SMS沉默对HepG2细胞炎症和CD14表达的影响

肝细胞的炎性损伤与全身性炎症引起的多器官功能障碍的发生相关,LPS可致全身性炎症,在炎症发生过程中,CD14是LPS的膜受体,可通过激活NF-κB诱导炎症相关因子的表达,CD14主要分布于细胞膜脂筏部位,脂筏是由鞘磷脂(SM)和胆固醇相互锚定,并与相关蛋白质组成的一种微空间结构,因此降低SM的合成,会降低SM在脂筏部位的含量,进而改变脂筏结构及CD14在脂筏部位的分布,最终影响炎症的发生。本研究利用干扰载体pSUPER-SMS沉默HepG2细胞鞘磷脂合酶(SMS)的表达,并检测SM在脂筏部位的含量及CD14和TNF-ɑ的表达,结果显示SMS1和SMS2的mRNA水平表达和酶活都有显著下降(P<0.001,n=3),SM在脂筏部位含量和CD14的表达均有显著降低(P<0.001,n=3),导致LPS所致HepG2细胞TNF-ɑmRNA水平的表达下降。可见SMS可通过改变CD14在脂筏部位的含量,最终影响和炎症发生相关分子TNF-ɑ的表达。     

牛磺酸通过MST1-Akt通路诱导人结直肠癌细胞自噬的初步研究

探讨牛磺酸(Tau)对结直肠癌细胞自噬的影响及初步机制。用牛磺酸处理结直肠癌HT-29和SW480细胞,荧光显微镜(MDC染色)检测细胞自噬体形成,Western blotting分析细胞中自噬及MST1-Akt通路相关蛋白表达。MDC染色显示,40 mmoL处理组和80 mmoL处理组荧光标记自噬颗粒较Control组明显增多,并出现大量自噬体和自噬溶酶体,即40～80 mmoL Tau能诱导自噬小体形成;Western Blotting结果显示,随着Tau浓度增加,HT-29和SW480细胞中MST1,Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达也呈显著性增加(P0.01),而HT-29细胞Akt蛋白表达及p-Akt(Ser473)水平则呈显著性降低(P0.01);且MST1蛋白过表达能增加HT-29细胞Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白表达,降低Akt蛋白表达;Tau可能通过MST1-Akt通路增强结直肠癌细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达,诱导自噬。     

脂多糖对小鼠肝脏鞘磷脂合酶2表达的影响

LPS在细菌性感染所致的全身性炎症反应中具有重要的作用,而鞘磷脂(SM)参与了炎症反应的发生。催化SM从头合成的关键酶是SMS1和SMS2,其中SMS2和炎症反应最为密切。目前,由LPS所致的小鼠全身性炎症反应中,在小鼠肝脏部位SMS2的表达情况未见报道。为了阐明这一情况,本研究利用10mg/kg的LPS处理BABC/L小鼠18h,取小鼠肝脏进行HE染色,并提总RNA和总蛋白,分别利用实时荧光定量PCR和Western blot研究SMS2在mRNA和蛋白水平的表达情况,并利用薄层层析(TLC)测定对其酶活的影响。研究发现,和对照组相比,实验组SMS2的mRNA和蛋白水平均有显著增加(P<0.05,n=6),分别增加了116%和65.8%,而在酶活水平亦有非常显著增加(P<0.001,n=6),增加了64.3%。由此可见SMS2在LPS所致的炎症反应中起到重要作用,其酶活增加是LPS所致炎症反应所必要的,这将对炎症的治疗提供新的靶点,为新的抗炎药物的开发提供理论依据。更多还原     

乌药根挥发油的体外抗肿瘤活性及其有效成分分析

采用MTT法检测乌药根挥发油对7种人癌细胞系的细胞毒性以评价其体外抗肿瘤作用.利用乙醚萃取法、硅胶柱色谱法及GC(气相色谱法)和GC-MS(气质联用)法对乌药根挥发油的成分进行分离鉴定,并结合MTT法对分离得到的成分进行抗肿瘤活性筛选.结果表明:乌药根挥发油对所试肿瘤细胞均表现出明显的细胞毒性,特别是对人食道癌Eca-109细胞和人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用尤为明显(IC50=24.8μg/mL);经多种方法从乌药根挥发油中分离、鉴定并筛选到的抗肿瘤有效成分为吉马酮.     

