for migration times (coefficient of variation CV < 0.8%) and areas (CV < 3.3%). Furthermore, a good reproducibility of intrassay and interassay tests was obtained (CV < 5% and CV < 8%, respectively). The method was employed to investigate the effect of acidic precipitation on intracellular thiol concentration. Our data suggest that sample acidification causes a modification of the measured redox thiol status due to the development of a pro-oxidant environment; moreover, the thiol redox status of red blood cells was evaluated in 22 healthy volunteers.