逆转录病毒载体导入重组ICAD和ICAD-DM对STS诱导大鼠C6细胞凋亡的影响

为了观察caspase依赖的脱氧核糖核酸酶(CAD)及其抑制剂ICAD对星形孢菌素(STS)诱导的C6细胞凋亡的影响,用含有ICAD/DFF45和caspase抗性的ICAD/DFF45突变体ICAD DM基因的复制缺陷型逆转录病毒载体转染包装细胞,并用产生的病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞株C6,筛选获得稳定表达目的蛋白的细胞.结果发现STS可显著诱导ICAD组的C6细胞出现DNA凋亡梯带,而ICAD DM组不出现DNA凋亡梯带;与ICAD DM组相比,STS对ICAD组MTT代谢的抑制作用更强(P<0.05);透射电镜观察显示ICAD DM组的细胞核形态改变弱于ICAD组.表明ICAD/DFF45的切割应在CAD/DFF40的激活中占主导地位,抑制ICAD/DFF45的切割并不能阻止凋亡的发生,但可延迟细胞死亡的速度,对染色质凝聚和核固缩的出现亦有一定抑制作用.     

大鼠青春期同伴关系对青年期焦虑样和抑郁样行为的影响

探索大鼠青春期同伴关系对青年期焦虑样和抑郁样行为的影响. 将25只出生20d的清洁级雄性SD大鼠随机分成3组, 单笼组(n=8), 成双组(n=8), 群体组(n=9), 饲养40d后, 进行糖水偏好、高架迷宫和强迫游泳实验. 结果显示: 糖水偏好实验中, 3组大鼠的糖水消耗百分比无明显差异(P>0.05); 高架迷宫实验中, 成双组和群养组大鼠进入开放臂时间较单笼组明显减少(P< 0.01); 强迫游泳实验中, 单笼组大鼠不动时间较成双组和群养组明显延长(P<0.01). 表明青春期孤独环境大鼠容易产生抑郁样行为, 而同伴和群体饲养环境由于竞争压力容易产生焦虑样行为.     

壬基酚异构体对小鼠Sertoli TM4细胞内黏着连接、雄激素结合蛋白和抑制素B的影响

研究了壬基酚异构体[4-(1-乙基-1-甲基-己基)酚](4-NP65)对小鼠睾丸Sertoli TM4细胞黏着连接相关分子表达和分泌雄激素结合蛋白(ABP),抑制素B(Inhibin B)的作用。不同浓度4-NP65(0、0.1、1、10、20、40μmol·L-1)作用于TM4细胞24h,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR测定TM4细胞波形蛋白(Vimentin),N-钙黏着蛋白(N-cadherin),黏着斑蛋白(Vinculin)mRNA的表达情况;Elisa法测定细胞上清液中ABP和Inhibin B的含量。结果4-NP65在低剂量(0.1、1、10、20μmol·L-1)对细胞存活率无显著影响,在高剂量(40、80、100μmol·L-1)能显著降低TM4细胞存活率(P<0.01);4-NP65剂量依赖性增加Vimentin mRNA表达,降低Vinculin、N-cadherin mRNA的表达;4-NP65呈剂量依赖性降低ABP的分泌量,与对照组比较,在20、40μmol·L-1处理组有显著差异(P<0.05),而Inhibin B的含量在20、40μmol·L-1 4-NP65处理组有显著降低(P<0.05)。4-NP65对小鼠Sertoli TM4细胞具有生殖毒性作用,黏着连接是其作用的可能靶点之一,4-NP65可能通过影响TM4细胞黏着连接相关分子的表达和TM4细胞分泌ABP、Inhibin B引起雄性生殖系统损伤。     

无痛分娩过程中的转剖宫产指征分析

无痛分娩技术能有效缓解生产疼痛, 降低剖宫产率, 在临床得到广泛推广, 然而目前并不完全清楚无痛分娩对母婴是否足够安全, 也没有研究调查无痛分娩过程中转剖宫产指征的情况. 本文通过分析无痛分娩过程中转剖宫产的常见临床指征, 探讨无痛分娩对母婴的可能影响. 采用麦迪斯顿麻醉系统收集宁波大学医学院附属医院2018年1月至2019年3月入院进行阴道分娩的产妇的临床资料. 将进行无痛分娩产妇作为观察组, 自然分娩产妇作为对照组, 比较两组分娩过程中转剖宫产率及转剖宫产临床指征比率的异同. 在分娩过程中, 观察组(1844例)的转剖宫产率(6.29%)远远低于(P<0.0001, 2=288.75)对照组(2514例)的转剖宫产率(32.10%). 进一步分析发现, 观察组的头位难产指征比率(73.28%, n=85)、宫内感染指征比率(42.24%, n=49)以及胎儿宫内窘迫指征比率(37.07%, n=43)均显著高于(P<0.01, 2=6.68; P<0.0001, 2=36.64; P<0.0001, 2= 188.92)对照组的相应指征比率(60.84%, n=491; 3.84%, n=31; 14.37%, n=116). 与先前的报道一致, 使用无痛分娩技术的确可以显著降低产妇在分娩过程中转剖宫产的比率, 然而, 无痛分娩过程中转剖宫产的头位难产、宫内感染或胎儿宫内窘迫指征的可能性风险也显著提高.     

牛磺酸通过调控AKT/GSK-3β通路抑制结直肠癌细胞侵袭转移

观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)在牛磺酸(Tau)抑制结直肠癌(CRC)侵袭转移中的作用,探讨Tau抑制结直肠癌侵袭转移分子机制。选用人结直肠癌SW480和HT29细胞为研究对象,用浓度为40～200 mmoL Tau处理细胞;Transwell小室和细胞划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western blot检测细胞EMT标志性蛋白(E-cadherin, N-cadherin, Vimentin),基质金属蛋白酶2/7(MMP2/7)和AKT/GSK-3β通路相关蛋白水平。与正常对照组比较,Tau可浓度依赖性抑制CRC细胞侵袭和迁移,上调CRC上皮标志物E-cadherin表达,下调EMT间质标志物N-cadherin, Vimentin和MMPs表达;降低AKT和p-AKT水平,提高PTEN,GSK-3β及p-GSK-3β表达水平(P<0.05)。与p-EGFP-GSK-3β或Tau组比较,p-EGFP-GSK-3β+Tau组细胞迁移和侵袭数量有显著性降低(P<0.01);与Tau组或p-EGFP-GSK-3β组比较,p-EGFP-GSK-3β+Tau组E-Cadherin、GSK-3β蛋白表达有显著升高(P<0.01),而N-Cadherin, Vimentin,β-Catenin, MMP2/7和AKT蛋白表达均有显著降低(P<0.01)。牛磺酸可通过调控AKT/GSK-3β通路抑制结直肠癌细胞侵袭转移。     

大蒜素对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响及机制

探讨大蒜素(DT)对人上皮性卵巢癌SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制。用人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:①正常对照组;②DT组:于培养基中加入DT(终浓度分别为5、10、20、40μg·mL-1)分别作用细胞24、48和72h;③顺铂(DDP)组(5μg·mL-1);④DT+DDP组(20μg·mL-1 DT和5μg·mL-1 DDP)。MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白表达。与正常对照组比较,DT组SKOV-3/DDP细胞增殖抑制率与凋亡率均有显著的增加(P0.05),且作用呈剂量和时间依赖性,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调(P0.05);与DT或DDP组比较,DDP+DT组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P0.05),且Bax mRNA及蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调的程度大于单用组(P0.05)。大蒜素对SKOV-3/DDP细胞有显著的抑制增殖和促凋亡的作用,增加SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与大蒜素调控Bax/Bcl-2蛋白表达有关。     

ELMO3在结肠癌组织中的表达

为了检测吞噬和运动蛋白家族中的ELMO3在结肠癌组织中的表达情况,并探讨其与结肠癌临床病理参数间的相关性及意义,本研究应用免疫组化法检测了组织芯片中75例结肠癌及相匹配的癌旁正常结肠组织中ELMO3蛋白的表达水平。结果显示,ELMO3在结肠癌组织中的阳性表达率显著高于对应的癌旁组织(P<0.001);不同性别、年龄和肿瘤部位的ELMO3表达水平均无显著性差异(P>0.05);不同肿瘤大小、结肠癌分化程度、浸润深度和远处转移的结肠癌组织中的ELMO3表达水平存在显著性差异(P<0.05)。且ELMO3的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床TNM分期均呈正相关性(R=0.386、R=0.608和R=0.760,P<0.05),即随着肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床分期的增高,ELMO3的表达水平也增高。尤其是ELMO3在发生淋巴结转移的结肠癌组织中细胞染色强度显著高于未发生淋巴结转移的结肠癌组织中细胞染色强度,其差异具有统计学意义(P<0.05)。这些结果表明,ELMO3在结肠癌组织中高表达,其表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床TNM分期相关,提示ELMO3表达水平与结肠癌生物学行为密切相关,有望成为结肠癌侵袭转移治疗的有效靶点。     

乌骨鸡黑色素的体外抗氧化活性及其对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

通过测定乌骨鸡黑色素对DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基清除率,研究乌骨鸡黑色素的体外抗氧化能力,同时建立H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞氧化损伤模型,MTT法测定HUVEC细胞存活率,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,研究乌骨鸡黑色素对HUVEC细胞氧化损伤的保护作用。结果表明:乌骨鸡黑色素清除DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.18,0.40,2.37 mg·mL~(-1)。乌骨鸡黑色素可降低H_2O_2诱导损伤的HUVEC细胞LDH漏出量和MDA含量,提高SOD活性,并呈一定浓度依赖性。因此,乌骨鸡黑色素具有一定的体外抗氧化活性,可保护H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤。     

牛磺酸通过上调MST1蛋白表达诱导宫颈癌细胞凋亡

为观察牛磺酸(Tau)对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用及初步机制。以人宫颈癌细胞系SiHa细胞为对象,MTT比色法检测细胞增殖活性,将pEGFP-N1-MST1重组质粒转染SiHa细胞,流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测细胞中MST1,Bcl-2及Bax蛋白水平。结果显示:Tau能抑制SiHa细胞增殖并诱导其凋亡;上调SiHa细胞MST1及Bax蛋白表达(P<0.01),下调Bcl-2表达水平(P<0.01),且MST1过表达能增强Tau对凋亡的诱导作用(P<0.01)。结果表明牛磺酸通过上调MST1蛋白表达,进而引起Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白下调,诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡。     

牛磺酸对心肌细胞缺氧/复氧凋亡的保护及机制

为探讨牛磺酸对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的细胞保护作用及分子机制。采用大鼠乳鼠心肌细胞制备缺氧/复氧(H/R)损伤模型,用基因转染及siRNA靶向基因沉默技术,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA表达、Western blot检测蛋白表达。结果显示:与H/R组比较,3个牛磺酸保护组的心肌细胞凋亡率均有显著下降(P0.05);随着牛磺酸浓度的增加,H/R心肌细胞中Bcl-2蛋白表达逐渐升高(P0.05),而PUMA、CHOP、Bax、Grp78和Caspase-3蛋白表达则逐渐下降(P0.01);牛磺酸对心肌细胞转染PUMA过表达有较强的下调作用;靶向沉默PUMA后细胞凋亡率呈显著下降,靶向沉默CHOP后PUMA表达下调(P0.05)。结果表明牛磺酸对心肌细胞H/R导致的凋亡有较好的抑制作用,其机制可能与牛磺酸能下调CHOP表达,进而抑制促凋亡蛋白PUMA表达有关。     

离子色谱-柱后光化学衍生荧光检测法测定保健品中的核黄素

采用离子色谱（IC）和光化学衍生荧光检测（PCF）联用技术,建立了保健品中核黄素的分析方法.色谱柱选用Dionex Ion Pac AG11-HC保护柱(4 mm×50 mm)和Ion Pac AS11-HC分析柱(4 mm×250 mm),淋洗液为40 mmol·L^-1 NaOH. 待测物通过自制光化学反应器（254 nm）在线衍生,核黄素转化为强荧光物质,从而以荧光检测器检测.在优化的实验条件下,对50 mg·L^-1的核黄素溶液平行测定6次的保留时间和峰面积相对标准偏差分别为0.6%和2.1%（n=6）.核黄素的浓度在10~100 mg·L^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,线性相关系数r =0.993,检出限（S/N=10）为0.5 mg·L^-1,回收率为（101.46±2.51）%.     

茶叶糖蛋白对树突状细胞表面分子表达的影响

为探讨茶叶糖蛋白对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)表面分子表达的影响,采用细胞因子诱导法,以贴壁法获得贴壁单核细胞,添加重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白细胞介素4(rm IL-4)进行体外诱导培养,倒置显微镜动态观察细胞形态的变化;采用MTT法,观察不同浓度的     

运动和饮食干预对身体形态和成分以及心血管疾病风险因素的影响

选取30~65岁超重(24kg·m-2≤BMI<28kg·m-2)或肥胖(BMI≥28kg·m-2)男性45名, 受试者被随机分为有氧运动组(n=23)和饮食改善组(n=22)进行为期12周的干预. 结果显示, 有氧运动组和饮食改善组的身体形态指标均得到显著改善. 但与有氧运动组相比较, 饮食改善组的腹围和臀围下降更为明显; 饮食改善组的脂肪和肌肉含量均显著下降. 有氧运动组的脂肪含量也显著下降, 但肌肉含量未有显著变化. 在心血管疾病风险改善方面, 饮食改善组的大部分指标值显著下降或有下降趋势; 而在有氧运动组, 仅发现高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯值有变化. 表明控制饮食减体重可大幅改善超重和肥胖男性的身体形态, 降低脂肪含量和心血管疾病风险; 而运动减体重, 可在降低体内脂肪含量的同时, 不减少或者增加体内肌肉含量.     

新疆双峰驼乳清蛋白组分对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的:探讨新疆双峰驼乳清蛋白组分对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定新疆双峰驼乳蛋白组分对HeLa细胞增殖的抑制作用;荧光染色检测HeLa细胞凋亡的形态变化;倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察HeLa细胞的形态变化;用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率、线粒体膜电位的变化.结果表明:新疆双峰驼乳清蛋白组分TR35可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01);倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察到典型的凋亡特征,荧光显微观察到凋亡小体;Annexin-Ⅴ/PI双染检测出现早期凋亡细胞;线粒体膜电位去极化,并将细胞周期阻滞在S期.结论:新疆双峰驼乳清蛋白组分TR35可抑制HeLa细胞的增殖和诱导细胞凋亡,TR35组分诱导细胞凋亡的途径可能与线粒体通路有关.     

TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨

探讨TEAD4表达与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系。用免疫组化MaxVision法结合光密度分析检测目标蛋白的组织表达。通过真核表达质粒pCMV3-TEAD4转染子宫颈鳞癌SiHa细胞以获得TEAD4基因过表达;应用Western blotting法检测细胞中目标蛋白的表达。分别利用CCK-8实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖和侵袭能力。子宫颈鳞癌组织中TEAD4平均表达水平(0.186±0.0355)显著高于正常宫颈上皮组(0.0494±0.0105,P<0.001),且TEAD4的表达与子宫颈鳞癌的淋巴结转移、脉管浸润和宫旁浸润有关(P<0.05),与子宫颈鳞癌的患者年龄、肿瘤大小、和分化程度无关。TEAD4的表达与MMP9的表达呈正相关关系(r=0.394,P<0.01)。TEAD4基因转染后的宫颈鳞癌细胞的增殖能力和侵袭能力显著增强。TEAD4基因转染诱导宫颈鳞癌细胞P-ERK1/2和MMP9蛋白表达上调,而ERK抑制剂(U0126)能显著抑制TEAD4诱导的MMP9上调。TEAD4高表达于子宫颈鳞癌,促进子宫颈鳞癌增殖和侵袭能力,其机制可能与TEAD4激活ERK1/2-MMP9信号通路有关。     

S~6上仿Blaschke张量的特征值为常数的超曲面

设x:Mn→Sn+1是(n+1)-维单位球面上不含脐点的超曲面,在Sn+1的Mbius交换群下浸入x的四个基本不变量是:一个黎曼度量g称为Mbius度量;一个1-形式Φ称为Mbius形式;一个对称的(0,2)张量A称为Blaschke张量和一个对称的(0,2)张量B称为Mbius第二基本形式。对称的(0,2)张量D=A+λB也是Mbius不变量,其中λ是常数,D称为x的仿Blaschke张量,李海中和王长平研究了满足条件:(ⅰ)Φ=0;(ⅱ)A+λB+μg=0的超曲面,其中λ和μ都是函数,他们证明了λ和μ都是常数,并且给出了这类超曲面的分类,也是在Φ=0的条件下D只有一个互异的特征值的超曲面的分类。对S6上满足如下条件的超曲面进行了分类:(ⅰ)Φ=0;(ⅱ)对某常数λ,D具有3个互异的常数特征值。